本发明涉及细胞的体外培养领域，更具体而言，涉及微组织的生成和/或繁殖，并且特别涉及用于生成和/或繁殖微组织的装置、制造这种装置的方法以及所述装置的用途。
背景技术：
微组织包含多个同型或异型细胞，优选哺乳动物细胞，更优选人细胞。在微组织中，细胞在人造环境中的所有三维空间中生长和/或在其周围环境内相互作用。这种3d细胞培养更类似细胞的体内环境。微组织也被称为球状体，并且提供比常规二维培养中生长的细胞用于细胞、生理学和/或药学研究的更精确的模型系统。
对于常规的二维细胞培养，细胞在细胞培养瓶、培养皿或多孔板的孔中繁殖。这些细胞培养装置允许或甚至促进细胞粘附到培养容器(即培养瓶、培养皿或孔)的内衬。由于细胞繁殖所需的小样品体积以及它们对于在单个装置内同时繁殖多种不同的细胞样品的适合性，多孔板变得广泛用于二维细胞培养中。
对于微组织形成，有必要防止细胞粘附到培养容器的内衬，因为它们与培养容器内衬的粘附将损害培养基内细胞的所需三维聚集。
已进行各种方法用于生成微组织和防止细胞粘附到培养容器的内衬。用于形成微组织的一种方法是无支架悬滴法，其中细胞在悬滴中繁殖。根据无支架悬滴法用于同时形成多个微组织的多孔板以商品名gravityplustm从inspheroag,schlieren,ch商购可得。
用于生成微组织的另一种方法是利用包含非粘性涂布的孔的多孔板，例如inspheroag,schlieren,ch的gravitytraptm板。这是特殊的非粘性涂布的96孔多孔板，其设计为接收且容纳微组织用于长期培养和分析。将微组织定位在每个孔的底部处的观察室中，其中所述观察室的垂直轴线与孔的剩余部分的垂直轴线同中心。
然而，当处理多孔板时，特别是在去除或更换培养基时，利用非粘性涂布的多孔板用于繁殖微组织需要特别小心。微组织的非粘附使得它们易于在不小心的情况下连同培养基一起被不注意地抽吸。微组织被抽吸的可能性也对繁殖微组织细胞培养中的自动处理程序造成问题。
技术实现要素：
本发明的一个目的因此是提供用于繁殖微组织的装置，其中避免或至少显著减少抽吸微组织的风险，其中当培养基替换为新鲜培养基时，微组织在很大程度上保持不受干扰，并且所述装置因此也可以用于自动微组织培养程序中。
根据第一个方面，本发明提供了用于繁殖至少一种微组织的装置，所述装置包括至少一个孔。
根据第二个方面，本发明提供了用于制造用于繁殖至少一种微组织的装置的方法。
根据第三个方面，本发明提供了根据第一个方面的装置用于繁殖微组织的用途。
根据一个进一步的方面，本发明提供了利用第一个方面的装置用于生成和/或繁殖微组织的方法。
根据一个进一步的方面，本发明提供了用于生成和/或繁殖微组织的系统，所述系统包括根据本发明的第一个方面的装置。
根据一个进一步的方面，本发明提供了该系统用于生成和/或繁殖微组织的用途。
根据另外一个方面，本发明提供了利用该系统生成和/或繁殖微组织的方法。
附图说明
图1显示了根据本发明的装置的实施方案的横截面透视图，其中该装置被构造为包括孔阵列的多孔板。
图2表示根据本发明的装置的实施方案的横截面透视图。
图3a表示可以存在于根据本发明的装置的实施方案中的不同孔构造的横截面透视图。
图3b表示可以存在于根据本发明的装置的实施方案中的不同孔构造的横截面透视图。
图3c表示可以存在于根据本发明的装置的实施方案中的不同孔构造的横截面透视图。
图4显示了可以存在于根据本发明的装置的实施方案中的不同孔构造的横截面图，并且示出了可以如何使用该装置生成且繁殖微组织。
图5是根据本发明的系统的实施方案的透视图，其中该装置以多孔板的形式存在，并且其中该系统进一步包括无支架悬滴板。
图6是如图5所示的系统的一部分的横截面图。
图7是另一个系统的一部分的横截面图，所述另一个系统包括以孔形式的根据本发明的装置和无支架悬滴板的一部分。
具体实施方式
根据第一个方面，本发明提供了用于繁殖至少一种微组织的装置，所述装置包括至少一个孔。所述至少一个孔包括开放的上部区段和下部区段，所述开放的上部区段包括开放的上端和开放的下端，所述下部区段包括开放的上端和底端，其中所述上部区段和所述下部区段彼此流体连通，并且其中所述至少一个孔的下部区段的底端设有孔底，所述至少一个孔的所述下部区段具有比所述孔的开放上部区段更小的横截面积，优选比开放上部区段的开放上端和/或开放下端更小的横截面积。
至少一个孔的开放上部区段被构造用于接收和去除填充到孔内或从孔中去除的任何大部分培养基。开放的上部区段因此构成了用于孔内培养细胞的孔内大部分培养基的储库。开放的上部区段因此被视为孔的液体处理室。开放的上部区段的开放上端被构造为孔的流体接收口。
开放的上部区段包括开放的下端。在一个实施方案中，开放的上部区段的壁基本上垂直于装置所放置的平坦表面的平面。优选地，当装置放置在平坦的水平表面上时，从开放上端的上端延伸到开放上部区段的开放下端的内衬基本上是垂直的。在另一个实施方案中，开放上部区段的壁逐渐变细并且由此构成圆锥形的开放上部区段。开放上部区段的逐渐变细可以朝向至少一个孔的开放上部区段的开放上端或朝向开放下端。
在一个实施方案中，至少一个孔的开放上部区段可以在其开放上端和/或其开放下端和/或在开放上部区段的开放上端和开放下端之间的任何位置处具有圆形、椭圆形、三角形、方形、矩形或多边形横截面。
至少一个孔的下部区段具有开放上端，所述开放上端与开放上部区段的开放下端流体连通，使得在开放上部区段中提供的流体可以流入下部区段内。下部区段包括具有孔底的底端。
至少一个孔的下部区段可以在其开放上端和/或其底端和/或在开放上部区段的开放上端和开放下端之间的任何位置处具有圆形、椭圆形、三角形、方形、矩形或多边形横截面。
通常，下部区段的壁基本上垂直于装置所放置的平坦表面的平面。优选地，当装置放置在平坦的水平表面上时，下部区段的内衬是基本上垂直的。
所述至少一个孔的下部区段具有比孔的开放上部区段更小的横截面积，优选比开放上部区段的开放上端和/或开放下端更小的横截面积。术语“横截面积”指垂直于该区段的纵向/垂直轴线设置的虚拟平面的面积。
孔的下部区段构成所述孔的微组织形成室。提供具有较小直径的下部区段的孔具有以下优点：与在常规孔中繁殖微组织相比，需要较少的培养基来繁殖孔中的微组织。另外，微组织的显微镜检查得到促进，因为避免了对孔中的微组织的广泛搜索。在孔的下端存在微组织形成室使得能够实现微组织的自动显微镜检查和/或形态分析。
在另一个和/或可替代实施方案中，至少一个孔的下部区段相对于同一孔的开放上部区段的纵向轴线偏心地布置。开放上部区段的纵向轴线从上部区段的开放上端的中心到上部区段的开放下端的中心以垂直于孔底平面的方向延伸。因此，纵向轴线对应于开放上部区段的垂直轴线。从顶视图的角度来看，从下部区段的开放上端的中心延伸到下部区段底端的中心的下部区段的垂直轴线不与开放上部区段的垂直轴线同中心。
该装置的至少一个孔的内腔由孔底和壁的其内衬限定。至少一个孔的壁可以是透明的、半透明的或有色的，优选黑色或白色。在一个另外和/或可替代的实施方案中，至少一个孔的壁是对光不渗透的，例如对可见光不渗透和/或对紫外线不渗透的。
具有对可见光和/或紫外线不渗透的壁的孔对于微组织的显微检查或微组织是有利的，因为防止来自和/或朝向例如相邻孔的光的散射。由此，孔中微组织的显微分析得到简化和促进。
至少一个孔包括底部：所述底部限定孔的下部区段的下端。在一个实施方案中，所述底部是平坦的并且优选是透明的和/或薄壁的。在一个另外和/或可替代的实施方案中，孔的底部允许借助于倒置显微镜来显微镜检查孔下部区段的内容物，即微组织。孔的底部可以由与孔壁相同的材料制成，或者孔的底部可以由与构成孔壁的材料不同的材料组成。在一个另外和/或可替代的实施方案中，至少一个孔的底部由具有在约100μm至约250μm之间的基本上均匀的厚度，优选具有约180μm的均匀厚度的层提供。
在另一个实施方案中，至少一个孔的底部包括凹坑。所述凹坑可以具有v形、u形或者可以以倒金字塔的形式存在。当非常小体积的细胞悬浮液用于生成微组织时，至少一个孔的底部设有凹坑允许维持高细胞浓度。
在另一个和/或可替代的实施方案中，至少一个孔还包括中间区段。所述中间区段设置在开放上部区段和下部区段之间，更具体地在开放上部区段的开放下端和下部区段的开放上端之间。中间区段提供上部区段和下部区段之间的流动路径。
在一个另外和/或可替代的实施方案中，中间区段被构造为提供移液台。移液台被构造为在孔内的平台，所述平台具有斜面，使得施加到平台的任何流体可以排放到下部区段内。移液台的斜面具有至少5°的角度。
移液台的斜面具有不大于45°，优选不大于35°，更优选不大于25°，且最优选不大于15°的角度。
最优选地，移液台的斜面具有10°的角度。
斜面的角度应理解为平面或移液台与水平横截面积的平面之间的角度，其平行于其中移液台与孔的上部区段壁接触的多孔板的平面。
在另一个和/或可替代的实施方案中，中间区段还包括滑槽。所述滑槽设在移液台和孔的下部区段之间。
滑槽可以构造为区域和/或凹槽。
斜槽具有斜面，其中斜槽的斜面比同一孔内的移液台的斜面陡峭。
移液台和/或滑槽可以仅存在于孔中，即在孔的一个内侧中，孔的两个相邻内侧上，孔的三个内侧上，或者孔的所有四个内侧或所有内侧上。
在一个另外和/或可替代的实施方案中，至少一个孔的至少一部分包括超低粘附表面。在一个另外和/或可替代的实施方案中，至少一个孔的至少下部区段设有超低粘附表面。超低粘附性表面可以由涂布层组成，所述涂布层由水凝胶如琼脂糖组成，或由2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸胆碱(mpc)组成。提供具有超低粘附表面的至少下部区段以防止细胞粘附到微组织形成室的内衬。这有助于促进微组织形成室内的微组织形成。
在一个另外和/或可替代的实施方案中，至少一个孔的下部区段的底部的至少一部分包括疏水表面。提供具有小疏水区域的至少一个孔的底部允许不潮解的微小水凝胶/细胞小滴的放置和形成。因此，当存在于小滴中的任何水凝胶聚合时，小滴维持其保持的构型。
在一个实施方案中，用于繁殖微组织的装置包含多个孔，其中至少一个孔，优选所有孔如本文先前对于至少一个孔所述进行构造。
在一个另外和/或可替代的实施方案中，多个孔构造为一排孔。所述一排孔优选包括两个、四个、六个、八个、十个或十二个孔，优选以连续次序。
在包括多个孔的装置的一个另外和/或可替代的实施方案中，装置的至少一个孔，优选所有孔包括位于在开放上部区段的上端处的环形结构。所述环形结构从孔的上端在垂直方向上延伸。优选地，所述环形结构在其开放的上端具有与开放的上部区段相同的横截面。这样的环形结构的存在防止小滴扩散到相邻的孔内，特别是当利用本发明的装置在无支架悬滴环境中生成微组织时，通过在微组织形成时使其上下颠倒。
在一个另外的实施方案中，相邻孔的环形结构被构造为使得它们不彼此接触。
在一个可替代和/或另外的实施方案中，用于繁殖微组织的装置被构造为多孔板，优选标准sbs/ansi形式的多孔板。
在另一个和/或可替代的实施方案中，所述多孔板包含96个孔，优选以8x12阵列。在一个可替代的实施方案中，多孔板包含384个孔，优选以16x24阵列。在一个进一步的实施方案中，所述多孔板包含1536个孔，优选以32x48阵列。
在多孔板的96孔形式的一个实施方案中，开放上部区段的开放端的内边缘或内径的长度优选为至少5.0mm，更优选至少6.0mm，且最优选至少7.0mm。开放上部区段的开放端的内边缘或内径的长度小于8.5mm，优选小于8.0mm，更优选小于7.5mm。
在多孔板的96孔形式的一个实施方案中，下部区段的内边缘或内径的长度为至少0.1mm，优选至少0.25mm，且更优选至少0.5mm。下部区段的内边缘或内径的长度小于4.5mm，优选小于4.0mm，更优选小于2.0mm，且最优选小于1.5mm。
在多孔板的96孔形式的一个实施方案中，下部区段具有至少0.1mm，优选至少0.375mm，更优选至少0.5mm的高度。下部区段的高度优选不超过1.5mm。
在多孔板的96孔形式的一个另外和/或可替代的实施方案中，下部区段具有至少0.0007μl的体积，优选约0.4μl的体积，且更优选不超过30.4μl的体积。
在多孔板的96孔形式的一个另外和/或可替代的实施方案中，下部区段和上部区段的开放上端的横截面积的比率为至少1:1.57，且优选小于1:9200。更优选地，下部区段和上部区段的开放上端的横截面积的比率在约1:50至约1:83的范围内。
在多孔板的384孔形式的一个实施方案中，开放上部区段的开放端的内边缘或内径的长度优选为至少3.0mm，更优选至少3.5mm，并且最优选至少3.7mm。开放上部区段的开放端的内边缘或内径的长度小于4.0mm。
在多孔板的384孔形式的一个实施方案中，下部区段的内边缘或内径的长度为至少0.1mm，优选至少0.25mm，并且更优选至少0.5mm。下部区段的内边缘或内径的长度小于2.5mm，优选小于2.0mm，并且最优选小于1.5mm。
在多孔板的384孔形式的一个实施方案中，下部区段具有至少0.1mm，优选至少0.375mm，更优选至少0.5mm的高度。下部区段的高度优选不超过1.5mm。
在多孔板的384孔形式的一个另外和/或可替代的实施方案中，下部区段具有至少0.0007μl的体积，优选约0.17μl的体积，并且更优选不超过9.4μl的体积。
在多孔板的384孔形式的一个另外和/或可替代的实施方案中，下部区段和上部区段的开放上端的横截面积的比率为至少1:1.83，且优选小于1:2040。更优选地，下部区段和上部区段的开放上端的横截面积的比率在约1:19至约1:31的范围内。
在多孔板的96孔形式的一个优选实施方案中，内径的内边缘具有8.0mm的长度，下部区段的内边缘或内径具有1.0mm的长度，并且下部区段具有0.5mm的高度。
在多孔板的384孔形式的一个优选实施方案中，内径的内边缘具有3.7mm的长度，下部区段的内边缘或内径具有0.75mm的长度，并且下部区段具有0.375mm的高度。
在一个可替代和/或另外的实施方案中，多孔板包括边缘(rim)。所述边缘位于多孔板的至少一侧的外边缘(edge)上，优选在相对侧上，长侧或短侧，或者多孔板的所有四侧上，由此构成周向边缘。在多孔板的使用期间，可以将水供应到边缘。当所述边缘被覆盖多孔板的盖覆盖时，孔内气相的湿气可保持足够高用于防止培养基从孔中不期望的蒸发。
在一个另外和/或可替代的实施方案中，多孔板包括连续的和/或一体化的底部，该底部被构造成具有在约100μm至约250μm之间的基本上均匀的厚度，优选约180μm的均匀厚度的层。
在一个另外的实施方案中，所述层包括多个凹坑，所述多个凹坑以阵列方式布置，使得多孔板的每个孔设有包括凹坑的底部。所述凹坑可以具有v形、u形或者可以以倒金字塔的形式存在。
根据第二个方面，本发明提供了用于制造如所述的用于繁殖微组织的装置的方法。该方法包括分开制造至少一个孔的壁和至少一个孔的底部。在该方法中，至少一个孔的壁通过合适的方法制造。在制造壁的一个实施方案中，它们借助于注射成型或利用合适的聚合材料的3d打印来制造。所得到的产品包括一个通孔，其在一端处具有宽口，而在相对端处具有窄口。所述宽端对应于至少一个孔的开放上部区段的开放上端，而窄口对应于下部区段的下端。
至少一个孔的底部是分开制造的。在一个实施方案中，底部以膜或盘的形式制造。所述膜或盘具有基本上均匀的厚度，优选在约100μm至约250μm的范围内，更优选约180μm。
在对多孔板的至少一个孔或多个孔提供底部的一个实施方案中，其中至少一个孔或多个孔的底部包括坑，代表底部的膜经受深拉、吹塑成型或热成形。所述深拉、吹塑成型或热成形使膜变形，并且提供v形、u形凹坑或以倒金字塔形的凹坑。对于包括多个孔和/或孔的阵列的装置的实施方案，膜设有多个凹坑和/或凹坑的阵列，使得在提供具有底部的孔后，所述凹坑与装置的孔的下部区段的下端对齐。
在分开制造一个或多个壁和底部之后，通过将膜或盘胶粘或密封到承载窄口的平面，将装置的底部附接到预制的一个或多个壁。
在一个可替代的实施方案中，该装置通过插入制模制造，在所述制模中膜或盘作为插入件提供，并且一个或多个壁通过下述在插入件的一个面上产生随后生成，利用合适的聚合物材料的注射成型，从而关闭下部口，导致如本文先前所述的用于繁殖微组织的装置。
根据第三个方面，本发明包括使用如本文先前所述的装置用于形成和/或繁殖微组织。因此，本发明还涉及通过使用根据本发明的第一个方面的装置用于生成和/或繁殖微组织的方法。
如本公开内容中使用的术语“繁殖”指培养细胞和/或生成微组织的所有方面。如本文使用的，术语“繁殖(propagating)”包括细胞的培养，包括其倍增(multiplication)、发育、扩增(proliferation)和成熟。因此，“繁殖”还包括微组织的形成和/或生长。如本文使用的，术语“繁殖”还包括培养中的细胞和/或微组织的维持、贮存和/或运输。
在一个实施方案中，用于生成微组织的方法包括以下步骤：
-将培养基中的细胞悬浮液供应到根据第一个方面的装置的至少一个孔；
-将细胞积聚在至少一个孔的下部区段中，优选通过离心；
-将装置维持在基本上水平或倾斜的位置，直到微组织已形成。
在一个另外或可替代的实施方案中，细胞悬浮液是细胞在水凝胶中的悬浮液，以立即提供三维环境。水凝胶的聚合提供细胞定居的三维结构。
在另一个实施方案中，用于生成微组织的方法包括以下步骤：
-将最低限度体积的水凝胶中的细胞悬浮液供应到根据第一个方面的装置的至少一个孔；
而水凝胶/细胞悬浮液直接定位在至少一个孔的下部区段的底部上；
-在水凝胶已聚合后加入培养基；和
-繁殖装置至少直到微组织已在至少一个孔中形成。
在另一个实施方案中，用于生成微组织的方法包括以下步骤：
-将水凝胶供应到根据第一个方面的装置的至少一个孔的下部区段内；
-将培养基中的细胞悬浮液供应到所述装置的所述至少一个孔；
-将细胞积聚在至少一个孔的下部区段中，优选通过离心；和
-繁殖装置直到细胞已迁移到水凝胶内并且在至少一个孔中形成微组织。
在另一个实施方案中，用于生成微组织的方法包括以下步骤：
-将培养基中的细胞悬浮液供应到根据第一个方面的装置的至少一个孔；
-将装置上下颠倒，
-以倒置的位置繁殖所述装置，直到微组织已在至少一个孔中形成；
-将装置转成其直立位置；和
-将微组织转移到孔的下部区段内，优选通过离心。
在用于形成和/或繁殖微组织的装置和/或方法的使用中，将在适当的培养基中的细胞悬浮液提供到根据第一个方面的装置的至少一个孔内，并且供应到装置的至少一个孔内。
对于其中将水凝胶和随后将水凝胶中细胞或的细胞悬浮液供应到装置的孔的下部区段的方法的实施方案，仅需要其微量。这允许使用非常小(最低限度)的体积，例如每孔0.1μl和2μl之间，以及高细胞密度，例如在所述小体积中约50至约1,000个细胞。
在一个实施方案中，将装置上下颠倒并且在适当的环境条件下保持在该倒置位置预定的时间段，使得细胞繁殖且聚集。细胞然后在培养基悬滴的下端聚集成微组织，所述小滴从至少一个孔的开放上部区段的开放上端垂下。上部区段的开放上端周围的环形结构防止小滴扩散到相邻的孔内。
当微组织已在至少一个孔的悬滴中形成时，多孔板可以再次倒置到其直立位置，并且随后可以以低速离心，使得至少一个孔中的微组织暴露于低g力，所述力迫使微组织进入微组织形成室而不影响微组织。可以从至少一个孔中去除任何过量的培养基，因为移液管的尖端插入略微高于移液台的至少一个孔内，然后使用移液管抽吸培养基。
借助于其尖端位于孔内移液台之上的移液管将液体供应到孔和/或从孔中抽吸液体，防止微组织处在流体的直接流动路径中。由此，微组织暴露于较弱的力，并且受到必要的培养步骤的影响较小。另外，将移液管的尖端放置在孔内的移液台上在移液管尖端的一侧上提供了间隙－由于移液台的斜面－流体通过该间隙被抽吸。由于斜面的角度，间隙对于微组织太小而无法通过。
根据进一步的方面，本发明提供了用于形成和繁殖微组织的系统，所述系统用于形成和繁殖微组织的用途，以及通过使用所述系统用于形成和繁殖微组织的方法。
该系统包括如本文先前所述的根据本发明的第一个方面的装置，所述装置被构造为多孔板，该系统的第一多孔板包括孔阵列。该系统还包括第二多孔板。所述第二多孔板包括由侧壁形成的框架和多个孔的阵列。第二多孔板中的多个孔阵列对应于根据第一个方面的多孔的孔阵列。也指定为对应的多孔板的第二多孔板可以被放置或安装在第一多孔板的顶部，使得该进一步的多孔板的每个孔与根据第一个方面的多孔板的孔对齐。
第二多孔板的孔不包括孔底部，而是包括每个孔的开放的上部区段与开放的下部区段之间的瓶颈。该瓶颈被构造为允许流体例如培养基流过其中进入孔的下部区段内。然而，在不存在来自上部区段的流体供应的情况下，一滴流体保留在孔的下部区段并且从下部区段的下边缘垂下。这种多孔板以商品名gravityplustm从inspheroag，schlieren，ch商购可得。
第二多孔板可以用于以悬滴法同时形成已经组装到第一个方面的多孔板或者另一类型的板支持物的微组织。如果存在于其他支持物上，则可以将进一步的多孔板转移至系统的第一多孔板，并且通过将组件的离心或通过将另外量的培养基提供给带有微组织的进一步多孔板的每个孔，已经形成的微组织可以从其悬滴中转移到第一多孔板的孔内。
将参考具体实施方案和附图进一步描述本发明，但是本发明不限于此，而是仅受权利要求限制。所描述的附图仅是示意性的而非限制性的。在附图中，为了说明的目的，一些元件的尺寸可能被放大并且没有按比例绘制。尺寸和相对尺寸并不对应于本发明实践的实际减少量。
此外，说明书和权利要求书中的术语第一、第二等等用于在相似的元件之间进行区分，而不一定用于在时间、空间、排序上或以任何其他方式描述顺序。应理解，如此使用的术语在适当的情况下是可互换的，并且本文描述的本发明的实施方案能够以除所描述或示出外的其他顺序进行操作。
应注意，权利要求中使用的术语“包括”不应该被解释为限于其后列出的手段；它并不排除其他元素或步骤。它因此被解释为指定所提及的所述特点、整体、步骤或组件的存在，但是并不排除一个或多个其他特点、整体、步骤或组件或其组的存在或增加。因此，表述“包括手段a和b的装置”的范围不应限于仅由组件a和b组成的装置。这意味着关于本发明，装置的唯一相关组件是a和b。
本说明书自始至终对“一个实施方案”或“实施方案”的提及意指与该实施方案结合描述的特定特点、结构或特征被包括在本发明的至少一个实施方案中。因此，本说明书自始至终在各个地方出现的短语“在一个实施方案中”或“在实施方案中”不一定都指的是相同的实施方案，而是可以。此外，在一个或多个实施方案中，特定的特点、结构或特征可以以任何合适的方式进行组合，如根据本公开内容对于本领域普通技术人员显而易见的。
类似地，应理解，在本发明的示例性实施方案的描述中，本发明的各种特征有时被一起组合在单个实施方案、附图或其描述中，用于简化本公开内容且帮助理解各个发明方面中的一个或多个的目的。然而，本公开内容的方法不应被解释为反映本发明需要比每个权利要求中明确叙述的更多特点的意图。相反，如以下权利要求所反映的，发明方面在于少于单个前述公开实施方案的所有特征。因此，在详细描述之后的权利要求在此明确地并入本详细描述内，其中每个权利要求本身作为本发明的分开实施方案。
此外，尽管本文描述的一些实施方案包括其他实施方案中包括的一些特征但不包括其他特征，但是不同实施方案的特点的组合意味着在本发明的范围内，并且形成不同的实施方案，如本领域技术人员将理解的。例如，在下述权利要求中，任何要求保护的实施方案都可以以任何组合使用。
此外，本文将一些实施方案描述为可以由计算机系统的处理器或通过执行该功能的其他手段来实现的方法或方法元素的组合。因此，具有用于执行这样的方法或方法元素的必要指令的处理器形成用于执行方法或方法元素的手段。此外，本文描述的装置实施方案的元素是用于执行由用于执行本发明的目的的元素而执行的功能的手段的示例。
在本文提供的说明书中，阐述了许多具体细节。然而，应理解，可以在没有这些具体细节的情况下实施本发明的实施方案。在其他情况下，众所周知的方法、结构和技术未被详细显示，以免混淆本说明书的理解。
现在将通过本发明的几个实施方案的详细描述来进一步描述本发明。清楚的是，根据本领域技术人员的知识可以构造本发明的其他实施方案，而不背离本发明的真实精神或技术教导，本发明仅由所附权利要求的条款限制。
实施例
参考图1。构造为多孔板(1)的根据本发明的装置的实施方案在横截面透视图中显示。多孔板(1)包括多个孔(2)。孔(2)排列成阵列。孔(2)的阵列由从下边缘(3)基本上直立延伸的圆周侧壁(4)围绕。横截面沿着一排孔的中线延伸并且示出孔的内部构造。
图2展示了多孔板的实施方案的孔(2)的横截面图。孔(2)包括开放的上部区段(21)和下部区段(22)。下部区段(22)构成微组织形成室并且容纳微组织(27)。孔(2)由其侧壁(23)和孔底部(24)限定。孔(2)构造成在矩形孔的一侧处具有移液台(25)和滑槽(26)。移液台(25)提供斜面，使得对其施加的任何流体可以流出。滑槽(26)提供了在移液台的下边缘和孔的下部区段之间的过渡。滑槽(26)具有比移液台(25)的斜面更大的倾角。
为了从孔中添加或抽吸培养基，将移液管尖端(29)插入移液台(25)侧面处的孔(2)内，使得要供应至孔的任何流体首先击中移液台，然后顺畅地向下流动到移液台并且沿滑槽(26)进入孔的下部区段(22)内。由此，微组织不直接存在于供应到孔或从孔中抽吸的任何流体的流动路径内。移液台(25)提供了斜面，移液管尖端(29)在该斜面上的垂直定位形成移液管尖端(29)的口和移液台(25)之间的间隙。在斜面的最佳倾角下，间隙足够小，以防止微组织被无意抽吸，同时确保流体的有效抽吸。
图3a、3b和3c表示不同的孔构造的横截面透视图，其可以存在根据本发明的多孔板的一个实施方案。图3a展示了在孔的开放上部区段的开放上端处具有正方形横截面积的一排五个孔(2、2.1、2.2、2.3、2.4)。图3b展示了在开放的上部区段的开放上端处具有圆形横截面积的一排四个孔(2.5、2.6、2.7、2.8)。
图3c展示了一排孔，其设有以单独制造的膜形式的底部(24)。所述底部设有凹坑(241、242、243、244)，其中凹坑(241、242、243、244)的位置对应于孔的下部区段(22)的位置，使得每个孔的下部区段设有凹坑。孔底部存在的凹坑防止其中的流体扩散，并且帮助形成和/或维持球状体的三维结构。
图3b和3c进一步展示了在开放上部区段的开放上端处具有环形结构(28)的孔的实施方案。相邻孔的环形结构(28)的外边缘可以彼此接触，例如-图3b中的孔2.5和2.6的环形结构，或者相邻孔的环形结构可以不相互接触，例如由图3b中的孔2.7和2.8的环形结构(28)所例示的。这样的环形结构稳定了悬滴，并且防止了当该装置在倒置位置中用于悬滴培养时流体从一个小滴到相邻小滴的扩散。
图4示出了通过使用根据第一个方面的多孔板形成微组织的方法的实施方案。在该图的上部中，多孔板(1)的一部分以横截面图显示。如所示的部分包括具有不同的孔构造的四个孔(2)。为了形成微组织(27)，将在合适的培养基(42)中的细胞悬浮液(41)提供到孔内，并且多孔板(任选地包括盖子(10)或密封)如图的中部所示上下颠倒。培养基(42)中的细胞(41)可以在培养基(42)的下部悬挂部分聚集且形成微组织(27)。这代表了用于形成微组织的无支架悬滴法。
一旦微组织(27)已形成，多孔板(1)就返回到原始的上侧朝上位置，并且任选地通过以低速离心，将孔(2)内的微组织(27)导入微组织形成室(22)内。然后可以抽吸出过量的培养基，并且微组织可以进一步繁殖。
图5是包括多孔板(1)和对应的第二多孔板(50)的系统(100)的透视图，所述第二多孔板(50)包括多个孔(52)的阵列。相应的多孔板(50)可以放置在多孔板(1)的顶部上，优选以形状配合的方式。由于孔阵列(52)与多孔板(1)内的孔阵列基本上相同，所以每个孔(52)与多孔板(1)的孔(2)对齐。
图6是如图5所示的组件的一部分的放大横截面图。如可以推断的，相应的多孔板(50)的每个孔(52)与多孔板(1)的孔(2)对齐。系统的正确组装通过相应的多孔板的下边缘(53)的构造来促进，所述下边缘(53)允许正确的组装并且防止相应的多孔板的无意滑动。
多孔板(1)包括围绕孔(2)阵列的周向框架4。所述框架4提供了在框架(4)和孔阵列的外孔之间的边缘。所述边缘可以容纳流体例如水或用于帮助维持多孔板的孔中的气相的湿度。
多孔板(1)还包括当以直立位置放置到支持物上时，多孔板(1)位于其上的周向边缘(3)。边缘(3)优选地构造成使得边缘(3)的下部脊低于孔(2)的底部(24)。该构造防止孔(2)的底部(24)接触所述多孔板(1)通常放置在其上的平面支持物，并且从而防止底部的刮擦，这依次又有利于在孔(2)内的微组织的显微检查。
图7是由图5和6所示的组件提供的孔排列的放大横截面图。相应的多孔板的每个孔包括入口开口(55)、开放的上部部分(56)、开放的下部部分(57)、以及设置在开放的上部部分和开放的下部部分之间的瓶颈。可以将适当量的含有细胞的培养基供应到孔(52)中，穿过瓶颈(57)并且保持从下部部分(58)的下边缘(59)垂下。然后可在悬滴中形成微组织。
相应的多孔板(100)因此可以用于在从每个孔(52)垂下的培养基小滴内以无支架方法同时形成多个微组织。在组装到多孔板(1)时，通过轻轻离心多孔板(1)的组件和相应的多孔板(50)，或者在其中将另外量的培养基通过入口开口(55)供应到每个孔(52)，可以将微组织转移到多孔板(1)的孔(2)。由此，从每个孔(52)的下边缘(59)垂下并且含有微组织的培养基小滴被迫落入多孔板(1)的相应的孔(2)内。