用于水产动物源细菌磺胺类药物耐药基因三重荧光定量PCR检测的引物、探针及其使用方法与流程

技术特征：

1.用于水产动物源细菌磺胺类药物耐药基因三重荧光定量PCR检测的引物和探针，其特征在于包括分别针对水产动物源细菌磺胺类药物耐药基因Sul1、Sul2和Sul3的三组引物和探针，所述三组引物和探针分别具有以下碱基序列：

2.根据权利要求1所述的用于水产动物源细菌磺胺类药物耐药基因三重荧光定量PCR检测的引物和探针，其特征在于：所述探针Sul1-P、Sul2-P、Sul3-P的5’端分别标记有荧光报告基团FAM、HEX、CY5，3’端均标记有荧光淬灭基团BHQ1。

3.根据权利要求1所述的用于水产动物源细菌磺胺类药物耐药基因三重荧光定量PCR检测的引物和探针，其特征在于所述三组引物和探针的摩尔比为Sul1-F∶Sul1-R∶Sul1-P∶Sul2-F∶Sul2-R∶Sul2-P∶Sul3-F∶Sul3-R∶Sul3-P＝6∶6∶3∶4∶4∶2∶4∶4∶2。

4.权利要求1所述用于水产动物源细菌磺胺类药物耐药基因三重荧光定量PCR检测的引物和探针的使用方法，其特征在于在三重荧光定量PCR中扩增水产动物源细菌磺胺类药物耐药基因Sul1、Sul2和Sul3。

5.根据权利要求4所述用于水产动物源细菌磺胺类药物耐药基因三重荧光定量PCR检测引物和探针的使用方法，其特征在于所述三重荧光定量PCR的反应体系和反应程序为：反应体系为：Premix Ex Taq(2×)18μL，ROX Reference Dye II0.5μL，20μ mol/L Sul1上、下游引物(Sul1-F/Sul1-R)均为0.9μL，10μ mol/LSul1探针(Sul1-P)用量为0.9μL，20μ mol/LSul2和Sul3的上、下游引物(Sul2-F/Sul2-R、Sul3-F/Sul3-R)均为0.6μL，10μ mol/LSul2和Sul3探针(Sul2-P、Sul3-P)用量均为0.6μL，模板3μL，用灭菌ddH₂O补足至30μL；

反应条件为：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火并延伸45s，扩增40个循环；在每个循环60℃结束时收集荧光信号。