一种PCR荧光检测仪的制作方法

本发明涉及检测装置技术领域，尤其涉及一种PCR荧光检测仪。

背景技术：

PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应)技术是一种在生物体外放大扩增特定DNA(deoxyribonucleic acid，脱氧核糖核酸)序列的分子生物学技术。PCR技术具有特异性强、灵敏度高、纯度要求低以及简便、快速的特点，因而被广泛应用于分子生物学检测及分析。

一般的，PCR技术扩增DNA的过程为：在合适的缓冲溶液及耐热DNA聚合酶的混合体系中，DNA在大约95℃的温度下发生高温解链反应，即DNA双链间的氢键断裂，形成2条互补的单链DNA；单链DNA在具有方向性和特异性的寡核苷酸链作为引物介导下发生退火(复性)反应，即将单链DNA的温度迅速降至引物的设计温度值(一般大约为50-65℃)的范围内，单链DNA与引物遵循碱基互补配对原则结合；迅速将温度再升高到72℃左右，单链DNA与引物结合后发生延伸反应，DNA聚合酶自引物3’端开始结合脱氧核苷三磷酸，根据模板上的相应碱基，以互补配对原则顺次延伸，从而形成一条新的与模板互补的DNA片段。经过PCR技术扩增后，初始DNA分子数量增加一倍，是为一个循环；倍增后的DNA分子继而成为下一个循环的模板，如此下去，经过30-40个循环之后，DNA分子数目将放大至初始值的近10⁹倍。

目前，现有的PCR检测仪能够同时对多个PCR反应管中的PCR反应液扩增。在PCR检测仪扩增DNA时，样品孔内放置已盛装PCR反应液的PCR反应管，卤钨灯作为照射光源。卤钨灯发出的灯光通过五色光源滤光片后照射到每个PCR反应管上，每个PCR反应液中的荧光分子受到卤钨灯灯光的激发会产生荧光，荧光通过五色荧光滤光片后到达CCD(Charge-coupled Device，电荷耦合元件)相机，由CCD相机将荧光信号转换为电信号，进而判断PCR扩增DNA后的产物总量。由于每个PCR反应管到卤钨灯的距离不同，越靠近卤钨灯中心的PCR反应管，其内部的荧光分子就越容易受到激发，荧光就越强，而远离卤钨灯中心的PCR反应管，其内部的荧光分子的荧光就越弱，因而同一次PCR扩增DNA后的荧光检测存在差异。另外，在PCR检测仪扩增DNA过程中，需要不断迅速升温、降温，而升温、降温的时间较长，这大大延长一个扩增循环的时间，进而降低扩增效率。

技术实现要素：

本发明提供一种PCR荧光检测仪，以解决现有PCR检测仪检测时间较长的问题。

本发明提供一种PCR荧光检测仪，所述检测仪包括电路装置以及设置在所述电路装置上表面上的光路装置；

所述光路装置的内部具有中空内腔，所述光路装置的顶部具有与所述中空内腔相连通的第一通孔；

所述光路装置的顶部设置有60℃加热板，所述60℃加热板的中心设置有第二通孔；

所述中空内腔中设置有95℃加热板，所述95℃加热板的中心设置有第三通孔；

所述第一通孔、所述第二通孔和所述第三通孔的中心在同一直线上。

优选地，所述电路装置包括检测电路板、光发射器和光接收器，所述光发射器与所述光接收器设置在所述检测电路板上，且所述光发射器与所述检测电路板中心之间的连线垂直于所述光接收器与所述检测电路板中心之间的连线。

优选地，所述检测电路板上设置四组所述光发射器和所述光接收器，四组所述光发射器和所述光接收器在所述检测电路板上呈圆形分布；每两组所述光发射器相邻接，且与其余两组所述光发射器相对设置。

优选地，所述光发射器为发光二极管，所述光接收器为光电二极管。

优选地，所述光路装置包括均中空的第一壳体和第二壳体，其中，

所述第一壳体包括平行于所述检测电路板的第一上壳体和垂直于所述检测电路板的第一下壳体，所述第一上壳体和所述第一下壳体通过倾斜的第一反光镜相连接；

所述第二壳体包括平行于所述检测电路板的第二上壳体和垂直于所述检测电路板的第二下壳体，所述第二上壳体和所述第二下壳体通过倾斜的第二反光镜相连接；

所述第一上壳体和所述第二上壳体相互垂直，且所述第一上壳体和所述第二上壳体的端部不相连。

优选地，所述第一下壳体的内部设置第一滤镜和第一透镜，所述第一透镜位于所述第一滤镜和所述光发射器之间；

所述第二下壳体的内部设置第二滤镜和第二透镜，所述第二透镜位于所述第二滤镜和所述光接收器之间。

优选地，所述光路装置包括四组所述第一壳体和所述第二壳体，四组所述第一壳体和所述第二壳体围绕所述第一通孔周向均匀分布。

优选地，所述60℃加热板包括由下而上依次设置的第一下板、第一电阻和第一上板；所述95℃加热板包括由下而上依次设置的第二下板、第二电阻和第二上板。

优选地，检测仪还包括光路装置底座，所述光路装置底座的内部结构与所述光路装置的外部结构相吻合。

优选地，所述检测仪还包括散热板和散热风扇，所述散热板设置在所述60℃加热板的顶部，所述散热风扇设置在所述光路装置底座的外表面，且所述散热风扇与所述95℃加热板位于同一水平面上。

本发明的实施例提供的技术方案可以包括以下有益效果：

本发明提供的PCR荧光检测仪中，将PCR反应管放置于第一通孔、第二通孔和第三通孔内，并使PCR反应管的底端位于第三通孔处，PCR反应管中PCR反应液的液面位于第一通孔处，以实现95℃加热板对PCR反应管的底端加热，60℃加热板对PCR反应管中PCR反应液的液面处加热，进而使得PCR反应管的上下端产生温差。由于温差的存在使得PCR反应管中的PCR反应液由底部的高温区域流向顶部的低温区域，进而形成对流。由于PCR反应管中存在温差以及PCR反应液的对流，因而DNA能够在PCR荧光检测仪中不断扩增，不需要为达到DNA扩增不同阶段所需的温度而在PCR检测仪中不断升温、降温，因此，本发明提供的PCR荧光检测仪能够节省扩增时间，进而缩短PCR检测仪的检测时间。

应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本发明。

附图说明

此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本发明的实施例，并与说明书一起用于解释本发明的原理。

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例提供的PCR荧光检测仪的分装结构示意图；

图2为本发明实施例提供的PCR荧光检测仪的组装结构示意图；

图3为本发明实施例提供的PCR反应管的位置分布图；

图4为本发明实施例提供的60℃加热板的结构示意图；

图5为本发明实施例提供的95℃加热板的结构示意图；

图6为本发明实施例提供的四组光路通道示意图；

符号表示：

1-电路装置，2-光路装置，3-中空内腔，4-第一通孔，5-60℃加热板，6-第二通孔，7-95℃加热板，8-第三通孔，9-检测电路板，10-光发射器，11-光接收器，12-第一壳体，13-第二壳体，14-第一上壳体，15-第一下壳体，16-第一反光镜，17-第二上壳体，18-第二下壳体，19-第二反光镜，20-第一滤镜，21-第一透镜，22-第二滤镜，23-第二透镜，24-第一下板，25-第一电阻，26-第一上板，27-第二下板，28-第二电阻，29-第二上板，30-光路装置底座，31-散热板，32-散热风扇，33-PCR反应管。

具体实施方式

这里将详细地对示例性实施例进行说明，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下示例性实施例中所描述的实施方式并不代表与本发明相一致的所有实施方式。相反，它们仅是与如所附权利要求书中所详述的、本发明的一些方面相一致的装置和方法的例子。

请参考附图1和附图2，附图1示出了本发明实施例提供的PCR荧光检测仪的分装结构示意图，附图2示出了本发明实施例提供的PCR荧光检测仪的组装结构示意图。

本发明实施例提供的PCR荧光检测仪包括电路装置1和光路装置2，光路装置2设置在电路装置1上表面上，其中，电路装置1用于发出PCR荧光检测的光线及接收荧光，进而分析PCR扩增DNA后的产物总量；光路装置2用于提供光线及荧光的行走路线，即提供光路。

具体地，电路装置1包括检测电路板9、光发射器10和光接收器11，检测电路板9为基板，光发射器10和光接收器11均设置在检测电路板9的上表面上。光发射器10用于发出照射到PCR反应管33上的光线，PCR反应管33内的荧光物质受到光线的激发后产生荧光，产生的荧光由光接收器11接收，光接收器11将接收的荧光转化为电信号，进而分析出DNA扩增后的产物总量。

进一步，光发射器10和检测电路板9中心之间的连线垂直于光接收器11和检测电路板9中心之间的连线，以使光发射器10发出的光线激发荧光分子产生的荧光能够被光接收器11接收，且不存在荧光信号强弱的差异。

在本发明实施例中，光路装置2包括第一壳体12和第二壳体13，第一壳体12和第二壳体13均是中空的，以便于内部设置镜片。具体地，第一壳体12包括平行于检测电路板9的第一上壳体14以及垂直于检测电路板9的第一下壳体15，第一上壳体14和第一下壳体15通过第一反光镜16相连接；第二壳体13包括平行于检测电路板9的第二上壳体17以及垂直于检测电路板9的第二下壳体18，第二上壳体17和第二下壳体18通过第二反光镜19相连接。第一反光镜16和第二反光镜19能够将光发射器10发出的光线反射到PCR反应管33上，进而使得PCR反应管33内的荧光分子接收光照强弱相同的激发光，产生荧光强度相同的荧光，避免因荧光强弱不同而影响PCR检测。

根据光发射器10和光接收器11在检测电路板9上位置的设置，第一壳体12和第二壳体13也相互垂直，即第一上壳体14和第二上壳体17相互垂直，以配合光发射器10和检测电路板9形成完整的发出光路和接收光路。由于光路装置2的顶部具有第一通孔4，因而，第一上壳体14和第二上壳体17的端部相互垂直，且不相连。

进一步，第一下壳体15的内部设置第一滤镜20和第一透镜21，且第一透镜21位于第一滤镜20和光发射器10之间。第二下壳体18的内部设置第二滤镜22和第二透镜23，且第二透镜23位于第二滤镜22和光接收器11之间。第一滤镜20和第二滤镜22分别用于滤除光发射器10和荧光分子所发出的光照，进而得到使用所需要的光照颜色，如红光、绿光或黄光等。第一透镜21用于将光发射器10发出的光照凝聚后照射到第一反光镜16上，便于产生较强的光照。第二透镜23用于将通过第二反光镜19分散的光束凝聚为一束较强的光照，进而便于光接收器11将荧光信号转换为电信号。

在本发明实施例提供的PCR荧光检测仪中，光路装置2的内部具有中空内腔3，中空内腔3用于放置95℃加热板7，以使95℃加热板7对PCR反应管33的底部加热，PCR反应管33中底部的PCR反应液具有95℃的温度。光路装置2的顶部设置有60℃加热板5，以使60℃加热板5对PCR反应管33的管口处加热，PCR反应管33中PCR反应液液面处具有60℃的温度。

光路装置2的顶部具有与中空内腔3相连通的第一通孔4，60℃加热板5的中心设置有第二通孔6，同样的，95℃加热板7的中心设置有第三通孔8。第一通孔4、第二通孔6以及第三通孔8均用于放置PCR反应管33，且95℃加热板7位于PCR反应管33的底部，60℃加热板5位于PCR反应管33的管口位置，具体请参考附图3。为便于PCR反应管33的放置，第一通孔4、第二通孔6以及第三通孔8的中心在同一直线上。

由于PCR反应管33管口处的温度为60℃，底部的温度为95℃，因而PCR反应液在密闭的PCR反应管33中在重力方向上呈现温度梯度。由于温度梯度的存在使得上下两层PCR反应液的密度不同，继而形成密度梯度。密度梯度能够产生对抗重力、内腔壁及内摩擦力的浮力，进而使得PCR反应管33底部的高温PCR反应液向顶部的低温PCR反应液流动，顶部的低温PCR反应液向底部的高温PCR反应液流动，形成一个循环。由于底部95℃加热板7的加热，使得上述循环不断进行，PCR反应液也不断经历高温、低温，从而使PCR反应液中的DNA完成特定温度下的扩增，而不需要频繁改变加热温度以达到特定温度下的扩增，这能够加快PCR反应速度，缩短PCR检测时间。

请参考附图4和附图5，附图4和附图5分别示出了60℃加热板5和95℃加热板7的结构示意图。

60℃加热板5包括由下而上依次设置的第一下板24、第一电阻25和第一上板26，其中，第一下板24和第一上板26为固定板，用于固定第一电阻25。第一电阻25采用埋阻方式设置在第一下板24和第一上板26之间，从而起到加热的作用。第一电阻25围绕第二通孔6均匀设置，进而通过第二通孔6加热PCR反应管33中的PCR反应液。第一电阻25的数量可以根据电阻的大小具体设置。

95℃加热板7包括由下而上依次设置的第二下板27、第二电阻28和第二上板29，其中，第二下板27和第二上板29为固定板，用于固定第二电阻28。第二电阻28采用埋阻方式设置在第二下板27和第二上板29之间，从而起到加热的作用。第二电阻28围绕第三通孔8均匀设置，进而通过第三通孔8加热PCR反应管33中的PCR反应液。同样的，第二电阻28的数量可以根据电阻的大小具体设置。

本发明实施例提供的PCR荧光检测仪还包括光路装置底座30，光路装置底座30设置在光路装置2的外表面，进而起到保护光路装置2的作用。为便于光路装置底座30能够较好地保护光路装置2，光路装置底座30的内部结构与光路装置2的外部结构相吻合。

由于光路装置2的顶部设置有60℃加热板5，第一反光镜16和第二反光镜19距离60℃加热板5较近；且光路装置2的内部设置有95℃加热板7，第一滤镜20、第一透镜21、第二滤镜22以及第二透镜23均距离95℃加热板7较近，因而经过长时间使用后，第一反光镜16、第二反光镜19以及第一滤镜20等镜片在高温的作用下容易发生变形，而变形后的镜片严重影响PCR荧光检测。为防止第一反光镜16、第二反光镜19以及第一滤镜20等镜片发生变形，本发明实施例提供的PCR荧光检测仪还包括散热板31和散热风扇32。散热板31设置在60℃加热板5的顶部，以带走第一反光镜16和第二反光镜19附近的热量，同时带走95℃加热板7产生的部分热量。散热风扇32设置在光路装置底座30的外表面，且散热风扇32与95℃加热板7位于同一水平面上，以带走95℃加热板7产生的热量，进而避免第一反光镜16等镜片发生变形。

本发明实施例提供的PCR荧光检测仪的检测过程为：将盛装有混合好的PCR反应液的PCR反应管33放置于第一通孔4、第二通孔6以及第三通孔8内，启动60℃加热板5和95℃加热板7加热，以形成流体对流，DNA不断扩增。同时，在DNA不断扩增的过程中，光发射器10发出光束照射在第一透镜21上，第一透镜21凝聚光束后穿过第一滤镜20，以得到所需要的光照颜色。确定光照颜色的光束照射在第一反光镜16上，第一反光镜16将光束经90°反射后照射在PCR反应管33上，PCR反应管33内的荧光分子接收光照强弱相同的激发光，进而产生荧光强度相同的荧光。PCR反应管33不同方位发出的荧光照射在第二反光镜19上，第二反光镜19将荧光90°反射后照射在第二滤镜22上，以滤除其余光色的光束。经第二滤镜22滤光的光束照射在第二透镜23上，第二透镜23聚光后由光接收器11接收，进而将荧光信号转换为电信号，完成PCR荧光检测。

在上述检测过程中，荧光分子能够接收光照强弱相同的激发光，进而产生荧光强度相同的荧光，避免因荧光强弱不同而影响PCR检测。

在本发明实施例提供的PCR荧光检测仪中，检测电路板9上设置四组光发射器10和光接收器11，以形成四组光发出、接收组合。相应的，光路装置2包括四组第一壳体12和第二壳体13，四组光发射器10和光接收器11和四组第一壳体12和第二壳体13形成四组光路通道，具体请参考附图6，其中，1至4为光发射器10，1-1至4-4为光接收器11。

四组光发射器10和光接收器11在检测电路板9上呈圆形分布，每两组光发射器10相邻设置，且与其余两组光发射器10相对设置，如附图6中的1与2相邻设置，3与4相邻设置，但1、2与3、4相对设置。由于光发射器10和检测电路板9中心之间的连线垂直于光接收器11和检测电路板9中心之间的连线，因而每两组光接收器11相邻设置，且与其余两组光接收器11相对设置，如附图6中的1-1与2-2相邻设置，3-3与4-4相邻设置，但1-1、2-2与3-3、4-4相对设置。当然，光发射器10和光接收器11并不局限于四组，第一壳体12和第二壳体13也不局限于四组，其它组数的设置也在本申请保护的范围内。

在本发明实施例提供的PCR荧光检测仪扩增、检测DNA的过程中，PCR反应管33中放置四组不同的DNA分子，针对四组不同的DNA分子分别标记不同的荧光分子；四组光路通道能够分别提供不同的光路以及激发荧光分子荧光的光束，进而本发明实施例提供的PCR荧光检测仪能够同时检测四种不同的DNA分子。在检测四组不同的DNA分子时，控制四组光发射器10和光接收器11的开启及关闭时间，使相邻两组光发射器10和光接收器11的开启及关闭时间之间存在时差，进而便于不同的光接收器11接收相应的荧光，避免PCR荧光检测仪出现检测误差。

在本发明提供的上述各实施例中，光发射器10优选为发光二极管，光接收器11优选为光电二极管。

本领域技术人员在考虑说明书及实践这里发明的公开后，将容易想到本发明的其它实施方案。本申请旨在涵盖本发明的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本发明的一般性原理并包括本发明未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本发明的真正范围和精神由下面的权利要求指出。

应当理解的是，诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。本发明并不局限于上面已经描述并在附图中示出的精确结构，并且可以在不脱离其范围进行各种修改和改变。本发明的范围仅由所附的权利要求来限制。