绿色巴夫藻培养基组合物的制作方法

本发明属于海洋微藻养殖领域，尤其涉及一种绿色巴夫藻培养基组合物。

背景技术：

绿色巴夫藻(Pavlova viridid)属金藻门(Chrysophyta)、普林藻纲(Prymnesiophyceae)、巴夫藻目(Pavlovales)、巴夫藻科(Pavolovaceae)。该藻是一株海洋藻类，无细胞壁，个体微小(6.0×4.8×4.0μm)，繁殖快。绿色巴夫藻具有高蛋白和高脂肪酸含量，非常适于水产动物幼体摄食和消化，尤其富含水产经济动物幼体生长和发育所必需的二十二碳六烯酸EPA，是一种优质单胞藻饵料，被广泛应用于虾、蟹、贝类幼体及海水仔鱼人工育苗。由于绿色巴夫藻富含特殊的巴夫甾醇、多糖等有效成分，在生物活性方面也具有重要的研究价值。

本申请的发明人在实际使用MAV培养液对绿色巴夫藻进行养殖时发现，绿色巴夫藻的藻细胞生长速度慢且产量较低。如何通过改变绿色巴夫藻培养基组合物来提高绿色巴夫藻的生长速度和提高产量是申请人一致致力于研究的方向。

技术实现要素：

为了解决现有技术存在的不足，本发明提供一种可以提高绿色巴夫藻的生长速度和产量的绿色巴夫藻培养基组合物。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种绿色巴夫藻培养基组合物，包括如下组分：KNO₃：300-400mg/L；KH₂PO₄：10mg/L；FeSO₄·7H₂O：2.5mg/L；MnSO₄：0.25g/L；MgSO₄：0.075g/L；EDTA-Na₂：10mg/L；VB₁:6mg/L；VB₁₂:50ug/L；植物生长调节剂：0.1-1mg/L；添加剂：0.5-3mg/L和渗透调节剂：0.1-1mg/L。

作为进一步的改进，所述植物生长调节剂为6-BA。

作为进一步的改进，所述添加剂为甘氨酸。

作为进一步的改进，所述渗透调节剂为脯氨酸。

采用上述技术方案后，将绿色巴夫藻培养基组合物用1000ML过滤之后的海水进行稀释后使用，通过增加培养基硝酸盐浓度来提高培养基的N/P，进而使得藻细胞的生长速度加快，现有的绿色巴夫藻培养基中是不加镁盐的，本方案中通过添加适量的MgSO4，有利于绿色巴夫藻的生长以及叶绿素的合成。在培养基中添加甘氨酸作为添加剂，使得绿色巴夫藻生长速度明显增加，生物量增大，叶绿素及蛋白质含量均呈现上升趋势。植物生长调节剂采用6-BA和渗透调节剂采用脯氨酸后，一方面促进了藻细胞的分裂增殖，另一方面，提高藻细胞的抗氧化能力，增加了对环境的适应性。

本发明具有以下有益效果：本发明提供的绿色巴夫藻培养基利于藻细胞快速生长，培养出的绿色巴夫藻细胞密度大，合理改变藻细胞营养配方的配比，促进藻细胞快速增殖，使得藻细胞浓度增大，适于大批量规模化培养生产。

附图说明

图1是本发明的实施例1、实施例2、实施例3与MAV培养基的对比试验结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明提供的绿色巴夫藻培养基组合物进行详细的说明。

实施方式一

一种绿色巴夫藻培养基组合物，包括如下组分：KNO₃：300mg/L；KH₂PO₄：10mg/L；FeSO₄·7H₂O：2.5mg/L；MnSO₄：0.25g/L；MgSO₄：0.075g/L；EDTA-Na₂：10mg/L；VB₁:6mg/L；VB₁₂:50ug/L；促进植物生长调节的6-BA：0.1mg/L；作为添加剂的甘氨酸：0.5mg/L和作为渗透调节的脯氨酸：0.1mg/L。

将上述方案配比制成的绿色巴夫藻培养基组合物与1000ml过滤之后的海水进行配置。然后取对数生长期的绿色巴夫藻接种到该培养基中进行培养，每天光照12小时，光照强度约为50μmol/(m2·s)，培箱温度控制在25℃，每隔一段时间记录培养基中绿色巴夫藻的细胞浓度。

实施方式二

一种绿色巴夫藻培养基组合物，包括如下组分：KNO₃：400mg/L；KH₂PO₄：10mg/L；FeSO₄·7H₂O：2.5mg/L；MnSO₄：0.25g/L；MgSO₄：0.075g/L；EDTA-Na₂：10mg/L；VB₁:6mg/L；VB₁₂:50ug/L；促进植物生长调节剂6-BA：1mg/L；作为添加剂的甘氨酸：3mg/L和作为渗透调节的脯氨酸：1mg/L。

将上述方案配比制成的绿色巴夫藻培养基组合物与1000ml过滤之后的海水进行配置。然后取对数生长期的绿色巴夫藻接种到该培养基中进行培养，每天光照12小时，光照强度约为50μmol/(m2·s)，培箱温度控制在25℃，每隔一段时间记录培养基中绿色巴夫藻的细胞浓度。

实施方式三

一种绿色巴夫藻培养基组合物，包括如下组分：KNO₃：300mg/L；KH₂PO₄：10mg/L；FeSO₄·7H₂O：2.5mg/L；MnSO₄：0.25g/L；MgSO₄：0.075g/L；EDTA-Na₂：10mg/L；VB₁:6mg/L；VB₁₂:50ug/L；植物生长调节剂6-BA：0.5mg/L；添加剂甘氨酸：1.75mg/L和渗透调节剂脯氨酸：0.5mg/L。

将上述方案配比制成的绿色巴夫藻培养基组合物与1000ml过滤之后的海水进行配置。然后取对数生长期的绿色巴夫藻接种到该培养基中进行培养，每天光照12小时，光照强度约为50μmol/(m2·s)，培箱温度控制在25℃，每隔一段时间记录培养基中绿色巴夫藻的细胞浓度。

为了更好地体现本技术方案相对于传统的MAV培养基足有生长速度快和产量高的优点，将海水MAV培养基作为对照培养基，取对数生长期的绿色巴夫藻接种到该培养基中进行培养，每天光照12小时，光照强度约为50μmol/(m2·s)，培箱温度控制在25℃，每隔一段时间记录培养基中绿色巴夫藻的细胞浓度。

下表为：不同培养基培养的绿色巴夫藻的细胞浓度对比表

通过上表的实验数据可以看出，使用本技术方案所提供的培养基比使用传统的MAV培养基可以更快速地使绿色巴夫藻细胞增殖，优化后的绿色巴夫藻最高细胞浓度也远高于对照培养基，由此说明本发明提供的绿色巴夫藻培养基具有明显的培养优势，更利于本藻细胞的快速生长。

以上所述仅为本发明示意性的具体实施方式，并非用以限定本发明的范围。任何本领域的技术人员，在不脱离本发明的构思和原则的前提下所作出的等同变化与修改，均应属于本发明保护的范围。