具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物的制作方法

本发明涉及医药合成技术领域，尤其涉及一种具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物。

背景技术：

恶性肿瘤是危害人类健康的最主要疾病之一，全球每年恶性肿瘤新发病例约1090万，而每年因恶性肿瘤而死亡的患者约670万。抗肿瘤药物研发近些年经历了巨大变化，以前临床治疗上常用的抗肿瘤药物主要是细胞毒类药物，这类抗癌药具有难以避免的选择性差、毒副作用强、易产生耐药等缺点。近年来随着生命科学研究的飞速进展，恶性肿瘤细胞内的信号转导、细胞周期的调控、细胞凋亡的诱导、血管生成以及细胞与胞外基质的相互作用等各种基本过程正逐步被阐明。以一些与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号转导通路的关键酶作为药物筛选靶点，发现选择性作用于特定靶点，同时具备高效、低毒性质的新型先导化合物已成为当今抗肿瘤药物研究开发的重要方向。曲妥珠单抗(trastuzumab)、伊马替尼(imatinib)、吉非替尼(gefitinib)以及埃罗替尼(erlotinib)等靶向药物的成功上市就是典型的例子。

转移与再生是恶性肿瘤的特点，也是治疗恶性肿瘤的难题。即使是新一代的靶向药物也对肿瘤的转移与再生疗效甚微。基于此，近年来hedgehog(hh)信号通路-刺猬通路的研究受到了科学界越来越多的重视，这不仅是因为hh信号通路异常活化在许多肿瘤包括基底细胞癌、脑肿瘤、乳腺癌、前列腺癌和一些消化系统恶性肿瘤的发生发展过程都起了举足轻重作用，更重要的是，hh信号通路是胚胎发育通路，对调控肿瘤干细胞，因而控制肿瘤转移与再生有重要作用。

hedgehog信号通路是一个高度保守的细胞间信号转导系统，1980年在果蝇中发现，由于果蝇的该通路基因突变可导致幼虫体表现出许多形似刺猬的刺突,故命名为刺猬通路hedgehog(hh)。hh信号通路由hh配体、两个跨膜蛋白受体patchedmembranereceptor(ptch)和smoothenedtransmembraneprotein(smo)及下游转录因子gli蛋白等组成。ptch和smo是位于靶细胞膜上的两种跨膜蛋白，其中ptch是由抑癌基因ptch编码的12次跨膜蛋白，是一种细胞表面受体，具有隔离和转导hh的双重作用。smo是一个7次跨膜蛋白,结构上与g蛋白偶联受体家族高度相似，具有转导hh信号的作用。ptch和smo在hh信号传递过程中起到受体的作用，其中ptch为hh的受体。当不存在hh时，ptch阻止smo转位到细胞膜，从而抑制smo的活性，进而抑制下游基因的转录表达；当存在hh信号时，hh与ptch结合，诱导smo羧基端的多个丝/苏氨酸残基发生磷酸化，导致smo在细胞表面聚集并激活，激活的smo与驱动蛋白样分子costal2(cos2)及丝/苏氨酸激酶fused(fus)、suppressoroffused(sufu)形成复合物并从微管上解离出来，以全长的形式发挥转录激活作用，最终引起锌指样转录因子gli活化，而后者进入细胞核内引起靶基因的转录。因此，在hh信号通路中，hh是该信号通路的起点，而gli作为转录因子是该信号通路的终点，hh与smo作为激动因子，ptch作为抑制因子，调控着信号通路的活性。

跨膜蛋白受体smo作为hh信号通路的关键成员，是hh信号通路中的信息转换器，它能够把细胞外的hh信号转换成细胞内的gli1信号，从而启动细胞核内基因的转录，对hh信号通路具有激活作用。绝大多数与hh细胞通路激活相关的肿瘤细胞的发生、发展过程中均存在着smo的功能性突变。小分子smo蛋白拮抗剂通过对抗smo而特异性阻断hh信号通路，而hh信号通路在正常成体处于失活状态，所以拮抗剂对机体的其他部位不会产生副作用，这是肿瘤的靶向性治疗可行性的理论基础。因此，smo蛋白已经成为当前抗肿瘤药物研发中最令人关注的靶点之一，靶向smo蛋白的小分子拮抗剂的合成也成为国际上各大制药公司的研发热点。

现今至少有5个靶向smo蛋白的小分子拮抗剂在进行临床测试，美国genentech公司和curis公司共同研发的小分子smo拮抗剂gdc-0449，于2012年1月被美国食品药品监督管理局fda批准用于晚期基底细胞癌病人的治疗。这证明小分子smo拮抗剂作为抗肿瘤新药的研发有着良好的应用价值和市场前景。

临床测试中的小分子smo拮抗剂代表包括以下几种：

尽管vismodegib和其他临床化合物有较好的药效，它们也都有各自的问题。比如vismodegib理化性质较差，溶解度低，有较强的副作用并且已产生耐药性等等。因此，就需要提出一种全新的刺猬通路拮抗剂，回避掉现有技术中药物出现的耐药性和副作用，更好地阻断肿瘤细胞转移再生，来治疗肿瘤。

技术实现要素：

鉴于上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提出一种具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物，能够阻断肿瘤细胞转移再生，治疗肿瘤疾病。

本发明的目的将通过以下技术方案得以实现：

一种具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物，包括该化合物及其药学上可接受的盐，具有通式i所示的结构：

其中，m为1,2,3或4；

n为0或1；

r1选自于氢原子、卤素、甲基、三氟甲基、羟基、巯基、乙基、甲氧基、环丙基；

r2选自于c(o)r4、c(o)or4、c(o)nr4r5、nr6c(o)r4、nr6c(o)or4、nr6c(o)nr4r5；

a1选自于未被取代的或被1-4个r10取代的含有1-3杂原子的五元杂芳环、六元杂芳环及六元芳环，或者a1为未被取代的或被1-4个r10取代的所述杂原子选自o、n、s；

l选自于化学键、-o-、-n-、-s-、-(cr7r8)k-、-o(cr7r8)k-、-s(cr7r8)k-、-nr9(cr7r8)k-、-(cr7r8)ko-、-(cr7r8)ks-、-(cr7r8)knr9-、-r7c＝cr8-、其中k为1,2,3或4；

u选自于未被取代的或被1-2个r11取代的含有1-3杂原子的五元或六元杂芳环及六元芳环，所述杂原子选自o、n、s；

r4、r5分别选自于氢原子，未被取代或被1-3个r12取代基取代的c1-8烷基，未被取代或被1-3个r12取代基取代的c3-8环烷基、c2-8烯基或c2-8炔基、c1-8磺酰基、c1-8磺酰胺基、c1-8烷氧基、c1-8酯基、c1-8酰基、c1-8酰胺基、c1-8氧代脲基、c1-8脲基；或者r4、r5选自未被取代或被1-3个r13基团取代的苯环，未被取代或被1-3个r13基团取代的5-6元含有1-3个杂原子的杂芳环，未被取代或被1-3个r13基团取代的5-7元含有1-3个杂原子的饱和杂环，所述杂芳环和饱和杂环的杂原子包括n、o和s中的一种或多种；

r6、r7、r8、r9、r10、r11、r12、r13分别选自于氢原子、氘原子、卤素、氰基、羟基、氨基、巯基、c1-6烷氧基、c1-6烷基、c3-6环烷基。

优选的，上述的具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物，其中，l与1,3,4-噻二唑在u上为邻位取代关系。

优选的，上述的具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物，其中，l为-ch2o-、-ch(ch3)o-、-ch2s-、-ch2nh-、-(ch2)2-、-hc＝ch-基团中的一种。

优选的，上述的具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物，其中，a1为未被取代或被1-4个r10基团取代的下列基团中的一种：

优选的，上述的具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物，其中，u为未被取代或被1-2个r11基团取代的下列基团中的一种：

优选的，上述的具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物，其中，r2为下列基团中的一种：

优选的，上述的具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物，其包括下列化合物：

本发明还提出一种药物组合物，包括作为活性成分的上述化合物和至少一种药学上可接受的载体或稀释剂。

本发明还提出一种药物组合物在制备治疗hedgehog信号通路介导的肿瘤的药物的应用，其特征在于：所述肿瘤包括鼻咽癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胰腺癌、肝癌、头颈鳞状上皮癌、甲状腺癌、肉瘤、骨肉瘤、硬纤维瘤、黑色素瘤、基底细胞癌、前列腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、宫颈癌、食管癌、胃癌、骨髓瘤、淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、皮肤t细胞淋巴瘤、慢性和非进行性贫血、自发性或原发性血小板增多症、特发性骨髓纤维化、肺纤维化、肾脏纤维化、肝纤维化、肝硬化、糖尿病性视网膜病、巨球蛋白血症、白血病、急性白血病、慢性白血病、淋巴性白血病、髓性白血病、骨髓增生异常综合症、骨髓增殖性病症、脑瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、许旺细胞瘤、原发性神经外胚瘤、垂体瘤中的一种或几种的组合。

本发明的突出效果为：本发明提供了一种新的具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物，能够阻断肿瘤细胞转移再生，从而治疗肿瘤疾病。

以下便结合实施例附图，对本发明的具体实施方式作进一步的详述，以使本发明技术方案更易于理解、掌握。

附图说明

图1是化合物d11的测试结果曲线图；

图2是化合物d25的测试结果曲线图；

图3是化合物d26的测试结果曲线图；

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。所用溶剂和药品均为分析纯或化学纯；溶剂在使用前均经过重新蒸馏；无水溶剂均按照标准方法或文献方法进行处理。柱层析硅胶(100-200目)和薄层层析硅胶(gf254)为青岛海洋化工厂和烟台化工厂产品；如未特别说明，均采用石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯(v/v)作为洗脱剂；显色剂用碘或磷钼酸的乙醇溶液；所有萃取溶剂未经说明均用无水na2so4干燥。¹hnmr用美国varianunityinova400nb和vnmrs高分辨核磁共振仪记录，tms为内标。lc-ms用美国agilent公司1100型高效液相色谱-离子阱质谱联用仪(lc-msdtrap)记录，二极管阵列检测器(dad)，检测波长214nm和254nm，离子阱质谱(esi源)。hplc柱为ageladurashellc18(4.6×50mm，3.5μm)；流动相为0.1％tfa水溶液：乙腈(6分钟内从5∶95到95∶5)；流速为1.2ml/min。

实施例1

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d1，其是由如下方法合成的：

1)中间体d1-1的合成：

将2-氨基1,3,4-噻二唑(10g,100mmol)和碳酸氢钠(16g,190mmol)加入到甲醇(140ml)中，在0℃下慢慢滴加溴素(5.5ml,110mmol)，然后在此温度下搅拌0.5小时。减压浓缩除去大部分甲醇，反应体系中加入水(150ml)稀释，过滤、真空干燥得一棕色固体(16g，89％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.51(s,2h).

2)中间体d1-2的合成：

将中间体d1-1(5.0g,27.8mmol),4-哌啶甲酸乙酯(5.2g，33.3mmol)和碳酸钾(7.7g，55.6mmol)加入到异丙醇(100ml)中，在90℃下搅拌3小时。冷却至常温，减压浓缩除去大部分异丙醇，反应体系中加入水(50ml)，过滤，真空干燥得一红色固体(4.7g，66％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.70(brs,2h),4.16(q,j＝7.2hz,2h),3.77-3.72(m,2h),3.12-3.06(m,2h),2.53-2.46(m,1h),2.02-1.98(m,2h),1.89-1.79(m,2h),1.27(t,j＝7.0hz,3h).

3)中间体d1-3的合成：

将中间体d1-2(5.0g，19.5mmol)，2,5-二甲氧基四氢呋喃(3.1g，23.4mmol)加入到醋酸(20ml)中，在100℃下搅拌1小时，减压浓缩除去大部分醋酸。用饱和的碳酸氢钠水溶液将反应调至碱性，然后再用乙酸乙酯(50ml*3)萃取。合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20:1到2:1)得一黄色固体(3g，50％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.18(t,j＝2.0hz,2h),6.32(t,j＝2.0hz,2h),4.17(q,j＝7.2hz,2h),3.90-3.84(m,2h),3.25-3.19(m,2h),2.59-2.52(m,1h),2.06-2.02(m,2h),1.92-1.82(m,2h),1.27(t,j＝7.2hz,3h).

4)中间体d1-4的合成：

在冰水浴下往dmf(30ml)中滴加pocl3(8.2ml，88.2mmol)，并搅拌20分钟。然后加入中间体d1-3(9.0g，29.4mmol)，80℃下反应1小时。冷却至常温，将反应液倒入100ml的冰水中，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8左右，然后再用乙酸乙酯(200ml*2)萃取。合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4:1到1:1)得一黄色固体(3.0g，30％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.69(s,1h),7.47(s,1h),7.16-7.14(m,1h),6.44-6.42(m,1h),4.16(q,j＝7.2hz,2h),3.95-3.89(m,2h),3.29-3.22(m,2h),2.60-2.53(m,1h),2.07-2.03(m,2h),1.92-1.82(m,2h),1.27(t,j＝7.2hz,3h).

5)中间体d1-5的合成：

在0℃下将中间体d1-4(3.0g，9.0mmol)，对甲苯胺(1.15g，10.8mmol)和醋酸(540mg，9.0mmol)加入到二氯甲烷(100ml)中，并在此温度下搅拌30分钟。在0℃下加入nabh(aco)3(5.7g,27mmol)，然后移至常温，并反应12小时。反应液先用饱和的碳酸氢钠(50ml)洗，再用饱和的氯化钠(50ml)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1到2:1)得一黄色固体(2.5g，65％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ6.96(d,j＝8.0hz,2h),6.89(s,1h),6.60(d,j＝8.0hz,2h),6.26(s,1h),6.21-6.19(m,1h),4.44(s,2h),4.17(q,j＝7.0hz,2h),3.88-3.85(m,2h),3.25-3.19(m,2h),2.58-2.52(m,1h),2.21(s,3h),2.11-1.98(m,2h),1.92-1.82(m,2h),1.28(t,j＝7.0hz,3h).

6)中间体d1-6的合成：

将中间体d1-5(2.5g,5.9mmol)加入到四氢呋喃(18ml)和甲醇(2ml)的混合溶剂中，然后滴加1nlioh(18ml,18mmol)。常温下反应4小时，减压浓缩除去大部分四氢呋喃，用水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(40ml)洗，水相再用1n盐酸调至ph5-6，有固体析出。过滤，真空干燥得一白色固体(1g,42％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ6.96(d,j＝8.0hz,2h),6.89(s,1h),6.62(d,j＝8.0hz,2h),6.26(s,1h),6.21-6.19(m,1h),4.43(s,2h),3.94-3.82(m,2h),3.28-3.21(m,2h),2.67-2.58(m,1h),2.22(s,3h),2.10-2.05(m,2h),1.94-1.84(m,2h).

7)终产物d1的合成：

将中间体d1-6(70mg,0.18mmol),盐酸乙胺(21mg,0.26mmol),dipea(70mg,0.54mmol)和hatu(82mg,0.22mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得一白色固体(57mg，76％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d1。

实施例2

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d2，其是由如下方法合成的：

将中间体d1-6(80mg,0.2mmol),异丙胺(18mg,0.3mmol),dipea(77mg,0.6mmol)和hatu(91mg,0.24mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得一白色固体(25mg，28％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d2。

实施例3

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d3，其是由如下方法合成的：

将中间体d1-6(70mg,0.18mmol),环丙胺(15mg,0.26mmol),dipea(70mg,0.54mmol)和hatu(82mg,0.22mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得一黄色固体(45mg，58％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d3。

实施例4

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d4，其是由如下方法合成的：

将中间体d1-6(70mg,0.18mmol),异丁胺(19mg,0.26mmol),dipea(70mg,0.54mmol)和hatu(82mg,0.22mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得一白色固体(10mg，12％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d4。

实施例5

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d5，其是由如下方法合成的：

将中间体d1-6(70mg,0.18mmol),环丙基甲基胺(18mg,0.26mmol),dipea(70mg,0.54mmol)和hatu(82mg,0.22mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得一白色固体(44mg，55％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d5。

实施例6

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d6，其是由如下方法合成的：

将中间体d1-6(70mg,0.18mmol),环戊胺(22mg,0.26mmol),dipea(70mg,0.54mmol)和hatu(82mg,0.22mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得一黄色固体(50mg，60％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d6。

实施例7

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d7，其是由如下方法合成的：

将中间体d1-6(70mg,0.18mmol),环戊胺(22mg,0.26mmol),dipea(70mg,0.54mmol)和hatu(82mg,0.22mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得一白色固体(44mg，52％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d7。

实施例8

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d8，其是由如下方法合成的：

将中间体d1-6(70mg,0.18mmol),四氢吡咯(18mg,0.26mmol),dipea(70mg,0.54mmol)和hatu(82mg,0.22mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得一白色固体(50mg，62％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d8。

实施例9

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d9，其是由如下方法合成的：

将中间体d1-6(70mg,0.18mmol),1-氨基-2-甲基-2-丙醇(23mg,0.26mmol),dipea(70mg,0.54mmol)和hatu(82mg,0.22mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1到1:1)得一白色固体(43mg，52％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d9。

实施例10

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d10，其是由如下方法合成的：

将中间体d1-6(70mg,0.18mmol),3-吡咯烷醇(23mg,0.26mmol),dipea(70mg,0.54mmol)和hatu(82mg,0.22mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1到1:1)得一白色固体(30mg，36％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d10。

实施例11

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d11，其是由如下方法合成的：

1)中间体d11-1的合成：

在0℃下将中间体d1-4(700mg，2.1mmol)，2-氨基-5-甲基吡啶(248mg，2.3mmol)和醋酸(126mg，2.1mmol)加入到二氯甲烷(30ml)中，并在此温度下搅拌30分钟。在0℃下加入nabh(aco)3(1.3g,6.3mmol)，然后移至常温，并反应12小时。反应液先用饱和的碳酸氢钠水溶液(30ml)洗，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1到2:1)得一黄色油状物(620mg，69％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.86(s,1h),7.28(d,j＝8.4hz,1h),6.84(s,1h),6.47(d,j＝8.4hz,1h),6.38(s,1h),6.23-6.21(m,1h),4.71(s,2h),4.17(q,j＝7.1hz,2h),3.89-3.86(m,2h),3.27-3.22(m,2h),2.64-2.50(m,1h),2.16(s,3h),2.06-2.03(m,2h),1.92-1.83(m,2h),1.28(t,j＝6.8hz,3h).

2)中间体d11-2的合成：

将中间体d11-1(400mg,0.95mmol)加入到四氢呋喃(10ml)和甲醇(1ml)的混合溶剂中，然后滴加1nlioh(3ml,3mmol)。常温下反应4小时，减压浓缩除去大部分四氢呋喃，加水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml)洗，水相用1nhcl调至ph5-6，最后再用二氯甲烷(30ml*5)萃取。合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩得一黄色油状物(55mg，14％)。

3)终产物d11的合成：

将中间体d11-2(55mg,0.14mmol),2-甲基环己基胺(23mg,0.21mmol),dipea(54mg,0.42mmol)和hatu(64mg,0.17mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得一白色固体(50mg，73％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d11。

实施例12

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d12，其是由如下方法合成的：

1)中间体d12-1的合成：

在0℃下将中间体d1-4(500mg，1.5mmol)，3-氨基-6-甲基吡啶(178mg，1.7mmol)和醋酸(90mg，1.5mmol)加入到二氯甲烷(30ml)中，并在此温度下搅拌30分钟。在0℃下加入nabh(aco)3(954mg,4.5mmol)，然后移至常温，并反应12小时。反应液先用饱和的碳酸氢钠水溶液(30ml)洗，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1到2:1)得一黄色油状物(450mg，70％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.97(s,1h),6.95-6.92(m,2h),6.84(s,1h),6.27(s,1h),6.21-6.19(m,1h),4.47(s,2h),4.17(q,j＝7.1hz,2h),3.89-3.86(m,2h),3.28-3.22(m,2h),2.62-2.54(m,1h),2.40(s,3h),2.09-2.04(m,2h),1.93-1.84(m,2h),1.28(t,j＝6.8hz,3h).

2)中间体d12-2的合成：

将中间体d12-1(450mg,1.1mmol)加入到四氢呋喃(10ml)和甲醇(1ml)的混合溶剂中，然后滴加1nlioh(3ml,3mmol)。常温下反应4小时，减压浓缩除去大部分四氢呋喃，加水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml)洗，水相用1nhcl调至ph5-6，有固体析出，过滤，真空干燥得一白色固体(300mg，71％)。

3)终产物d12的合成：

将中间体d12-2(50mg,0.13mmol),2-甲基环己基胺(21mg,0.19mmol),dipea(50mg,0.39mmol)和hatu(59mg,0.16mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得一白色固体(46mg，74％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d12。

实施例13

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d13，其是由如下方法合成的：

1)中间体d13-1的合成：

在0℃下，将亚硝酸异戊酯(2.8g,23.9mmol)和溴化铜(5.4g，23.9mmol)加入到乙腈(100ml)中，并在此温度下搅拌10分钟。然后再将d1-2(4.7g,18.4mmol)加入到反应液中，并在50℃下反应1小时。减压浓缩，加入饱和食盐水(50ml)，用乙酸乙酯(40ml*3)萃取。合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝50:1到5:1)得一黄色固体(3g，51％)。

2)中间体d13-2的合成：

将中间体d13-1(8.0g,25mmol)溶于thf(100ml)和甲醇(10ml)的混合溶剂中，然后滴加3nlioh(25ml,75mmol),常温下搅拌4小时。加水(20ml)稀释，减压浓缩除去大部分thf，用乙酸乙酯(50ml)洗，水相用2nhcl调至ph5-6，有固体析出，过滤，真空干燥得一白色固体(7.0g，95％)。

3)中间体d13-3的合成：

将中间体d13-2(1.0g,3.4mmol),2-甲基环己基胺(576mg,5.1mmol),dipea(877mg,6.8mmol)和hatu(1.67g,4.4mmol)加入到dmf(10ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(100ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(50ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得一白色固体(1.0g，75％)。

3)中间体d13-4的合成：

将中间体d13-3(1.0g,2.58mmol)和水合肼(1.3g，25.8mmol)加入到20ml的1,4-二氧六环中，在封管中，100℃下反应24小时。冷却至常温，有固体析出，过滤，真空干燥得一白色固体(450mg,51％)。

4)中间体d13-5的合成：

将中间体d13-4(200mg,0.59mmol)和4-(二甲基氨基)-1,1-二甲氧基-3-丁烯-2-酮(112mg,0.65mmol)加入到甲苯(10ml)中，在100℃下反应1.5小时。减压浓缩，加醋酸(5ml)，在100℃下反应30分钟。减压浓缩除去醋酸，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至碱性，再用乙酸乙酯(20ml*3)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得一黄色固体(60mg，25％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.76(s,1h),7.70(s,1h),7.11(s,1h),5.48(d,j＝8.4hz,0.7h),5.20(d,j＝8.8hz,0.3h),4.13-4.08(m,0.7h),4.04-4.01(m,2h),3.55-3.46(m,0.3h),3.28-3.22(m,2h),2.42-2.32(m,1h),1.98-1.87(m,4h),1.74-1.50(m,5h),1.42-1.33(m,2h),1.25-1.05(m,2h),0.91(d,j＝6.4hz,1h),0.86(d,j＝6.8hz,2h).

4)终产物d13的合成：

将中间体d13-5(60mg,0.15mmol),对甲苯胺(24mg,0.22mmol)和醋酸(9mg,0.15mmol)加入到二氯甲烷(10ml)中，常温下搅拌1小时。在0℃下加入nabh(aco)3(95mg,0.45mmol)，移至常温并反应36小时。加入二氯甲烷(30ml)稀释，再用饱和的碳酸氢钠水溶液(20ml)洗，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1到1:1)得一白色固体(50mg，67％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d13。

实施例14

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d14，其是由如下方法合成的：

将中间体d13-5(40mg,0.1mmol),对甲苯胺(12mg,0.11mmol)和醋酸(6mg,0.1mmol)加入到二氯甲烷(10ml)中，常温下搅拌1小时。在0℃下加入nabh(aco)3(63mg,0.45mmol)，移至常温并反应36小时。加入二氯甲烷(30ml)稀释，再用饱和的碳酸氢钠水溶液(20ml)洗，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:2)得一白色固体(7.0mg，14％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d14。

实施例15

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d15，其是由如下方法合成的：

1)中间体d15-1的合成：

将中间体d13-2(1.3g，4.45mmol)和dmap(108mg，0.89mmol)加入到叔丁醇(15ml)中，然后再加入(boc)2o(1.94g,8.9mmol),在常温下搅拌4小时。减压浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝100:1到2:1)得一黄色油状物(1.4g，90％)。

2)中间体d15-2的合成：

将中间体d15-2(1.3g,3.7mmol)和水合肼(3.7g，74mmol)加入到20ml的1,4-二氧六环中，在封管中，100℃下反应48小时。冷却至常温，减压浓缩，加水(20ml)，有固体析出，过滤，真空干燥得一白色固体(900mg,80％)。

3)中间体d15-3的合成：

将中间体d15-2(900mg,3mmol)和4-(二甲基氨基)-1,1-二甲氧基-3-丁烯-2-酮(1g,6mmol)加入到甲苯(40ml)中，在105℃下反应10小时。减压浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得一红色固体(640mg，50％)。

4)中间体d15-4的合成：

将中间体d15-3(640mg，1.5mmol)加入到醋酸(15ml)中，在100℃下反应3小时，减压浓缩除去醋酸，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至碱性，再用乙酸乙酯(30ml*3)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩得一红色固体(480mg，88％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.75(s,1h),7.69(s,1h),7.10(s,1h),3.97-3.82(m,2h),3.35-3.21(m,2h),2.56-2.43(m,1h),2.11-1.96(m,2h),1.90-1.81(m,2h),1.46(s,9h).

5)中间体d15-5的合成：

将中间体d13-4(200mg,0.55mmol),2-甲基-5-氨基吡啶(89mg,0.83mmol)和醋酸(33mg,0.55mmol)加入到二氯甲烷(20ml)中，常温下搅拌1小时。在0℃下加入nabh(aco)3(350mg,1.65mmol)，移至常温并反应24小时。加入二氯甲烷(30ml)稀释，再用饱和的碳酸氢钠水溶液(30ml)洗，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝8:1)得一黄色油状物(150mg，59％)。

6)中间体d15-6的合成：

将中间体d15-5(150mg,0.33mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，然后再加入三氟乙酸(5ml)，常温搅拌12小时，减压浓缩，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8-9，用乙酸乙酯(20ml)洗。水相用1nhcl调至ph5-6，再用二氯甲烷(20ml*3)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩得一黄色固体(80mg，60％)。

7)终产物d15的合成：

将中间体d15-6(33mg,0.08mmol),2-甲基环己基胺(12mg,0.11mmol),dipea(21mg,0.16mmol)和hatu(42mg,0.11mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得一白色固体(23mg，56％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d15。

实施例16

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d16，其是由如下方法合成的：

1)中间体d16-1的合成：

将中间体d15-4(200mg,0.55mmol),2-甲基-5-氨基吡啶(104mg,1.1mmol)和醋酸(33mg,0.55mmol)加入到1，2-二氯乙烷(15ml)中，70℃下搅拌4小时。在0℃下加入nabh(aco)3(350mg,1.65mmol)，移至常温并反应16小时。加入二氯甲烷(30ml)稀释，再用饱和的碳酸氢钠水溶液(30ml)洗，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20:1到1:1)得一黄色油状物(130mg，53％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.08(s,1h),7.54(s,1h),7.37-7.33(m,1h),6.56-6.53(m,1h),6.46(s,1h),6.41(d,j＝7.6hz,1h),5.84-5.77(m,1h),4.94(d,j＝6.4hz,2h),3.91-3.88(m,2h),3.28-3.22(m,2h),2.53-2.40(m,1h),2.05-2.01(m,2h),1.91-1.77(m,2h),1.46(s,9h).

2)中间体d16-2的合成：

将中间体d16-1(130mg,0.29mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，然后再加入三氟乙酸(5ml)，常温搅拌12小时，减压浓缩，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8-9，用乙酸乙酯(20ml)洗。水相用1nhcl调至ph5-6，再用二氯甲烷(20ml*3)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩得一白色固体(110mg，98％)。

3)终产物d16的合成：

将中间体d16-2(40mg,0.1mmol),2-甲基环己基胺(17mg,0.15mmol),dipea(26mg,0.2mmol)和hatu(49mg,0.13mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1到1:2)得一白色固体(32mg，64％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d16。

实施例17

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d17&d22，其是由如下方法合成的：

1)中间体d17-1的合成：

将中间体d15-4(236mg，0.65mmol)溶于10ml甲醇中，在0℃下加入硼氢化钠(49mg,1.3mmol)，并在此温度下搅拌1小时。加入饱和食盐水(20ml)，减压浓缩除去大部分甲醇，再用乙酸乙酯(20ml*2)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩得一黄色固体(232mg，99％)。

2)中间体d17-2的合成：

将中间体d17-1(100mg,0.27mmol)和三乙胺(137mg，1.37mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，在常温下滴加甲磺酰氯(156mg，1.37mmol)，常温下反应3小时。加入二氯甲烷(20ml)稀释，再用饱和的碳酸氢钠水溶液(20ml)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1到1:1)得一黄色固体(111mg，90％)。

3)中间体d17-3和d22-1的合成：

将中间体d17-2(220mg，0.5mmol)，2-羟基-5-甲基吡啶(65mg，0.6mmol)和碳酸铯(245mg，0.75mmol)加入到dmf(3ml)中，在60℃下反应12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1到1:10)得两个中间体d17-3和d22-1。

d17-3(189mg，83％)，黄色油状物，¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.56(s,1h),7.38(s,1h),7.21(d,j＝8.8hz,1h),6.55(d,j＝9.2hz,1h),6.34(s,1h),5.65(s,2h),3.91-3.87(m,2h),3.28-3.22(m,2h),2.51-2.45(m,1h),2.05(s,3h),2.01-1.97(m,2h),1.90-1.80(m,2h),1.46(s,9h).

d22-1(39mg，17％)，白色固体，¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.92(s,1h),7.59(s,1h),7.40(d,j＝8.4hz,1h),6.72(d,j＝8.4hz,1h),6.44(s,1h),5.85(s,2h),3.90-3.87(m,2h),3.26-3.20(m,2h),2.53-2.41(m,1h),2.24(s,3h),2.03-1.99(m,2h),1.89-1.77(m,2h),1.46(s,9h).

3)中间体d17-4的合成：

将中间体d17-3(189mg,0.41mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，然后再加入三氟乙酸(5ml)，常温搅拌12小时，减压浓缩，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8-9，用乙酸乙酯(20ml)洗。水相用1nhcl调至ph5-6，有固体析出，过滤，真空干燥得一白色固体(152mg，91％)。

4)中间体d22-2的合成：

将中间体d22-1(39mg,0.08mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，然后再加入三氟乙酸(3ml)，常温搅拌12小时，减压浓缩，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8-9，用乙酸乙酯(20ml)洗。水相用1nhcl调至ph5-6，再用二氯甲烷(20ml*3)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩得一白色固体(31mg，91％)。

5)终产物d17的合成：

将中间体d17-4(40mg,0.1mmol),2-甲基环己基胺(17mg,0.15mmol),dipea(26mg,0.2mmol)和hatu(50mg,0.13mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1到1:10)得一白色固体(32mg，64％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d17。

6)终产物d22的合成：

将中间体d22-2(30mg,0.08mmol),2-甲基环己基胺(13mg,0.12mmol),dipea(21mg,0.16mmol)和hatu(38mg,0.1mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得一白色固体(30mg，80％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d22。

实施例18

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d18，其是由如下方法合成的：

1)中间体d18-1的合成：

将中间体d15-4(150mg,0.41mmol),3-氨基吡啶(58mg,0.62mmol)和醋酸(49mg,0.82mmol)加入到二氯甲烷(20ml)中，常温下搅拌1小时。在0℃下加入nabh(aco)3(261mg,1.23mmol)，移至常温并反应16小时。加入二氯甲烷(30ml)稀释，再用饱和的碳酸氢钠水溶液(30ml)洗，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1到1:1)得一黄色油状物(80mg，43％)。

2)中间体d18-2的合成：

将中间体d18-1(80mg,0.18mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，然后再加入三氟乙酸(5ml)，常温搅拌12小时，减压浓缩，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8-9，用乙酸乙酯(20ml)洗。水相用1nhcl调至ph5-6，再用二氯甲烷(20ml*3)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩得一黄色固体(45mg，64％)。

3)终产物d18的合成：

将中间体d18-2(45mg,0.12mmol),2-甲基环己基胺(17mg,0.15mmol),dipea(31mg,0.24mmol)和hatu(57mg,0.15mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1到1:2)得一白色固体(22mg，39％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d18。

实施例19

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d19，其是由如下方法合成的：

1)中间体d19-1的合成：

将中间体d15-4(200mg，0.55mmol)，2-氨基-5-甲基嘧啶(120mg，1.1mmol)，三氟乙酸(188mg，1.65mmol)和三乙基硅氢(191mg，1.65mmol)加入到乙腈(20ml)中，在封管中，80℃下反应12小时。减压浓缩，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8-9，用乙酸乙酯(20ml*2)萃取。合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1到1:1)得白色固体(210mg，83％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11(s,2h),7.52(s,1h),6.42(s,1h),6.19-6.16(m,1h),4.99(d,j＝6.8hz,2h),3.89-3.86(m,2h),3.26-3.21(m,2h),2.50-2.45(m,1h),2.10(s,3h),2.04-2.00(m,2h),1.89-1.80(m,2h),1.46(s,9h).

2)中间体d19-2的合成：

将中间体d19-1(210mg,0.46mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，然后再加入三氟乙酸(5ml)，常温搅拌12小时，减压浓缩，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8-9，用乙酸乙酯(20ml)洗。水相用1nhcl调至ph5-6，有固体析出，过滤，真空干燥得一白色固体(146mg，79％)。

3)终产物d19的合成：

将中间体d19-2(40mg,0.1mmol),2-甲基环己基胺(17mg,0.15mmol),dipea(26mg,0.2mmol)和hatu(49mg,0.13mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1到1:2)得一白色固体(42mg，84％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d19。

实施例20

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d20，其是由如下方法合成的：

1)中间体d20-1的合成：

将中间体d15-4(150mg,0.41mmol),2-氨基-5-甲基吡嗪(89mg,0.82mmol)和醋酸(25mg,0.41mmol)加入到1，2-二氯乙烷(15ml)中，70℃下搅拌4小时。在0℃下加入nabh(aco)3(261mg,1.23mmol)，移至常温并反应16小时。加入二氯甲烷(30ml)稀释，再用饱和的碳酸氢钠水溶液(30ml)洗，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1到1:1)得一黄色油状物(120mg，64％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.85(s,1h),7.82(s,1h),7.53(s,1h),6.45(s,1h),5.95-5.92(m,1h),4.90(d,j＝6.4hz,2h),3.90-3.87(m,2h),3.29-3.23(m,2h),2.52-2.46(m,1h),2.34(s,3h),2.04-2.01(m,2h),1.89-1.81(m,2h),1.46(s,9h).

2)中间体d20-2的合成：

将中间体d20-1(120mg,0.26mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，然后再加入三氟乙酸(5ml)，常温搅拌12小时，减压浓缩，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8-9，用乙酸乙酯(20ml)洗。水相用1nhcl调至ph5-6，有固体析出，过滤，真空干燥得一黄色固体(86mg，81％)。

3)终产物d20的合成：

将中间体d20-2(40mg,0.1mmol),2-甲基环己基胺(17mg,0.15mmol),dipea(26mg,0.2mmol)和hatu(49mg,0.13mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1到1:2)得一白色固体(34mg，68％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d20。

实施例21

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d21，其是由如下方法合成的：

1)中间体d21-1的合成：

将中间体d15-4(200mg,0.55mmol),3-氨基-6-甲基哒嗪(120mg,1.1mmol)和醋酸(33mg,0.55mmol)加入到甲苯(20ml)中，130℃下搅拌6小时。在0℃下加入二氯甲烷(10ml)和nabh(aco)3(350mg,1.65mmol)，移至常温并反应16小时。加入饱和的碳酸氢钠水溶液(10ml)，减压浓缩除去甲苯。加水(20ml)稀释，再用二氯甲烷(20ml*2)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1到1:2)得一黄色固体(150mg，59％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.54(s,1h),6.97(d,j＝8.8hz,1h),6.60(s,1h),6.56(d,j＝8.8hz,1h),5.92(t,j＝6.0hz,1h),5.03(d,j＝6.8hz,2h),3.90-3.87(m,2h),3.29-3.23(m,2h),2.56-2.43(m,4h),2.04-2.02(m,2h),1.90-1.81(m,2h),1.46(s,9h).

2)中间体d20-2的合成：

将中间体d21-1(150mg,0.33mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，然后再加入三氟乙酸(5ml)，常温搅拌12小时，减压浓缩，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8-9，用乙酸乙酯(20ml)洗。水相用1nhcl调至ph5-6，再用二氯甲烷(20ml*3)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩得一黄色固体(110mg，83％)。

3)终产物d21的合成：

将中间体d21-2(40mg,0.1mmol),2-甲基环己基胺(17mg,0.15mmol),dipea(26mg,0.2mmol)和hatu(49mg,0.13mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝50:1到25:1)得一白色固体(24mg，48％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d21。

实施例22

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d23，其是由如下方法合成的：

1)中间体d23-1的合成：

将中间体d15-4(300mg，0.83mmol)和2,5-二甲基吡啶(267mg，2.49mmol)加入到乙酸酐(5ml)中，在140℃下搅拌48小时。用饱和的碳酸氢钠水溶液调至碱性，再用乙酸乙酯(50ml*2)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)得一黄色固体(150mg，40％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.41-8.35(m,2h),7.62(s,1h),7.56(d,j＝8.0hz,1h),7.47(d,j＝8.8hz,1h),7.26–7.24(m,1h),6.73(s,1h),3.95-3.86(m,2h),3.30-3.21(m,2h),2.53-2.45(m,1h),2.34(s,3h),2.08-1.98(m,2h),1.91-1.80(m,2h),1.46(s,9h).

2)中间体d23-2的合成：

将中间体d23-1(150mg,0.33mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，然后再加入三氟乙酸(5ml)，常温搅拌12小时，减压浓缩，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8-9，用乙酸乙酯(20ml)洗。水相用1nhcl调至ph5-6，有固体析出，过滤，真空干燥得一黄色固体(110mg，83％)。

3)终产物d23的合成：

将中间体d23-2(105mg,0.26mmol),2-甲基环己基胺(45mg,0.4mmol),dipea(67mg,0.52mmol)和hatu(128mg,0.34mmol)加入到dmf(4ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(100ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(40ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(乙酸乙酯)得一黄色固体(120mg，92％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d23。

实施例23

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d24，其是由如下方法合成的：

将化合物d23(25mg，0.05mmol)和10％pd/c(25mg)加入到甲醇(10ml)中，在氢气的环境下搅拌24小时，过滤，滤液浓缩，再经柱层析(乙酸乙酯)得一白色固体(18mg，71％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d24。

实施例24

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d25，其是由如下方法合成的：

1)中间体d25-1的合成：

将中间体d15-4(480mg,1.3mmol),2-氨基-5-甲基吡啶(286mg,2.6mmol)和醋酸(79mg,1.3mmol)加入到二氯甲烷(25ml)中，常温下搅拌1小时。在0℃下加入nabh(aco)3(840mg,3.9mmol)，移至常温并反应48小时。加入二氯甲烷(50ml)稀释，再用饱和的碳酸氢钠水溶液(40ml)洗，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1到5:1)得一黄色油状物(400mg，66％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.86(s,1h),7.53(s,1h),7.25(d,j＝8.4hz,1h),6.47(s,1h),6.40(d,j＝8.4hz,1h),6.31(brs,1h),4.92(s,2h),3.95-3.82(m,2h),3.33-3.17(m,2h),2.53-2.41(m,1h),2.04-2.00(m,2h),1.90-1.80(m,2h),1.46(s,9h).

2)中间体d25-2的合成：

将中间体d25-1(400mg,0.88mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，然后再加入三氟乙酸(5ml)，常温搅拌12小时，减压浓缩，用饱和的碳酸氢钠水溶液调至ph8-9，用乙酸乙酯(20ml)洗。水相用1nhcl调至ph5-6，有固体析出，过滤，真空干燥得一白色固体(190mg，54％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.77(s,1h),7.66(s,1h),7.25(d,j＝7.2hz,1h),6.79(s,1h),6.53(d,j＝8.4hz,1h),6.33(s,1h),4.82(d,j＝6.0hz,2h),3.88-3.74(m,2h),3.26-3.17(m,2h),2.61-2.54(m,1h),2.08(s,3h),2.00-1.87(m,2h),1.72-1.55(m,2h).

3)终产物d25的合成：

将中间体d25-2(50mg,0.12mmol),(1s,2r)-2-甲基环己胺盐酸盐(23mg,0.15mmol),dipea(48mg,0.37mmol)和hatu(71mg,0.19mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1到1:2)得一白色固体(40mg，64％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d25。

实施例25

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d26，其是由如下方法合成的：

终产物d26的合成：

将中间体d25-2(50mg,0.12mmol),(1r,2s)-2-甲基环己胺盐酸盐(23mg,0.15mmol),dipea(48mg,0.37mmol)和hatu(71mg,0.19mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1到1:2)得一白色固体(43mg，69％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d26。

实施例26

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d27，其是由如下方法合成的：

终产物d27的合成：

将中间体d25-2(40mg,0.1mmol),2-甲基苯胺(13mg,0.12mmol),dipea(26mg,0.2mmol)和hatu(57mg,0.15mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1到1:2)得一白色固体(34mg，69％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d27。

实施例27

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d28，其是由如下方法合成的：

终产物d28的合成：

将中间体d25-2(40mg,0.1mmol),3-氨基-2-甲基吡啶(13mg,0.12mmol),dipea(26mg,0.2mmol)和hatu(46mg,0.12mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1到1:3)得一白色固体(15mg，30％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d28。

实施例28

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d29，其是由如下方法合成的：

终产物d29的合成：

将中间体d25-2(40mg,0.1mmol),4-氨基-3-甲基吡啶(13mg,0.12mmol),dipea(26mg,0.2mmol)和hatu(46mg,0.12mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1到1:3)得一白色固体(30mg，61％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d29。

实施例29

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d30，其是由如下方法合成的：

终产物d30的合成：

将中间体d25-2(40mg,0.1mmol),3-氨基-4-甲基吡啶(13mg,0.12mmol),dipea(26mg,0.2mmol)和hatu(46mg,0.12mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1到1:3)得一白色固体(10mg，20％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d30。

实施例30

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d31，其是由如下方法合成的：

终产物d31的合成：

将中间体d25-2(40mg,0.1mmol),2-氨基-3-甲基吡啶(13mg,0.12mmol),dipea(26mg,0.2mmol)和hatu(46mg,0.12mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1到1:3)得一白色固体(11mg，22％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d31。

实施例31

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d32，其是由如下方法合成的：

1)中间体d32-1的合成：

将中间体d13-1(320mg，1mmol)，2-甲酰基苯硼酸(180mg，1.2mmol)，四(三苯基膦)钯(92mg，0.08mmol)和氟化铯(304mg，2mmol)加入到乙醇(20ml)和水(4ml)的混合溶剂中，氮气保护，90℃下反应4小时。减压浓缩，加入饱和的食盐水(30ml)，再用乙酸乙酯(30ml*2)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)得一黄色固体(240mg，69％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.53(s,1h),8.04(d,j＝7.6hz,1h),7.65-7.52(m,3h),4.17(q,j＝7.1hz,2h),4.02-3.99(m,2h),3.36-3.29(m,2h),2.64-2.55(m,1h),2.09-2.04(m,2h),1.96-1.86(m,2h),1.28(t,j＝7.2hz,3h).

2)中间体d32-2的合成：

将中间体d32-1(150mg,0.43mmol),2-氨基-5-甲基吡啶(93mg,0.86mmol)和醋酸(26mg,0.43mmol)加入到1，2-二氯乙烷(15ml)中，70℃下搅拌4小时。在0℃下加入nabh(aco)3(275mg,1.29mmol)，移至常温并反应16小时。加入二氯甲烷(30ml)稀释，再用饱和的碳酸氢钠水溶液(30ml)洗，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得一黄色油状物(75mg，39％)。lc-ms(m/z):438.2[m+h⁺].

3)中间体d32-3的合成：

将中间体d32-2(75mg,0.17mmol)加入到四氢呋喃(10ml)和甲醇(1ml)的混合溶剂中，然后滴加1nlioh(1ml,1.02mmol)。常温下反应12小时，减压浓缩除去大部分四氢呋喃，用水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml)洗，水相再用1n盐酸调至ph5-6,最后用二氯甲烷(20ml*4)萃取。合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩得一黄色固体(30mg,42％)。

4)终产物d32的合成：

将中间体d32-3(30mg,0.07mmol),2-甲基环己基胺(12mg,0.1mmol),dipea(18mg,0.14mmol)和hatu(35mg,0.09mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(40ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(乙酸乙酯)得一白色固体(8mg，21％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d32。

实施例32

本实施例提供一种具有刺猬信号通路拮抗活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物d33，其是由如下方法合成的：

1)中间体d33-1的合成：

将1-甲基吡唑(2g,24mmol)加入到无水的四氢呋喃(30ml)中，氮气保护下，-70℃下慢慢滴加正丁基锂(2.5m，11ml,29mmol)，并在此温度下搅拌1小时。然后再慢慢滴加dmf(2.1g，29mmol)的四氢呋喃(5ml)溶液。滴加结束后，慢慢升至常温，并在常温下反应12小时。往反应液中加入饱和的氯化钠水溶液(30ml)，再用二氯甲烷(100ml*2)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(二氯甲烷)得一黄色油状物(2.1g，78％)。

2)中间体d33-2的合成：

将中间体d33-1(2g，18mmol)加入到dmf(14ml)中，在0℃下慢慢滴加nbs(3.6g，20mmol)的dmf(12ml)溶液，然后在常温下搅拌12小时。往反应液中加入2mnaoh(20ml)，并且搅拌10分钟，然后再加入饱和食盐水(100ml)，用乙酸乙酯(200ml)萃取，有机相最后用饱和食盐水(100ml*4)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)得一白色固体(1.9g，55％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.89(s,1h),7.51(s,1h),4.16(s,3h).

3)中间体d33-3的合成：

将中间体d33-2(700mg，3.7mmol)，联硼酸频那醇酯(1.1g，4.4mmol)，醋酸钾(1.1g,11.1mmol)和pd(dppf)cl2(190mg,0.26mmol)加入到1,4-二氧六环(25ml)中，氮气保护，在105℃下反应12小时。减压浓缩，加入饱和食盐水(30ml)，再用乙酸乙酯(40ml*2)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩得黑色油状物粗品(2.9g)。

4)中间体d33-4的合成：

将中间体d13-1(320mg，1mmol)，中间体d33-3(30％，1.18g，1.5mmol)，四(三苯基膦)钯(81mg，0.07mmol)和氟化铯(304mg，2mmol)加入到乙醇(20ml)和水(4ml)的混合溶剂中，氮气保护，90℃下反应12小时。减压浓缩，加入饱和的食盐水(30ml)，再用乙酸乙酯(30ml*2)萃取，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得一黄色固体(257mg，73％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.52(s,1h),7.66(s,1h),4.22(s,3h),4.16(q,j＝7.2hz,2h),3.98-3.95(m,2h),3.33-3.27(m,2h),2.64-2.52(m,1h),2.07-2.04(m,2h),1.94-1.85(m,2h),1.27(t,j＝6.8hz,3h).

5)中间体d33-5的合成：

将中间体d33-4(224mg,0.64mmol),2-氨基-5-甲基吡啶(138mg,1.28mmol)和醋酸(38mg,0.64mmol)加入到1，2-二氯乙烷(20ml)中，70℃下搅拌4小时。在0℃下加入nabh(aco)3(407mg,1.92mmol)，移至常温并反应16小时。加入二氯甲烷(30ml)稀释，再用饱和的碳酸氢钠水溶液(40ml)洗，有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1到1:4)得一黄色油状物(187mg，66％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.87(s,1h),7.52(s,1h),7.15(d,j＝7.6hz,1h),6.38(s,1h),6.04(s,1h),4.78(d,j＝6.4hz,2h),4.20-4.14(m,5h),3.96-3.92(m,2h),3.29-3.24(m,2h),2.60-2.54(m,1h),2.13(s,3h),2.07-2.04(m,2h),1.93-1.84(m,2h),1.27(d,j＝7.0hz,3h).

6)中间体d33-6的合成：

将中间体d33-5(187mg,0.42mmol)加入到四氢呋喃(10ml)和甲醇(1ml)的混合溶剂中，然后滴加1nlioh(2.5ml,2.5mmol)。常温下反应12小时，减压浓缩除去大部分四氢呋喃，用水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml)洗，水相再用1n盐酸调至ph5-6,最后用二氯甲烷(20ml*4)萃取。合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩得一黄色固体(150mg,86％)。

4)终产物d33的合成：

将中间体d33-6(50mg,0.12mmol),2-甲基环己基胺(20mg,0.18mmol),dipea(31mg,0.24mmol)和hatu(60mg,0.16mmol)加入到dmf(1ml)中，常温下搅拌12小时。用乙酸乙酯(40ml)稀释反应液，再用饱和的氯化钠水溶液(30ml*5)洗。有机相经无水硫酸钠干燥后，过滤，浓缩，再经柱层析(乙酸乙酯)得一白色固体(23mg，37％)。经过核磁图谱解析(图谱数据见表1)，所得到的固体为化合物d33。

表1实施例1-33获得化合物的解析结构和波谱数据。

实施例33

本实施例对实施例1-32所得的化合物进行生物测试，以2012年成功上市的vismodegib为标准对照物：

nih3t3-gre-luc荧光素酶报告基因检测实验

nih3t3细胞是在含有10％fbs(hyclone)的dmem(11965,gibico)中培养的。gre-萤火虫荧光素质粒是经由放大八倍的细胞转录因子gli-1响应元素植入mcs中获得。单克隆是经过重组苏尼克刺猬通路蛋白和结构式如下式所示的小分子激动剂sag验证的。被验证的精选克隆用于检测刺猬通路信号。

表达gre-萤火虫素的nih3t3细胞是在完整的培养液中维持的。当需要做分析检测时，细胞被加到96孔板中，最终每孔含细胞约一万五千。96孔板在被培养48小时。被检测化合物由dmso和检测缓冲液被序列稀释。10nmsag作为刺猬通路激动剂。随后100微升包含有被测化合物和激动剂的分析缓冲液小心加入到含有细胞中96孔板中，并在37摄氏度培养48小时。

在培养48小时后，40微升萤火虫荧光素酶被加入到每一个孔中。96孔板在室温下轻摇5分钟。发光信号由读板器记录。化合物的活性通过其对发光信号的阻断计算而出，对所合成的化合物进行测试，结果如下表：

表2杂环化合物d1-d33对hedgehog信号通路的抑制能力测定实验的结果：

上述结果显示，33个化合物hedgehog信号通路都有抑制活性，其中化合物d13，d14，d15，d16，d18，d22，d24，d25和d26优于或与vismodegib的抑制活性相当，具有很好的刺猬通路拮抗效果。

由此可见，本发明新的具有刺猬通路拮抗剂活性的1,3,4-噻二唑杂环化合物，能够通过刺猬通路拮抗阻断肿瘤细胞转移再生，从而治疗肿瘤疾病。

本发明尚有多种实施方式，凡采用等同变换或者等效变换而形成的所有技术方案，均落在本发明的保护范围之内。