本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种微生物检测方法。
背景技术：
传统的微生物检测方法为培养法，国标沿用，虽然此种方法可靠准确，但由于要先增菌后血清学鉴定或者其他生化方法鉴定，往往需要三天时间甚至更长时间，在一些易变质的食品或者出关的食品上，并没有那么长的时间来等待检测，快速便捷检测微生物方法的开发丞需解决。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题就是针对上述背景技术的不足，提供一种微生物检测方法，在实现精确检测的前提下，充分满足简单、快速、成本低廉的要求。
为解决上述技术问题，本发明提供的一种微生物检测方法，包括以下步骤：
1)，构建抗体标记磁珠微球，将所需检测的标靶微生物抗体与磁珠微球结合，形成复合体；
2)，配置特异微生物识别靶标，该微生物识别靶标能与靶标微生物结合，形成带有外源核酸的复合物，将步骤1)产物与其偶联，形成微生物-抗体-磁珠复合体；
3)，将标靶微生物与步骤2)所得的复合体混合，使标靶微生物的特定核酸序列与复合体吸附，吸附完成后分离出吸附特定核酸序列的复合体；
4)，采用磁性分离的方法，将步骤3)所得的复合体中特定核酸序列分离；
5)，扩增步骤4)所得的特定核酸序列，而后检测，得到标靶微生物的检测结果。
在上述技术方案中，所述靶标微生物可以是细菌、病毒、病原体、细胞或蛋白。
在上述技术方案中，所述步骤1)中，磁珠微球直径为20-25nm。
在上述技术方案中，所述步骤1)中，抗体可以是一种或多种。
在上述技术方案中，所述步骤3)中，偶联采用edc和/或nhs方法进行偶联。
在上述技术方案中，所述步骤4)中，分离出吸附特定核酸序列的复合体采用超滤管纯化的方式。
在上述技术方案中，所述步骤6)中，采用pcr或sda法进行扩增。
在上述技术方案中，所述步骤6)中，采用荧光定量pcr法或核酸胶体金检测卡对扩增后的核酸序列检测。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明中抗体只能与活的微生物结合，扩增外源核酸序列，既避免了死菌造成的假阳性，又免去了提基因组的繁琐步骤，和这过程中可能带来的污染；同时，一个微生物上可以有多个抗体结合位点，也就是可以结合多个核酸，将信号放大，可以实现单个菌检测；本发明富集微生物后一小时内能报告结果，大大缩短了检测时长。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施例作进一步的详细描述：
本发明的微生物检测方法，包括以下步骤：
1)，构建抗体标记磁珠微球，将所需检测的标靶微生物抗体与磁珠微球结合，形成复合体；
2)，配置特异微生物识别靶标，该微生物识别靶标能与靶标微生物结合，形成带有外源核酸的复合物，将步骤1)产物与其偶联，形成微生物-抗体-磁珠复合体；
3)，将标靶微生物与步骤2)所得的复合体混合，使标靶微生物的特定核酸序列与复合体吸附，吸附完成后分离出吸附特定核酸序列的复合体；
4)，采用磁性分离的方法，将步骤3)所得的复合体中特定核酸序列分离；
5)，扩增步骤4)所得的特定核酸序列，而后检测，得到标靶微生物的检测结果。
所述微生物识别靶标可以为cloningvectorpal004(ubi-nos)dll，上述靶标为现有已知核酸，可以在市面上购买获得；也可以为sulfo-nhs-lc-biotin，该物质同样可以由市面购买获得。
在上述技术方案中，所述靶标微生物可以是细菌、病毒、病原体、细胞或蛋白。
在上述技术方案中，所述步骤1)中，磁珠微球直径为20-25nm。
在上述技术方案中，所述步骤1)中，抗体可以是一种或多种。
在上述技术方案中，所述步骤3)中，偶联采用edc和/或nhs方法进行偶联。
在上述技术方案中，所述步骤4)中，分离出吸附特定核酸序列的复合体采用超滤管纯化的方式。
在上述技术方案中，所述步骤6)中，采用pcr或sda法进行扩增。
在上述技术方案中，所述步骤6)中，采用荧光定量pcr法或核酸胶体金检测卡对扩增后的核酸序列检测。
以检测沙门菌为例：
1、配置biotin与anti-salmonella抗体：
首先，将300μl的anti-salmonella抗体中加入适量的10mmsulfo-nhs-lc-biotin，放置冰上反应2小时；反应后的液体转入2.5ml超滤离心管中，枪头不能触碰到超滤膜，12000rpm，4℃离心20min，弃去收集管中液体；加入500μlpbs于超滤管中，再次用1000rpm离心，重复4步骤2至3次；用枪头小心混匀超滤管中蛋白液后吸出，储存在-20℃条件下。
2、构建抗体标记磁珠微球
按照5：1的浓度比例将抗体和磁珠微球混合20分钟，中间间隔几分钟上下颠倒晃动离心管使之充分结合；反应完时间后，将离心管靠近磁架，吸去上清液，加入原体积的pbs溶液重悬；重复此步骤3次，以洗去游离的抗体分子；最终用等体积的pbs重悬，放4℃保存。
3、将抗体标记磁珠微球与特异识别靶标微生物结合
首先将1od的特异识别靶标微生物离心30s，加入100μlmes缓冲液溶解；分别称取0.5mgedc、0.5mgnhs加入mes溶液中，混匀，避光室温反应3小时；加入10μl，浓度为3m的naac溶液混匀；加入100μl异丙醇，混匀，-20℃过夜反应；在4℃下，12000rpm离心15min，弃去上清；加入500μl预冷的80％乙醇，在4℃，12000rpm离心8min，去上清后避光晾干；加入体积为30μl的0.5mg/ml抗体标记磁珠微球，避光反应2小时；用预冷的pbs在4℃透析，每隔3个小时换一次液，换液3-5次；得到微生物-抗体-磁珠复合体。
检测过程：
用lb培养基在37℃培养沙门菌，收集，离心然后梯度稀释加入到无菌水中，形成10cfu/ml，50cfu/ml，100cfu/ml，500cfu/ml，1000cfu/ml。各加入磁珠，颠倒混匀10min；加入微生物-抗体-磁珠复合体10μl，混匀反应20min；用含0.05％tweenpbs重悬，重复此步骤6次，重悬终体积10μl，完成磁性分离；对分离产物采用pcr或sda法进行扩增；最后对扩增后的产物采用荧光定量pcr法或核酸胶体金检测卡检测，得到检测结果
本发明的核心是利用配置特异识别靶标微生物，形成微生物-抗体-磁珠复合体来吸附标靶微生物的特定核酸序列，而后对其脱附、扩增、检测，从而实现快速检测微生物的目的，因此，本发明的保护范围不仅限于上述实施例，在本发明原理的基础上，任何利用上述机理的改变或变形，均属于本发明的保护范围。