一株油基泥浆钻井岩屑降解功能菌及其应用的制作方法

本发明属于环境微生物领域，具体涉及一株可降解油基泥浆钻井岩屑的功能菌以及使用该功能菌降解油基泥浆钻井岩屑的方法。
背景技术：
：油基泥浆钻井岩屑是油井开采过程中产生的固体污染物。它是油基泥浆和钻井岩屑的混合物，主要有石油类化物、酚类化合物、岩屑及重金属的复杂多相体系。随着我国油气勘探开发的发展，非常规气井、水平钻井、多分支井越来越多，井壁稳定的问题越来越突出，油基钻井液技术相比水基钻井液具有明显的优势受到越来越多的重视而不断的发展，但是油基钻井液技术产生的油基泥浆钻井岩屑废弃物越来越多，又由于钻探石油长期野外作业，施工现场的所有废弃物不能及时输送至处理厂处理，几乎所有的废弃物全部排放堆放于废泥浆储存坑内。其高COD，高石油类污染物对土壤、地表和地下水的污染。破坏土壤结构及土壤微生物的生存环境，影响了土壤酶的活性，从而干扰作物的生长；人类通过皮肤接触和食用受污染的食物进入体内进而危害到人类的健康和生命安全，甚至引起致癌、致畸、致突变等健康问题。为探索大量的废弃油基钻井液安全有效的出路，减轻油田的负担，减轻钻井产生的废弃物对环境的危害，因此研究废弃油基钻井液的无害化处理技术具有重要的实际意义。目前对油基泥浆钻井岩屑的处理主要有就地排放法、土地耕作法、指定场所集中处理、化学固化法、焚烧法、生物处理技术等物理化学方法。就地排放法是最传统的处理方法，通过自然沉降或者机械脱水后加入适量的絮凝剂在油田施工现场就地掩埋的方法，具有成本低的特点，但易造成二次污染。土地耕作法是通过自然沉降或机械脱水后，直接与土壤混合，利用土壤的自净能力或者栽种植物，达到净化的目的，但易侵蚀地表，污染地下水。指定场地集中处理是通过抽吸车将施工场地的废弃物运至指定的场所，集中处理，但是处理成本过高。化学固化法是通过加入固化剂以及破乳剂、吸附剂，与钻井泥浆作用，使其形成具有一定强度的稳定的抗水固体，将废弃钻井泥浆中的有害成分封闭、包裹在其中。具有能够消除钻井泥浆中的金属离子和有机物质对水体、土壤和生态环境的影响和危害；但是成本高，不适合对大量废弃钻井泥浆进行固化施工。焚烧法是将油基泥浆钻井岩屑通过焚烧的方法处理有机物，焚烧后的残渣用于建筑施工材料等。有机物在高温下易碳化成CO2和H2O，对有机物处理较为彻底，但是有机物成分复杂，含有N、S等杂质，易造成空气的二次污染，能耗、成本较高。生物修复技术是利用特定生物(植物、微生物或原生动物)的吸收、转化来清除环境污染物，实现环境净化、生态效应恢复的生物措施。具有成本低、无二次污染等优点，但修复周期长。从各项处理技术综合比较可以看出，物理化学处理技术处理石油烃类污染物虽然具有成效快、容易控制管理和易于实施等优点。同时也存在过程复杂，成本较高，对原有生态系统破坏较强、油品回收不完全等缺点，而且存在二次污染。生物处理技术与物理化学处理技术相比，适用于各类废弃钻井泥浆，且具有成本低，节约能源，无二次污染的特点，但是修复周期长。钻井过程中，自然界的微生物进入油基泥浆岩屑中，在高浓度含油的极端环境中存活的微生物资源，在油基泥浆岩屑污染的环境修复方面有着潜在的应用价值。因此，从油基泥浆岩屑中通过富集培养、涂布选择性培养、驯化及平板划线分离纯化，获得油基泥浆岩屑土著降解功能菌。技术实现要素：本发明的目的包括：提供一种可降解油基泥浆钻井岩屑的微生物，以及该微生物的用途；提供一种油基泥浆钻井岩屑的生物处理或生物降解方法；提供一种快速降解油基泥浆钻井岩屑的方法，等。本发明公开了一株从原油中筛选得到的枯草芽孢杆菌属(Bacillussubtilisstrain.)菌株。该菌株已于2016年10月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC13202，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。该菌株在本发明及实验中可简称为SCDC-3。本发明同时公开了该菌株16SrDNA的核苷酸序列。基于该序列，可鉴定枯草芽孢杆菌属菌株CGMCC13202。本发明公开的枯草芽孢杆菌属菌株CGMCC13202可用于降解油基钻井废弃物，尤其适用于降解油基泥浆钻井岩屑等。此外，本发明还公开了一种降解油基泥浆钻井岩屑的方法，包括：将权利要求1所述枯草芽孢杆菌属菌株菌悬液接种至原油培养基，恒温培养；其中，所述枯草芽孢杆菌属菌株CGMCC13202的培养PH值为6～8，优选为PH值为7～7.2；所述枯草芽孢杆菌属菌株CGMCC13202的培养温度为33～37℃，优选为35℃；所述枯草芽孢杆菌属菌株CGMCC13202的培养环境中，氮元素与磷元素的质量比为(1～96)：1，如1：1、6：1、12：1、24：1、48：1或96：1等；优选的，氮元素与磷元素的质量比为(6～12)：1；最优选的，氮元素与磷元素的质量比为12:1，其中氮元素含量为700毫克/升，磷元素含量为58mg/升；所述枯草芽孢杆菌属菌株CGMCC13202的培养环境中，NaCl含量4～6克/升，优选为5克/升。本发明公开的一种使用枯草芽孢杆菌属菌株CGMCC13202降解油基泥浆钻井岩屑的方法，例如，可采用下述步骤：将枯草芽孢杆菌属菌株CGMCC13202的菌悬液(菌悬液的菌浓度数量级为107CFU/毫升)以体积比10％的接种量接入原油培养基中，初始原油浓度为1000毫克/升，pH为7.0～7.2，置于恒温培养箱中，35℃培养18天，培养环境中氮元素与磷元素的质量比12：1，其中氮元素含量为700毫克，磷元素含量为58毫克/升；培养环境中NaCl含量优选为5克/升。菌悬液的制备方法可参照本领域制备菌悬液的常用方法。有益效果从环境保护的角度出发，针对油基泥浆钻井岩屑污染物的无害化处理选用成本低，简单操作无二次污染的生物技术，对于油基泥浆钻井岩屑的处理具有重要的社会经济效益。选用本发明的微生物，可提高降解效果，缩短修复时间，达到快速修复的目的。本发明枯草芽孢杆菌属(Bacillussubtilisstrain.)菌株为CGMCC13202，一方面将含油污泥等原油污染物中的有机大分子降解为分子量相对更低的小分子，另一方面可将降解后的小分子进一步转化为酯、醇等中间物，有利于进一步的降解和消除。本发明功能菌尤其对C15～C19直链烷烃及C21和C24直链烷烃有较好的降解效果，可产生支链烷烃类、酯类、醇类及环己烷类等中间产物。微生物材料保藏本发明所述枯草芽孢杆菌属(Bacillussubtilisstrain.)细菌，于2016年10月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏编号为CGMCC13202，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。附图说明图1SCDC-3菌落形态图2SCDC-3显微镜形态图3SCDC-3革兰氏染色显微镜形态图4SCDC-3生长曲线图5SCDC-316SrDNAPCR扩增产物电泳图谱图5中，LineM：DL2000；Line1,2,3：SCDC-316SrDNA；目标条带处于1000-1200bp位置图6SCDC-3发育树图谱图7不同pH下SCDC-3降解情况图8不同温度下SCDC-3降解情况图9不同N-P比下SCDC-3降解情况图10不同NaCl浓度下SCDC-3降解情况图11SCDC-3对油基泥浆钻井岩屑的降解情况图12油基泥浆钻井岩屑处理前(空白对照组)有机成分GC-MS谱图图13油基泥浆钻井岩屑经SCDC-3处理后有机成分GC-MS谱图具体实施方式本申请实施例涉及的原油降解率计算公式如下：原油含量通过非分散红外法进行测定；在计算时忽略降解过程中微生物吸附的影响。实施例一、高效降解功能菌株的筛选富集培养基：LB培养基，牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml，pH调至7.0-7.2，如配固体培养基，需加入琼脂2％。高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min后，备用。无机盐培养基：NaCl1.0g，(NH4)2·SO40.617g，KH2PO40.50g，K2HPO41.0g，MgSO40.50g，CaCl20.1g，KCl0.10g，FeSO4·7H2O0.01g，蒸馏水1000ml，pH调至7.0-7.2，高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min后，备用。原油来源：从四川宜宾珙县页岩气油田的油基泥浆钻井岩屑中提取出来的原油。原油培养基：无机盐加入一定量的原油，灭菌后备用。原油固体选择培养基：在无机盐培养基加入琼脂2％。高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min后，倒入平板中，待培养基刚刚冷却时加入浓度50mg/L原油涂抹均匀，原油待培养基充分吸收完全备用。油基泥浆钻井岩屑来源：某油田油基泥浆钻井岩屑废弃物。筛选步骤：取10g油基泥浆钻井岩屑于90ml无菌去离子水中，溶解振荡10min后，取10％于200ml富集培养基中，35℃、190rpm/min条件下培养1d。取10％培养液接入原油浓度为100mg/L的原油培养基中，继续在35℃、190rpm/min条件下培养5d，重复上述步骤3次，原油浓度依次为200mg/L、500mg/L、1000mg/L。吸取适量的经多次驯化后的培养液涂布于原油固体选择培养基平板上，待菌落生长好后，选择生长良好，菌苔较大且形态有差异的菌落，在固体富集培养基上划线分离纯化，经过多次的分离纯化得到生长良好，形态各异的菌落，然后接种于原油浓度为1000mg/L的原油培养基中测定其对原油的降解能力，最后获得一株高效降解功能菌株SCDC-3。实施例二、菌悬液的制备将降解功能菌株SCDC-3接种于LB培养基中富集培养，将处于对数生长期的菌液以5000rpm/min离心20min，用磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.0)洗涤三次并稀释至适宜浓度。通过血球计数板计算得出菌悬液浓度为8.62×108CFU/ml。实施例三、形态鉴定以原油为唯一碳源筛选得到的高效降解功能菌株SCDC-3，在LB平板培养基培养观察其菌落形态(图1)，LB液体培养基培养观察其个体形态(图2)及其革兰氏染色(图3)，半固体培养基上观察其运动性和厌氧培养观察其是否为兼性厌氧菌株。结果表明菌株SCDC-3长杆状，革兰氏阳性菌，运动型中等，兼性厌氧菌；其菌落大小3-5mm，呈圆形偏平状，边缘整齐，菌落表面光滑湿润，无光泽，不透明，黄白色。实施例四、细菌生长周期实验采用光电比浊法测定培养液中的光密度(OD值)来间接确定细菌的生长量。将筛选得到的功能菌采用四区划线法接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，在35℃恒温培养箱内活化3-4代，然后从平板上挑选生长好的单一菌落接种于新鲜牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于35℃、190rpm/min摇床中培养24h后，4℃冰箱保存作为种子液。将种子液按2％的接种量接入到新鲜的已灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，35℃，190rpm/min培养。把754-紫外可见分光度计的波长调到600nm，开机预热20min。以为接种的牛肉膏蛋白胨培养基为参比，每隔一定时间取一次样，测定培养液的OD600。以菌悬液的OD600为纵坐标，培养时间为横坐标，绘出优势菌株的生长曲线(图4)。微生物的生长经过停滞期、对数期、稳定期和衰亡期的一个过程。了解微生物的生长规律，对生产实践具有重大的指导意义。根据对数期的生长规律可以得到培养菌种时缩短工期的方法：接种对数期的菌种，采用最适菌龄。由图4可知，SCDC-3的停滞期为1h，然后进入对数期，在15h时结束进入平稳期。实施例五、油基泥浆钻井岩屑原油降解功能菌SCDC-3的分子生物学鉴定⑴基因组DNA的提取将菌株在液体培养基中培养到一定的浓度后，采用细菌基因组DNA提取试剂盒(购自天根生生化科技有限公司)提取细菌总基因组DNA。⑵PCR扩增以提取的细菌基因组DNA为模板，采用细菌16SrDNA通用引物为扩增引物，进行PCR扩增反应。前引物27F:5＇-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3＇后引物1492R:5＇-GGTTACCTTGTTACGACTT-3＇PCR反应体系为50ul，具体如表所示：表1PCR反应体系PCR循环体系如图所示表2PCR循环体系温度(℃)时间循环次数程序955min1预变性9430sec29变性5530sec29退火721:40min29延伸725min1后延伸12∞-保温⑶凝胶电泳将得到的PCR产物进行凝胶电泳测试，试验方法如下：首先在制胶槽模中放置好预定规格的梳子，然后在三角烧瓶中以1×TAE电泳缓冲液配制1％的琼脂糖溶液25ml，放入微波炉中加热至琼脂糖溶解，取出摇匀。待琼脂糖冷却至手感微烫时，加入5ulGoldView，混匀。将凝胶倒入制胶槽中，厚度约为5mm左右，制胶过程中注意避免气泡。待胶凝固后，取下梳子放入电泳槽中，向电泳槽中加入TAE缓冲液，保证液面没过凝胶，然后将适量PCR扩增产物加入到胶孔中，以100bpDNALadder作参比，开启电泳仪，当电泳条带在131V移动20min后，关闭电源，去除凝胶于凝胶成像系统上观察电泳结果。⑷纯化回收PCR产物电泳条带切割所需DNA目的条带，采用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(购自天根生化科技有限公司)纯化回收后直接送往上海生工生物有限公司测序。⑸系统发育树的构建将测序得到的序列采用Chromas软件进行拼接，拼接所得序列再提交到GenBank数据库，并运用Blast软件进行identify分析，分析结果采用ClustalW软件进行多序列比对。最后应用MEGA5.0软件基于Neighbour-joinjing采用Bootstrapanalysis构建系统发育树，构建参数为：Neighbour-joinjing(Kimura2-parametermodel，BootstrapReplicationsof1000)。序列在线BLAST比对地址：http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi用PCR技术对新筛选出的油基泥浆钻井岩屑原油降解功能菌的基因进行扩增后，采用琼脂糖凝胶电泳分析，结果如图5所示。油基泥浆钻井岩屑原油降解功能菌SCDC-3的16SrDNA基因1053bp，PCR扩增得到的序列如序列表SEQIDNO.1所示。将上述序列提交Genbank数据库进行BLAST对比保存，并采用MEGA5.0计算序列的系统进化距离，采用邻位相连法构建系统发育树见图6，经分析菌株SCDC-3为枯草芽孢杆菌属(Bacillussubtilisstrain.)，同源性为98％实施例六、油基泥浆钻井岩屑降解功能菌SCDC-3在不同pH下的原油降解性能测定将菌株SCDC-3菌株的菌悬液(菌悬液的菌浓度数量级为107CFU/ml)按10％(v/v)的接种量接入原油培养基中，初始原油浓度为1000mg/L。以等量磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)代替菌悬液，作为对照。设置5组不同初始pH分别为：3，5，7，9，11，考察不同初始pH降解功能菌对原油的降解能力。将样品置于恒温培养箱中以190rpm/min，35℃培养7d后，测定样品中的原油含量，计算降解率。每组实验设置3个平行样。不同微生物对pH值条件的要求各不相同，它们能在一定的pH值范围内生长，因此在一定程度上能够反映出微生物对环境的适应能力。如图7，功能菌SCDC-3在pH＝7时，降解率达到最大，pH低于或高于7，降解率有明显的下降趋势，因为pH值过小或者过大都可以使酶蛋白变性甚至失活，从而影响降解率。实施例七、油基泥浆钻井岩屑降解功能菌SCDC-3在不同温度下的原油降解性能测定将菌株SCDC-3菌株的菌悬液(菌悬液的菌浓度数量级为107CFU/ml)按10％(v/v)的接种量接入原油培养基中，初始原油浓度为1000mg/L，pH＝7.0～7.2。以等量磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)代替菌悬液，作为对照。设置5组不同温度分别为：15℃，25℃，30℃，35℃，40℃，考察不同温度下降解功能菌对原油的降解能力。将样品置于恒温培养箱中以190rpm/min，35℃培养7d后，测定样品中的原油含量，计算降解率。每组实验设置3个平行样。结果如图8。功能菌SCDC-3的降解率随温度增大先增大后减小，在35℃时最高。降解率受较低和较高温度的影响，因为低温能够使酶的活性受到抑制，细胞和新陈代谢活动减弱，酶活性的抑制作用随着温度的升高而被解除，细胞和新陈代谢活动加强，但是超过最适宜温度后，酶的活性降低，甚至失活，导致降解率降低。实施例八、油基泥浆钻井岩屑降解功能菌SCDC-3在不同N-P元素比下的原油降解性能测定将菌株SCDC-3菌株的菌悬液(菌悬液的菌浓度数量级为107CFU/ml)按10％(v/v)的接种量接入原油培养基中，初始原油浓度为1000mg/L，pH＝7.0～7.2。以等量磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)代替菌悬液，作为对照。设置5组不同N元素含量分别为75mg/L、350mg/L、700mg/L、1400mg/L、2800mg/L、5600mg/L，磷元素浓度为58mg/L(折合PO43-的浓度约为177mg/L)，考察不同N-P比下降解功能菌对原油的降解能力。将样品置于恒温培养箱中以190rpm/min，35℃培养7d后，测定样品中的原油含量，计算降解率。每组实验设置3个平行样。N、P营养元素的不足限制了微生物的生长繁殖，直接影响到降油功能菌的降解效果，但是过量的营养元素又会抑制微生物的生长繁殖。如图9。功能菌SCDC-3在P含量不变的情况下，N元素的不同添加量，表现出的降解率不同。N元素含量350～700mg/L时，降解率最大，且变化范围不大，在2～3％左右，N元素700mg/L时降解率最高，按质量的计算N、P比在(6～12):1之间。继续增大N元素的添加量提高N:P，降解率呈现下降的趋势，是因为营养物质过剩，抑制了降解功能菌的生长繁殖，进而导致降解率下降。实施例九、油基泥浆钻井岩屑降解功能菌SCDC-3在不同盐浓度下的原油降解性能测定将菌株SCDC-3菌株的菌悬液(菌悬液的菌浓度数量级为107CFU/ml)按10％(v/v)的接种量接入原油培养基中，初始原油浓度为1000mg/L，pH＝7.0～7.2。以等量磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)代替菌悬液，作为对照。设置5组不同NaCl含量分别为0％、3％、6％、10％、15％、20％、30％，考察不同盐浓度下降解功能菌对原油的降解能力。将样品置于恒温培养箱中以190rpm/min，35℃培养7d后，测定样品中的原油含量，计算降解率。每组实验设置3个平行样。无机盐是细胞和酶的重要组成部分，是细菌某些酶的激活剂和辅助因子，并且适宜的盐浓度能维持生物体内恒定的渗透压。如图10。随着NaCl含量的增加，功能菌SCDC-3降解率呈现先增加后降低的一个趋势，在NaCl含量为0.5％时，生长最佳，其降解率达到最高；随着盐浓度的增加其降解率呈现下降的趋势，在NaCl含量为10％时，菌种已基本无法存活，说明随着盐浓度的增加，菌体细胞外渗透压增高，导致菌体细胞失水，抑制菌种的生长，甚至导致菌种死亡，功能菌的降解率下降。实施例十、油基泥浆钻井岩屑降解功能菌SCDC-3对油基泥浆钻井岩屑的降解准备250ml锥形瓶，锥形瓶称取50g油基泥浆钻井岩屑，加入200ml无机盐培养基，将菌株SCDC-3菌株的菌悬液(菌悬液的菌浓度数量级为107CFU/ml)按10％(v/v)的接种量接入培养基中，pH＝7.0～7.2，以等量磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)代替菌悬液，作为对照。在上述实验中得到的最佳pH，温度，N-P比，盐浓度的条件下，190rpm/min恒温摇床中培养，每隔一定的时间测定其对油基泥浆钻井岩屑的降解率，绘制降解曲线。根据pH＝7.0，适宜温度35℃，N、P比12:1，盐浓度0.5％最佳条件，功能菌菌株SCDC-3在最佳条件下测得的其降解曲线，实验结果如图11，降解反应18d后，降解率为46.1％。实施例十一SCDC-3功能菌对油基泥浆钻井岩屑有机成分的降解对比实验实验方法SCDC-3功能菌降解实验组：准备5个500ml锥形瓶，分别称取50g油基泥浆钻井岩屑，每组锥形瓶加入一定量的无机盐培养基，保持含水率在86％左右，各菌株在其最适pH，最适温度、最适N-P比及最适NaCl浓度下，按接种量10％分别接入功能菌SDCD-3，在190rpm/min，35℃摇床中培养15d后，将油基泥浆钻井岩屑5000rpm/min离心10分钟，倒去上清液，油泥自然风干。将风干后的油泥置于250ml锥形瓶中，加入100ml石油醚(30-60℃)在摇床中20℃萃取2h，静止后取出上清液，密封好，置于4℃冰箱中，重复5次。将5次萃取液混合5000rpm离心5min，采用旋转蒸发仪回收石油醚并得到降解后的油品。将得到的石油类有机质混合物送至四川大学测试分析中心进行GC-MS组分分析。空白对照组：取相同油基泥浆钻井岩屑，以相同实验步骤，仅是不接种SDCD-3功能菌，重复上述实验方法，得到含油污泥空白对照组处理后的油品。将得到的石油类有机质混合物送至四川大学测试分析中心进行GC-MS组分分析。GC-MS分析实验条件色谱条件:色谱柱为30m×0.32mm的OV-101石英毛细管柱，柱温40℃，停5min再以10℃/min升至150℃，停2min再以5℃/min升至290℃，汽化温度290℃，检测温度270℃，载气N2，柱前压0.4kg,检测器FID。质谱条件:离子源为电子轰击源(EI)、电子能量70eV、加速电压3kV、分辨率1000、真空度1.33×10-4Pa，进样系统温度190℃、电离室温度250℃、扫描范围m/z22—600。结果与分析油基泥浆钻井岩屑处理前(空白对照组)有机成分GC-MS谱图分析(图12)及表3可知：油基泥浆钻井岩屑中油的组分在保留时间16.9～46.0min处均有峰出现，说明油基泥浆钻井岩屑废弃物中有机物成分复杂，共14种有机物组分。在保留时间16.9min～39min之间的有机物组分主要组分为C15～C19直链烷烃和2-己基-1-癸醇，单2-乙基己基酯及14-甲基-8-十六碳烯有机物和C21和C24直链烷烃及丁基十七烷基酯等11种有机物；在保留时间39min～46min之间的有机物组分主要为C31，C43，C44高分子直链烷烃类3种有机物。表3油基泥浆钻井岩屑空白对照有机物中各组分分子式和名称分子式名称分子式名称C15H32十五烷C19H40十九烷C16H34十六烷C21H4403S丁基十七烷基酯C16H34O2-己基-1-癸醇C21H44二十一烷C16H22O4单2-乙基己基酯C24H50二十四烷C17H36十七烷C31H64三十一烷C17H32O14-甲基-8-十六碳烯C43H88四十三烷C18H38十八烷C44H90四十四烷表4油基泥浆钻井岩屑经T-3处理前有机组分化学式及名称经SDCD-3处理后的油基泥浆钻井岩屑有机成分GC-MS谱图(图13)及表4可知：SDCD-3处理后的油基泥浆钻井岩屑中油的组分的保留时间在20～46min内均有峰出现，说明有机质组分复杂，共检测出15种有机质组分。在保留时间18～39min之间主要有机质组分为C11～C24的烷烃类、酸类、环烷烃类、酯类等12种有机物；在保留时间39min～46min之间的有机物组分主要为C31、C43及C44高分子直链烷烃类3种有机物。图谱13和表4相较于谱图12和表5可知，图谱13中出现峰时的保留时间向后推移了4min；在16.9～39min保留时间内出现的峰高及峰面积，图谱13均低于图谱12；在39～46min保留时间内出现的峰高及峰面积，图谱13与图谱12基本没有变化；而且表4相对于表3中增加了C11～C16的酸类、酯类、醇类及环己烷类等有机物，缺失了十五烷、十六烷和十八烷，对应图谱分析十七烷、十九烷、二十一烷、二十四烷减少了，说明功能菌SDCD-3对C15～C19直链烷烃及C21和C24直链烷烃有较好的降解效果，产生酸类、酯类、醇类及环己烷类等中间产物。序列表<110>成都理工大学<120>一株油基泥浆钻井岩屑降解功能菌及其应用<130>2016<160>1<170>PatentInversion3.3<210>1<211>1053<212>DNA<213>枯草芽孢杆菌属（Bacillussubtilis）<400>1tgcaatggcggcagctatacatgcagtcgagcgaactgattagaagcttgcttctatgac60gttagcggcggacgggtgagtaacacgtgggcaacctgcctgtaagactgggataacttc120gggaaaccgaagctaataccggataggatcttctccttcatgggagatgattgaaagatg180gtttcggctatcacttacagatgggcccgcggtgcattagctagttggtgaggtaacggc240tcaccaaggcaacgatgcatagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgaga300cacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtct360gacggagcaacgccgcgtgagtgatgaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttaggg420aagaacaagtacgagagtaactgctcgtaccttgacggtacctaaccagaaagccacggc480taactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttatccggaattattgg540gcgtaaagcgcgcgcaggcggtttcttaagtctgatgtgaaagcccacggctcaaccgtg600gagggtcattggaaactggggaacttgagtgcagaagagaaaagcggaattccacgtgta660gcggtgaaatgcgtagagatgtggaggaacaccagtggcgaaggcggctttttggtctgt720aactgacgctgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtcca780cgccgtaaacgatgagtgctaagtgttagagggtttccgccctttagtgctgcagctaac840gcattaagcactccgcctggggagtacggtcgcaagactgaaactcaaggaattgacggg900ggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccag960gtcttgacatcctctgacactctagagatagagcgttccccttcgggggacagagtggac1020aggtgggttgcatgggttgtcgtcagcctcgtg1053当前第1页1 2 3