一种微生物检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物检测领域，具体涉及一种微生物检测方法。
[0002]
【背景技术】
[0003]目前，作为微生物最大宗的常规检测项目一一细菌、霉菌和酵母菌数量的检测，依然沿用一百多年前由巴斯德建立的琼脂平板计数法。传统的微生物检测方法依赖于特殊的微生物培养基来分离培养样品中存活的微生物，这些方法灵敏、直观，能同时提供食品中微生物数量和种类的信息。然而常规方法从开始培养到肉眼可见的菌落需要I?5天时间，且操作繁琐，局限于实验室，对操作人员的技术水平要求高，容易出现人为的误差；而迄今为止作为自然环境中的微生物，能够进行人工培养的一般认为只有5?10%，没有单独一种培养基或一套物理、化学条件能够满足样品中所有微生物的生理要求；同时，培养基的制备、平板培养、菌落计数和生化鉴定工作量大、费时、费力，提供的是历史性信息，不能达到企业生产质量控制、卫生监督检测快速获得微生物信息的要求。近年来，随着科技的进步和自动化技术的应用，传统方法在样品处理、平板培养、菌落计数和鉴定系统上所做的许多改进，已使操作更加简易和方便，同时亦降低了花费和减少了工作量。但居于培养的方法仍需以时间为代价，无法快速得到结果，远远不能满足食品工业生产、环境卫生监督现场检测的需求。因此，微生物快速检测的技术和仪器便顺势而生，其中ATP生物发光在线微生物快速检测方法是目前认为最有可能实现微生物数量在线检测地新技术。
[0004]
【发明内容】
[0005]针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种微生物检测方法。
[0006]本发明解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现:一种微生物检测方法，包括以下步骤:
(1)、培养基的配置:在培养皿中加入有机物质以及麦芽汁培养基；
(2)、微生物的培养:将培养基以及相应的样品的一半到三角瓶内，摇匀后在30~37度下培养3~6小时；
(3)、微生物细胞ATP的提取:将10毫升的培养液进行离心，之后去沉淀并加入ATP释放剂；
(4)、发光检测:取0.1毫升的培养液于试管中，加入解抑剂，之后再加入荧光素酶摇匀；
(5)、鉴定:将摇匀的培养液置于试纸上，再取样品置于另一张试纸上，将二者放在显微镜下作对比。
[0007]优选的，所述步骤(I) ~步骤(5 )均在无菌环境下进行。
[0008]优选的，所述步骤(I)中的有机物质为葡萄糖。
[0009]优选的，所述步骤(I)中的pH值为7~7.5。
[0010]优选的，所述步骤(2)中的微生物为真菌时的微生物培养温度为30~32度，微生物为细菌时的微生物培养温度为35~37度。
[0011]优选的，所述步骤(3)中的离心时间为5分钟。
[0012]有益效果是:本发明用于检测样品中是否含有微生物，培养基中无机物质以及麦芽汁为微生物提供营养，而且微生物在培养基内30~37度最适宜微生物的培养，进行细胞的离心可以使得细胞壁破裂，有助于进行下列反应，ATP分释放剂可以帮助微生物进行一系列的偶联反应，最后加入荧光素酶可以使得微生物发光，帮助辨别样品中是否含有微生物。
[0013]
【具体实施方式】
[0014]实施例1
本发明一种微生物检测方法的【具体实施方式】:一种微生物检测方法，包括以下步骤:(I)、培养基的配置:在培养皿中加入有机物质以及麦芽汁培养基；(2)、微生物的培养:将培养基以及相应的样品的一半到三角瓶内，摇匀后在32度下培养5小时；(3)、微生物细胞ATP的提取:将10毫升的培养液进行离心，之后去沉淀并加入ATP释放剂；(4)、发光检测:取0.1毫升的培养液于试管中，加入解抑剂，之后再加入荧光素酶摇匀；(5)、鉴定:将摇匀的培养液置于试纸上，再取样品置于另一张试纸上，将二者放在显微镜下作对比。所述步骤
(1)~步骤(5)均在无菌环境下进行。所述步骤(I)中的有机物质为葡萄糖。所述步骤(I)中的pH值为7。所述步骤(3 )中的离心时间为5分钟。
[0015]实施例2
其余与实施例1相同，不同之处在于所述步骤(I)中的培养液pH为7.5 ;步骤(2 )中的微生物培养温度为36度，培养时间为3小时。
[0016]实施例3
其余与实施例1相同，不同之处在于所述步骤(I)中的培养液PH为7 ;步骤(2 )中的微生物培养温度为37度，培养时间为6小时。
[0017]经过上述工艺步骤后，得到的微生物检测结果为实施例1与实施例3中均发光，可检测出微生物，实施例2中没有微生物。
[0018]以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
【主权项】
1.一种微生物检测方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)、培养基的配置:在培养皿中加入有机物质以及麦芽汁培养基； (2)、微生物的培养:将培养基以及相应的样品的一半到三角瓶内，摇匀后在30~37度下培养3~6小时； (3)、微生物细胞ATP的提取:将10毫升的培养液进行离心，之后去沉淀并加入ATP释放剂；(4)、发光检测:取0.1毫升的培养液于试管中，加入解抑剂，之后再加入荧光素酶摇匀； (5)、鉴定:将摇匀的培养液置于试纸上，再取样品置于另一张试纸上，将二者放在显微镜下作对比。
2.根据权利要求1所述一种微生物检测方法，其特征在于:所述步骤(1)~步骤(5)均在无菌环境下进行。
3.根据权利要求1所述一种微生物检测方法，其特征在于:所述步骤(I)中的有机物质为葡萄糖。
4.根据权利要求1所述一种微生物检测方法，其特征在于:所述步骤(I)中的pH值为7-7.5。
5.根据权利要求1所述一种微生物检测方法，其特征在于:所述步骤(2)中的微生物为真菌时的微生物培养温度为30~32度，微生物为细菌时的微生物培养温度为35~37度。
6.根据权利要求1所述一种微生物检测方法，其特征在于:所述步骤(3)中的离心时间为5分钟。
【专利摘要】本发明公开了一种微生物检测方法，包括以下步骤：（1）、培养基的配置，（2）、微生物的培养，（3）、微生物细胞ATP的提取，（4）、发光检测，（5）、鉴定。本发明用于检测样品中是否含有微生物，培养基中无机物质以及麦芽汁为微生物提供营养，而且微生物在培养基内30~37度最适宜微生物的培养，进行细胞的离心可以使得细胞壁破裂，有助于进行下列反应，ATP分释放剂可以帮助微生物进行一系列的偶联反应，最后加入荧光素酶可以使得微生物发光，帮助辨别样品中是否含有微生物。
【IPC分类】C12Q1-66, C12Q1-02
【公开号】CN104789640
【申请号】CN201510139631
【发明人】王之侃, 孙文勇
【申请人】安徽信灵检验医学科技有限公司
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年3月29日