选择性取代的喹啉化合物的制作方法

本申请是申请日为2014年10月14日、优先权日为2013年10月14日、申请号为201480056216.8、发明名称为“选择性取代的喹啉化合物”的发明专利申请的分案申请。

发明背景

本公开内容的实施方案涉及选择性取代的喹啉化合物和包含一种或多种所述化合物作为活性成分的药物试剂。更具体地，本公开内容的实施方案涉及用作对toll样受体(tlr)7和toll样受体8的拮抗剂或抑制剂的化合物，以及所述化合物在有效治疗系统性红斑狼疮(sle)和狼疮肾炎的药物组合物中的用途。

相关技术描述

系统性红斑狼疮(sle)和狼疮肾炎是以炎症和组织损伤为特征的自身免疫疾病。例如，sle可以对皮肤、肝脏、肾脏、关节、肺和中枢神经系统造成损伤。sle患者可经历全身症状，例如极度疲劳、关节疼痛和肿胀、不明原因发热、皮疹、肾功能障碍。因为在患者中涉及的器官不同，因此症状可多样化。sle是主要发于年轻女性的疾病，发作高峰为15-40岁，并且在女性中的患病率比男性高约10倍。

目前对sle的治疗通常涉及免疫调节药物，例如贝利单抗(belimumab)、羟氯喹、强的松(prednisone)和环磷酰胺。所有这些药物可具有剂量限制性副作用，并且许多患者仍然患有难以控制的疾病。

发明概述

本公开内容的实施方案提供了用于预防或治疗患者中以toll样受体7活化或toll样受体8活化为特征的疾病或病况的化合物及方法。一个实施方案以式(i)的化合物为特征：

另一实施方案提供式(i)的化合物：

其中

r8为h或甲基；

r9为-h、甲基或羟基；

r10为-h、甲基、羟基或nr11r12；以及

其中r11和r12是独立地选择的，并且其中

r11为-h、甲基或-ch2-c(o)ch2ch3；以及

r12为

-h、氧代吡咯烷基、二氧化噻喃基、异丙基磺酰基、四氢吡喃基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、羟基、二甲胺乙烷磺酰基、胺乙烷磺酰基、二甲胺丙烷磺酰基，

直链的、支链的或环状的c1-c6烷基，其被以下任选取代

甲氧基、-f、≡n、甲基氧杂环丁烷基、乙氧基、氧代-、甲基咪唑基、甲硫基

被甲基或-cf3任选取代的哌嗪基，

被甲基或乙基任选取代的乙酰胺基，

被甲基任选取代的噁唑基，

被甲基、氰基或羟基任选取代的吡唑基，

-c(o)r13，其中

r13为

环状的、支链的或直链的c1-c7烷基，其被以下任选取代nr15r14，其中r15和r14独立地选自甲基和-h，

甲氧基、羟基、甲硫基、乙硫基、甲基磺酰基、氧代-、噻唑烷基、吡啶基、吡唑并吡啶基、甲基氨基、噻唑基、-f、吗啉基、甲基异噁唑基、甲基氧杂环丁烷基、氨基氧杂环丁烷基，

被羟基、-c(o)nh2任选取代的苯基；

饱和的或不饱和的五元环烷基，其中1个或2个碳原子被氮原子替代，其中环胺或环二胺被羟基或甲基任选取代。

在另一实施方案中，化合物为5-((3r，5s)-3-氨基-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈。

在另一实施方案中，前面段落的化合物或化合物的药物有效的盐对在hek-293细胞系中表达的人tlr7受体的ic50小于或等于20nm。在另一实施方案中，本公开内容的前面段落的化合物或其药物有效的盐对在hek-293细胞系中表达的人tlr7受体的ic50小于或等于100nm。在另一实施方案中，对在hek-293细胞系中表达的人tlr7受体的ic50通过以下测量：(1)将在包含10％胎牛血清的dulbecco改良eagle培养基中密度为2.22×10⁵个细胞/ml的稳定表达tlr7的hek-293细胞系的细胞接种至384孔板内，并且在37℃、5％co2下孵育2天；(2)添加所述化合物或其药物可接受的盐，并且将所述细胞孵育30分钟；(3)添加3μg/ml的cl097(invivogen)并且将所述细胞孵育约20小时；以及(4)通过测量发光对nf-kappab依赖性报告物活化进行定量。

在本公开内容的其它实施方案中，化合物对在hek-293细胞系中表达的人tlr7受体的ic50小于或等于200nm、小于或等于180nm、小于或等于160nm、小于或等于140nm、小于或等于120nm、小于或等于100nm、小于或等于80nm、小于或等于60nm、小于或等于40nm、小于或等于20nm。在本公开内容的其它实施方案中，化合物对在hek-293细胞系中表达的人tlr7受体的ic50为10nm至30nm、10nm至50nm、10nm至100nm、30nm至50nm、30nm至100nm或50nm至100nm。在其它实施方案中，对在hek-293细胞系中表达的人tlr7受体的ic50通过以下测量：(1)将在包含10％胎牛血清的dulbecco改良eagle培养基中密度为2.22×10⁵个细胞/ml的稳定表达tlr7的hek-293细胞系的细胞接种至384孔板内，并且在37℃、5％co2下孵育2天；(2)添加所述化合物或其药物可接受的盐，并且将所述细胞孵育30分钟；(3)添加3μg/ml的cl097(invivogen)并且将所述细胞孵育约20小时；以及(4)通过测量发光对nf-kappab依赖性报告物活化进行定量。

其它实施方案提供了用于治疗狼疮的方法，包括但不限于治疗系统性红斑狼疮、皮肤型狼疮、神经精神性狼疮、胎儿心脏传导阻滞和抗磷脂综合征，包括施用药物有效量的本公开内容的化合物或药物可接受的盐。

其它实施方案提供了用于拮抗tlr7的方法，包括施用药物有效量的本公开内容的化合物或药物可接受的盐。

其它实施方案提供了用于拮抗tlr8的方法，包括施用药物有效量的本公开内容的化合物或药物可接受的盐。

其它实施方案提供了包含至少一种本公开内容的化合物或药物可接受的盐和至少一种药物可接受的载体的药物组合物。

其它实施方案提供了用于治疗系统性红斑狼疮或狼疮的方法，包括施用药物有效量的本公开内容的化合物或药物可接受的盐。

其它实施方案提供了用于拮抗tlr7的方法，包括施用药物有效量的本公开内容的化合物或药物可接受的盐。

其它实施方案提供了用于拮抗tlr8的方法，包括施用药物有效量的本公开内容的化合物或药物可接受的盐。

其它实施方案提供了包含至少一种本公开内容的化合物或药物可接受的盐和至少一种药物可接受的载体的药物组合物。

本文所使用的术语“任选取代”意为标的结构(subjectstructure)可以包括，但不必须包括，独立地选自低级烷基、甲氧基-、-oh、-nh2、-ch2-nh-ch2、-och2ch2ch3或-och(ch3)2中的一个或多个取代基。如果被任选取代的部分是环状的，那么任选取代可以是环中两个原子之间的甲基桥。

本文所使用的符号“c(o)”指的是具有式c＝o的羰基。

除非另有说明，否则在本公开内容(包括权利要求)中所使用的“一个(种)(a)”和“一个(种)(an)”意为“一个(种)或多个(种)”。

如本文所使用，“低级烷基”指的是具有一个至四个碳原子的直链的饱和烃，或在三个碳基团和四个碳基团的情况下为直链、支链或环状的饱和烃。

如本文所使用，当涉及包含氮的杂环部分时，术语“通过氮连接”意为所述部分与另一结构连接的点是通过作为杂环的一部分的氮。

如本文所使用，术语“tlr7/8”意为“tlr7和tlr8”或者“tlr7或tlr8”或者“tlr7和/或tlr8”。基于出现“tlr7/8”的上下文，本领域的技术人员可以理解特定的含义。

本文所述的杂环部分包括氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、甲基氮杂环丁基、吡唑基、哌嗪基、吗啉基、噻唑基、吡咯并吡咯基、咪唑烷基和异噻唑基。在提及杂环基团的情况下，除非另外说明，否则应当理解的是，在基团中的杂环原子可以处于基团中的任何位置。还应当理解的是，咪唑基、吡唑基、噻唑基和吡咯基可以是不饱和的或部分不饱和的。本公开内容的实施方案可以包括药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种本公开内容的化合物与药物可接受的赋形剂。这些药物组合物可以用于治疗或预防患者(通常是人类患者)中以tlr7/8活化为特征的疾病或病况，所述患者患有或易患此类病况或疾病。以tlr7/8活化为特征的疾病或病况的实例包括系统性红斑狼疮(sle)和狼疮肾炎。

如本文所使用，本公开内容的实施方案的化合物的“有效量”为以足以治疗或预防sle和狼疮肾炎的量的上述化合物的有效量。

本文所提供的实施方案可以包括不对称中心或手性中心。实施方案包括各种立体异构体及其混合物。本公开内容的实施方案的化合物的各个立体异构体可以由包含不对称中心或手性中心的商购原料来合成制备，或通过制备对映体化合物的混合物然后拆分那些化合物来制备。适当的拆分方法包括：将指定(+/-)的对映体的外消旋混合物附着于手性助剂，通过色谱法或重结晶分离所产生的非对映体，并且从所述助剂中分离光学纯产物；或在手性色谱柱上直接分离光学对映体的混合物。

本公开内容的实施方案还包括包含本公开内容的任何化合物以及药物可接受的赋形剂的药物组合物。药物组合物可以用于治疗或预防sle和狼疮肾炎。因此，本公开内容的实施方案还可以以用于治疗或预防患有或易患狼疮肾炎或sle的人类患者中的sle或狼疮肾炎的方法为特征。

本公开内容的实施方案包括本文所提供的化合物的药物可接受的盐。术语“药物可接受的盐”指的是在合理的医学判断范围内，适用于与人类和动物的组织接触而没有异常毒性、刺激性或过敏反应的那些盐。药物可接受的盐是本领域众所周知的。例如，s.m.berge等人在j.pharmaceuticalsciences66：1-19，1977中详细描述了药物可接受的盐。可以在化合物的最终分离和纯化过程中原位制备盐或单独通过游离的碱性基团与适当的有机酸的反应原位制备盐。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚糖酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、单马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等，以及无毒性铵盐、季铵盐和胺阳离子盐，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。本文所用的术语“药物可接受的酯”表示在体内水解并且包括在人体内容易分解以留下母体化合物或其盐的那些酯。适当的酯基团包括，例如衍生自药物可接受的脂肪族羧酸，特别是链烷酸、链烯酸、环烷酸和链烷双酸，其中各个烷基或烯基基团通常具有不超过6个碳原子的那些酯基团。具体的酯的实例包括甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯。

在本申请中，对映体通过符号“r”或“s”来标记，或通过常规方法用定义在三维空间中位于页面平面上方的取代基的加粗线以及定义在三维空间中位于打印页面平面下方的取代基的点划线或虚线来绘制。如果没有做立体化学的标记，那么结构定义包括两种立体化学选择。如果结构或化学名称包括“rel”或“rel”，那么将该结构理解为显示相对立体化学。

本公开内容的实施方案涉及以下内容：

(1)式(i)的化合物：

其中

r8为h或甲基；

r9为-h、甲基或羟基；

r10为-h、甲基、羟基或nr11r12；以及

其中r11和r12是独立地选择的，以及其中

r11为-h、甲基或-ch2-c(o)ch2ch3；以及

r12为

-h、氧代吡咯烷基、二氧化噻喃基、异丙基磺酰基、四氢吡喃基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、羟基、二甲胺乙烷磺酰基、胺乙烷磺酰基、二甲胺丙烷磺酰基，

直链的、支链的或环状的c1-c6烷基，其被以下任选取代

甲氧基、-f、≡n、甲基氧杂环丁烷基、乙氧基、氧代-、甲基咪唑基、甲硫基，

被甲基或-cf3任选取代的哌嗪基，

被甲基或乙基任选取代的乙酰胺基，

被甲基任选取代的噁唑基，

被甲基、氰基或羟基任选取代的吡唑基，

-c(o)r13，其中

r13为

环状的、支链的或直链的c1-c7烷基，其被以下任选取代nr15r14，其中r15和r14独立地选自甲基和-h，

甲氧基、羟基、甲硫基、乙硫基、甲基磺酰基、氧代-、噻唑烷基、吡啶基、吡唑并吡啶基、甲基氨基、噻唑基、-f、吗啉基、甲基异噁唑基、甲基氧杂环丁烷基、氨基氧杂环丁烷基，

被羟基、-c(o)nh2任选取代的苯基，

饱和的或不饱和的五元环烷基，其中1个或2个碳原子被氮原子替代，其中环胺或环二胺被羟基或甲基任选取代。

(2)如第(1)项所述的化合物，其中所述化合物选自：

(r)-5-(3-氨基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-氨基-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-(二甲基氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

(r)-5-(5-氨基-3，3-二甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈二盐酸盐；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)乙酰胺；

5-((3r，5s)-3-羟基-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-(甲基氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈盐酸盐；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(二甲基氨基)乙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-甲氧基乙酰胺；

2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)乙酰胺；

5-((3r，5s)-3-((2-甲氧基乙基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-((2-甲氧基乙基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈2-羟基丙烷-1，2，3-三甲酸盐；

2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-甲基丙酰胺盐酸盐；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(甲基氨基)乙酰胺盐酸盐；

5-((3r，5s)-3-氨基-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲酰胺盐酸盐；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-羟基乙酰胺；

(s)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-羟基-3-甲基丁酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-羟基苯甲酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4-羟基苯甲酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(甲硫基)乙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(乙硫基)乙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(甲基磺酰基)乙酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)丙酰胺；

(r)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)丙酰胺；

1-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)环丙烷甲酰胺；

(r)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-羟基丙酰胺；

(r)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)吡咯烷-2-甲酰胺；

2-(氮杂环丁烷-3-基)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)乙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)吡咯烷-3-甲酰胺；

2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-甲基丁酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-甲基丁酰胺；

5-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)戊酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)戊酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-甲氧基丙酰胺；

(2r，3s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-羟基丁酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)哌啶-4-甲酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)哌啶-3-甲酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(吡咯烷-3-基)乙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)哌嗪-2-甲酰胺；

(2s，4r)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺；

(2s，3s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-甲基戊酰胺；

(r)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4-甲基戊酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4-甲基戊酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3，3-二甲基丁酰胺；

2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3，3-二甲基丁酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰胺；

(s)-3-氨基-n1-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)琥珀酰胺；

(s)-2-氨基-n1-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)琥珀酰胺；

(s)-2-氨基-n1-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)琥珀酰胺；

(s)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)噻唑烷-4-甲酰胺；

4-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)苯甲酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(哌啶-4-基)乙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4-甲基哌啶-4-甲酰胺；

1-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-羟基环戊烷甲酰胺；

(s)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4，4-二甲基戊酰胺；

(s)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(甲基氨基)己酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)戊二酰胺；

(r)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-(乙硫基)丙酰胺；

2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4-(甲硫基)丁酰胺；

(r)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-苯基乙酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-苯基乙酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-(1h-咪唑-5-基)丙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-(哌啶-2-基)丙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-(哌啶-3-基)丙酰胺；

1-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4-羟基环己烷甲酰胺；

(r)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-苯基丙酰胺；

(2s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4-(甲基亚硫酰基)丁酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-(吡啶-2-基)丙酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-(吡啶-4-基)丙酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-(吡啶-3-基)丙酰胺；

(r)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-(吡啶-4-基)丙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氢-1h-吡唑并[4，3-c]吡啶-3-甲酰胺；

2-(1-(氨基甲基)环己基)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)乙酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-(噻唑-4-基)丙酰胺；

(s)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(甲基氨基)-3-苯基丙酰胺；

(r)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(甲基氨基)-3-苯基丙酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-(4-羟基苯基)丙酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4-(甲基磺酰基)丁酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2，2，2-三氟乙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)丙烷-2-磺酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3，3，3-三氟丙酰胺；

(s)-3-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4-甲基戊酰胺；

(s)-3-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)丁酰胺；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-((2，2，2-三氟乙基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)s)-3-((2，2-二氟乙基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)吗啉-2-甲酰胺；

(s)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(甲基氨基)丙酰胺；

(r)-3-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-4-甲基戊酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-5-甲基异噁唑-3-甲酰胺；

(r)-3-氨基-n-((3r，5s)s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)丁酰胺；

(s)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰胺；

n-((3r，5s)s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(1h-咪唑-5-基)乙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(吡啶-2-基)乙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(1h-吡唑-1-基)乙酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-1h-吡唑-4-甲酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)烟酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-1-甲基-1h-咪唑-5-甲酰胺；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-1-甲基-1h-吡唑-5-甲酰胺；

(s)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3，3，3-三氟丙酰胺；

(r)-2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3，3，3-三氟丙酰胺；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-((3，3，3-三氟丙基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-((氰基甲基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-甲基氧杂环丁烷-3-甲酰胺；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-(((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

(r)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)吗啉-3-甲酰胺；

(s)-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)吗啉-3-甲酰胺；

3-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氧杂环丁烷-3-甲酰胺盐酸盐；

5-((3r，5s)-3-(((3-氨基氧杂环丁烷-3-基)甲基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈盐酸盐；

2-(((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氨基)乙酸乙酯；

2，2’-(((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氮烷二基)二乙酸二乙酯；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-((四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-(乙基氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-(氧杂环丁烷-3-基氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-(((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-((四氢呋喃-3-基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

2-(((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氨基)乙酰胺；

2-(((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氨基)-n-甲基乙酰胺；

2-(((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氨基)-n-乙基乙酰胺；

2-(((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氨基)-n，n-二甲基乙酰胺；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-((噁唑-2-基甲基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-(((1-甲基-1h-咪唑-4-基)甲基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-(((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-(((1h-吡唑-5-基)甲基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-(((1，4-二甲基-1h-吡唑-3-基)甲基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-(((3，5-二甲基异噁唑-4-基)甲基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-((2-氧代吡咯烷-3-基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-((3-(甲基磺酰基)丙基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-((2-氰基环戊基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-((1-(吡啶-2-基)乙基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-((四氢-2h-吡喃-3-基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-(((1s，4s)-4-羟基环己基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-(((1r，4r)-4-羟基环己基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-((4-氧代环己基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3r，5s)-3-((1，1-二氧化四氢-2h-噻喃-4-基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-((1-(6-甲基吡啶-2-基)乙基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈；

2-氨基-n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)乙烷磺酰胺盐酸盐；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(二甲基氨基)乙烷磺酰胺盐酸盐；

n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-3-(二甲基氨基)丙烷-1-磺酰胺盐酸盐；

5-((3s，5r)-3-甲基-5-(甲基(氧杂环丁烷-3-基)氨基)哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈乙酸盐；以及

5-((5s)-3-((1-羟基丙-2-基)氨基)-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈。

(3)如第(1)项所述的化合物，其中所述化合物为5-((3r，5s)-3-氨基-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈。

(4)治疗系统性红斑狼疮或狼疮的方法，其包括施用药物有效量的第(1)项至第(3)项中任一项所述的化合物或药物可接受的盐。

(5)如第(4)项所述的方法，其中所述化合物作为药物可接受的盐施用。

(6)拮抗tlr7的方法，其包括施用药物有效量的第(1)项至第(3)项中任一项所述的化合物或药物可接受的盐。

(7)拮抗tlr8的方法，其包括施用药物有效量的第(1)项至第(3)项中任一项所述的化合物或药物可接受的盐。

(8)药物组合物，其包含至少一种第(1)项至第(3)项中任一项所述的化合物或药物可接受的盐和至少一种药物可接受的载体。

(9)如第(8)项所述的药物组合物，其中所述化合物或其药物有效的盐对hek-293细胞系中的人tlr7受体的ic50小于或等于100nm。

(10)如第(8)项所述的药物组合物，其中所述化合物或其药物有效的盐对在hek-293细胞系中表达的人tlr7受体的ic50小于或等于20nm。

(11)如第(8)项所述的药物组合物，其中所述化合物或其药物有效的盐对在hek-293细胞系中表达的人tlr7受体的ic50小于或等于5nm。

(12)如第(9)项至第(11)项中任一项所述的药物组合物，其中对在hek-293细胞系中表达的人tlr7受体的ic50通过以下测量：(1)将在包含10％胎牛血清的dulbecco改良eagle培养基中密度为2.22×10⁵个细胞/ml的稳定表达tlr7的hek-293细胞系的细胞接种至384孔板内，并且在37℃、5％co2下孵育2天；(2)添加所述化合物或其药物可接受的盐，并且将所述细胞孵育30分钟；(3)添加3μg/ml的cl097(invivogen)并且将所述细胞孵育约20小时；以及(4)通过测量发光对nf-kappab依赖性报告物活化进行定量。

(13)治疗系统性红斑狼疮、皮肤型狼疮、神经精神性狼疮、或狼疮的方法，其包括施用药物有效量的第(1)项至第(3)项中任一项所述的化合物或药物可接受的盐。

(14)如第(13)项所述的方法，其中所述化合物作为药物可接受的盐施用。

(15)第(1)项至第(3)项中任一项所述的化合物的药物可接受的盐。

附图简述

图1a至图1d示出了在dba/1姥鲛烷模型中用er-888840(5-((3r，5s)-3-氨基-5-甲基哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈)治疗的结果。图例：向10周龄的雌性dba/1小鼠腹膜内注射0.5ml姥鲛烷或pbs。对18周龄的动物采血用于基线自身抗体滴度的预给药。在注射姥鲛烷之后8周，开始用媒介物(veh；0.5％甲基纤维素)或11mg/kger-888840、33mg/kger-888840或100mg/kger-888840对18周龄的动物进行一天一次的口服给药，并且持续治疗12周。在实验结束时，取出血浆样品并且通过elisa测定抗-dsdna滴度和抗组蛋白滴度(图1a)以及抗-sm/rnp滴度和抗-ribop滴度(图1b)。在治疗8周之后，通过qpcr板检测ifn调节基因在全血中的表达(图1c)。列出了在姥鲛烷治疗的小鼠中通过姥鲛烷治疗的上调基因以及通过化合物治疗调节的基因。计算(关于ifn评分计算的细节参见“药物学材料和方法”部分)了各个小鼠的干扰素评分并且使用mann-whitneyt检验对组进行了对比(图1d)。

图2a至图2e示出了在dba/1姥鲛烷模型中用er-888840治疗的结果。图例：向10周龄的雌性dba/1小鼠腹膜内注射0.5ml姥鲛烷或pbs。对12周龄的动物采血用于基线自身抗体滴度。在注射姥鲛烷之后4周，开始用媒介物(veh；0.5％甲基纤维素)或33mg/kger-888840、100mg/kger-888840或300mg/kger-888840对14周龄的动物进行一天一次的口服给药，并且持续治疗8周。在实验结束时，取出血浆并且通过elisa测定抗-dsdna滴度(图2a)、抗-ribop滴度(图2b)、抗组蛋白滴度(图2c)和抗-sm/rnp滴度(图2d)。在治疗12周之后，通过qpcr板检测ifn调节基因在全血中的表达，并且计算(关于ifn评分计算的细节参见“药物学材料和方法”部分)ifn基因标签评分(图2e)。表格示出了与pbs对照对比，通过姥鲛烷治疗而显著上调的18个基因的完整列表。绘制了各个治疗组中个体动物的干扰素评分，并且使用mann-whitney检验进行了对比。

包括多页的图3a至图3bb示出了本文所提供的各种实施方案的结构和相应的化学名称。“er-编号”是对各个化合物所指定的参考编号。在可获得的情况下，还包括对稳定表达人tlr7的hek细胞系的活性、对稳定表达人tlr9的hek细胞系的活性、1hnmr数据和质谱分析数据。

发明详述

i.tlr和狼疮

哺乳动物toll样受体(tlr)除了起到能够检测外源性(“非自身”)病原体相关分子模式(pamp-即通过tlr4检测细菌lps)的先天免疫受体的作用以外，它们还能够识别宿主组织损伤或应激反应后释放的内源性刺激物(damp)。kono，h.和k.l.rock，howdyingcellsalerttheimmunesystemtodanger.natrevimmunol，2008.8(4)：p.279-89。在最近的十年中，已经出现了对内源性(“自身”)危险相关分子模式(damp)的tlr活化与自身免疫紊乱的病因学之间的关联的理解。具体地，tlr7可以通过来源于哺乳动物源和病毒源的单链rna(ssrna)来活化，而tlr9可以通过来源于哺乳动物源、病毒源和细菌源的dna来活化。

狼疮的特征在于针对双链dna(dsdna)本身和相关的蛋白质(组蛋白)的自身抗体反应性，以及针对诸如ro、la、smith(sm)和u1snrnp的rna相关蛋白质的宽阵列的自身抗体反应性。kirou，k.a.等人，activationoftheinterferon-alphapathwayidentifiesasubgroupofsystemiclupuserythematosuspatientswithdistinctserologicfeaturesandactivedisease.arthritisrheum，2005.52(5)：p.1491-503。显示与疾病严重程度直接相关的狼疮的第二种常见标志为：在狼疮患者的pbmc(所谓的1型ifn基因标签)中1型干扰素(ifn)(特别是ifnα)的异常表达以及多组ifnα调节基因的相应提高。kirou，k.a.等人，与前述相同。血液中ifn主要来源于称作浆细胞样树突状细胞(pdc)的特化的免疫细胞，其组成型表达tlr7和tlr9。

当许多研究小组共同证明了从狼疮患者中而不是从健康供体中分离的抗体复合物能够以tlr7/9依赖性和rna/dna依赖性的方式驱动pdc产生ifn时，推测了这两种疾病特性、自身抗体以及ifn水平之间的因果关系。means，t.k.等人，humanlupusautoantibody-dnacomplexesactivatedcsthroμghcooperationofcd32andtlr9.jclininvest，2005.115(2)：407-17页；vollmer，j.等人，immunestimulationmediatedbyautoantigenbindingsiteswithinsmallnuclearrnasinvolvestoll-likereceptors7and8.jexpmed，2005.202(11)：1575-85页；savarese，e.等人，u1smallnuclearribonucleoproteinimmunecomplexesinducetypeiinterferoninplasmacytoiddendriticcellsthroμghtlr7.blood，2006.107(8)：3229-34页。此外，ifn刺激tlr7/9在b细胞上的表达增加，由此增强自身反应b细胞分化成产生抗体的浆细胞的tlr/bcr(b细胞受体)活化。banchereau，j.和v.pascual，typeiinterferoninsystemiclupuserythematosusandotherautoimmunediseases.immunity，2006.25(3)：383-92页。以这种方式，包含核酸tlr7/9配体的自身抗体复合物的水平驱动促炎性循环和狼疮疾病发展。我们认为有可能tlr7/8的药理学拮抗将通过中断这种促炎性循环、降低ifn水平以及抑制由pdc和b细胞介导的自身免疫疾病过程，从而对狼疮患者提供治疗益处。

几种其它证据表明tlr7在人狼疮病因学中的作用，并且支持了tlr受体是疾病干预的有效目标的观点。已经鉴定了在tlr7的3’utr中的特异性多态性，并且显示出与tlr7表达提高和ifn基因标签增强两者相关。shen，n.等人，sex-specificassociationofx-linkedtoll-likereceptor7(tlr7)withmalesystemiclupuserythematosus.procnatlacadsciusa，2010.107(36)：15838-43页。deng，y.等人，microrna-3148modulatesallelicexpressionoftoll-likereceptor7variantassociatedwithsystemiclupuserythematosus.plosgenetics，2013.e1003336。此外，狼疮护理标准(soc)抗疟药物(例如氯喹)破坏内体tlr7/9信号传导并抑制由ssrna-核糖核蛋白复合物或狼疮患者血清诱导的pbmc和/或pdcifnalpha的产生。此外，骨髓dc和单核细胞在自身rna/tlr8信号传导后产生il-12p40、tnfα和il-6，表明除了tlr7驱动pdc产生ifn的作用以外，tlr8依赖性促炎症因子对人狼疮病因学存在额外的作用。vollmer，与前述相同；gorden，k.b.等人，synthetictlragonistsrevealfunctionaldifferencesbetweenhumantlr7andtlr8.jimmunol，2005.174(3)：1259-68页。

小鼠模型证明在狼疮中也存在tlr的作用。公开的研究已经共同证明，单tlr7基因缺失或双tlr7/9基因缺失或双tlr7/9药理学抑制在四种不同的狼疮模型中降低了疾病的严重程度。nickerson，k.m.等人，tlr9regulatestlr7-andmyd88-dependentautoantibodyproductionanddiseaseinamurinemodeloflupus.jimmunol，2010.184(4)：1840-8页；fairhurst，a.m.等人，yaaautoimmunephenotypesareconferredbyoverexpressionoftlr7.eurjimmunol，2008.38(7)：1971-8页；deane，j.a.等人，controloftoll-likereceptor7expressionisessentialtorestrictautoimmunityanddendriticcellproliferation.immunity，2007.27(5)：801-10页；savarese，e.等人，requirementoftoll-likereceptor7forpristane-inducedproductionofautoantibodiesanddevelopmentofmurinelupusnephritis.arthritisrheum，2008.58(4)：1107-15页。tlr7的转基因过表达仅在正常的抗疾病c57bl/6品系中导致自发性抗-rna自身反应性和肾炎，这突出了tlr7作为自身免疫的关键性决定因素的作用。deane，与前述相同。

从安全性角度来看，并没有报道tlr7、tlr8或tlr9单基因缺失型小鼠或者tlr7/8和tlr7/9双基因缺失型小鼠被免疫受损至观测到机会致病菌感染的程度。同样地，认为soc抗疟药物以预测至少部分抑制tlr7/9信号的剂量长期用于人类中，以控制狼疮疾病发作是非常安全和有效的。lafyatis，r.，m.york和a.marshak-rothstein，antimalarialagents：closingthegateontoll-likereceptors？arthritisrheum，2006.54(10)：3068-70页；costedoat-chalumeau，n.等人，lowbloodconcentrationofhydroxychloroquineisamarkerforandpredictorofdiseaseexacerbationsinpatientswithsystemiclupuserythematosus.arthritisrheum，2006.54(10)：3284-90页。事实上，除了儿童期及较小范围的成人期对革兰氏阳性细菌感染的敏感性增加外，然而具有高度受损的tlr和il-1r信号传导途径(myd88缺失或irak-4缺失)的人类仍然是健康的并且维持了足够的宿主防御机制。casanova，j.l.，l.abel和l.quintana-murci，humantlrsandil-1rsinhostdefense：naturalinsightsfromevolutionary，epidemiological，andclinicalgenetics.annurevimmunol，2010。

基于此信息和其它信息，我们认为，在小鼠临床前sle模型的情况中尤其充分证实tlr7是靶标。基因性人体研究和功能性人体研究两者支持以下假设：tlr7和/或tlr8途径的拮抗将对狼疮患者提供治疗益处。此外，小鼠tlr基因缺失研究和人类中抗疟药物的长期使用表明可以在未显著损害宿主防御的情况下进行药理学的tlr7、tlr8和/或tlr9抑制。

因此可以期望，抑制tlr7、tlr8或者tlr7和tlr8两者的化合物用作对sle或狼疮肾炎的治疗剂或预防剂。

我们已经发现抑制tlr7和/或tlr8的化合物，并且因此期望对sle或狼疮肾炎具有预防或治疗性效果。本文描述了本公开内容的化合物和方法。

ii.治疗用途

可以改变在本公开内容的药物组合物中的活性成分的剂量水平，以获得实现所期望的对特定患者的治疗反应、组成和施用模式的活性化合物的量。所选择的剂量水平取决于特定化合物的活性、施用路径、所治疗的病况的严重程度以及所治疗的患者的病况和既往病史。根据患者特有的因素，包括年龄、体重、综合健康状况以及其它可以影响本公开内容的化合物的功效的因素，使用标准方法对各个特定情况决定剂量。通常，在口服施用的情况下，本公开内容的化合物或其药物可接受的盐以每个成人每天约30μg至100μg的剂量、30μg至500μg的剂量、30μg至10g的剂量、100μg至5g的剂量或100μg至1g的剂量施用。在经由注射施用的情况下，其以每个成人每天约30μg至1g的剂量、100μg至500mg的剂量或100μg至300mg的剂量施用。在两种情况下，剂量以一次施用或分几次施用。剂量可以被模拟，例如使用程序。

但是并不意味着向哺乳动物(包括人类)施用本公开内容的化合物要限于特定的施用模式、剂量或给药频率。本公开内容涵盖所有的施用模式，包括口服施用、腹膜内施用、肌内施用、静脉内施用、关节内施用、病灶内施用、皮下施用、或任何其它足以提供适于预防或治疗sle或狼疮肾炎的剂量的途径。可以将本公开内容的一种或多种化合物以单剂量或多剂量施用于哺乳动物。当以多剂量施用时，所述剂量可以彼此间隔例如几个小时、一天、一周、一个月或一年。应当理解，对于任何特定的对象，应当根据个体需要以及实施或指导施用包含本公开内容的化合物的药物组合物的人员的专业判断，随时间调整特定的剂量方案。

对于临床应用，本公开内容的化合物通常可以静脉内、皮下、肌内、经结肠、经鼻、腹膜内、经直肠、经颊或口服施用。包含至少一种本公开内容的化合物(适用于人用药物或兽用药物)的组合物可以以允许通过适当的途径施用的形式存在。可以使用一种或多种药物可接受的佐剂或赋形剂，根据常规方法可以制备这些组合物。所述佐剂尤其包括稀释剂、无菌水性介质和各种无毒的有机溶剂。用于治疗用途的可接受的载体或稀释剂在制药领域是众所周知的，并且例如描述于remington：thescienceandpracticeofpharmacy(第20版)，a.r.gennaro编辑，lippincottwilliams和wilkins，2000，philadelphia，以及encyclopediaofpharmaceuticaltechnology，j.swarbrick和j.c.boylan编辑，1988，1999，marceldekker，newyork。所述组合物可以以片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、水溶液或混悬剂、可注射溶液、酏剂或糖浆的形式存在，并且所述组合物可以任选地包含选自甜味剂、调味剂、着色剂和稳定剂中的一种或多种试剂以获得药物可接受的制剂。

媒介物的选择以及媒介物中活性物质的含量通常根据产品的溶解性和化学性质、特定的施用模式和在药学实践中需遵守的规定来确定。例如，诸如乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙和磷酸二钙的赋形剂以及诸如淀粉、海藻酸和与润滑剂(例如，硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石粉)组合的某些复合硅酸盐的崩解剂，可以用于制备片剂。为了制备胶囊，使用乳糖和高分子量聚乙二醇是有利的。当使用水性悬浮液时，可以包含促进悬浮的乳化剂。还可以使用稀释剂，例如蔗糖、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甘油、氯仿或其混合物。

对于肠胃外施用，使用本公开内容的组合物在植物油(例如，芝麻油、花生油或橄榄油)中的乳液、悬液或溶液，药物可接受的盐的水性有机溶液(例如，水和丙二醇)、可注射的有机酯(例如，油酸乙酯)或无菌水溶液。本公开内容的组合物的盐的溶液尤其用于通过肌内注射或皮下注射而施用。可以将包括盐在纯蒸馏水中的溶液的水溶液用于静脉内施用，条件是：(i)适当地调节它们的ph，(ii)用足量的葡萄糖或氯化钠适当地缓冲并且使其等渗，以及(iii)通过加热、辐照或微滤对它们进行杀菌。包含本公开内容的化合物的适当的组合物可以溶于或悬浮于适当的载体中用于喷雾器或者悬浮液气雾剂或溶液气雾剂，或可以被吸收到或吸附于适当的固体载体上以用于干粉吸入器中。用于直肠施用的固体组合物包括根据已知方法配制的栓剂，并且包含至少一种本公开内容的化合物。

待用于治疗性施用的本公开内容的化合物的剂量制剂应当是无菌的。通过经无菌膜(例如，0.2微米膜)过滤或其它常规方法从而易于实现无菌化。制剂通常以冻干形式或作为水溶液储存。在一些实施方案中，本公开内容的组合物的ph例如可以为包括端值在内的3至11，可以为5至9，或可以为7至8。

虽然施用的一个途径为通过口服剂量施用，但可以使用其它施用方法。例如，组合物可以以各种剂型通过皮下、静脉内、肌内、经结肠、经直肠、经鼻或腹膜内施用，所述剂型例如栓剂、植入的丸剂或小圆柱剂、气雾剂、口服剂量制剂以及诸如软膏剂、滴剂和皮肤贴剂的局部制剂。本公开内容的实施方案的化合物可以并入诸如植入物的成型制品中，包括但不限于瓣膜、支架、管和假体，其可以使用惰性材料，例如合成聚合物或硅酮(例如，组合物、硅酮橡胶或其它可商购的聚合物)。此类聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基-丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基-天冬酰胺-苯酚或被棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸。此外，本公开内容的化合物可以与一类用于实现药物控释的生物可降解的聚合物结合，所述聚合物例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸与聚乙醇酸的共聚物、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯、水凝胶的交联共聚物或两亲性嵌段共聚物。

本公开内容的化合物还可以以脂质体递送系统的形式，例如小的单层囊泡、大的单层囊泡和多层囊泡，来进行施用。脂质体可以由各种脂质，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱来形成。还可以使用与化合物分子偶合的抗体、抗体片段、生长因子、激素或其它靶标部分(例如，参见remington：thescienceandpracticeofpharmacy，见上文)来递送本公开内容的化合物，包括与本公开内容的实施方案的化合物的血液组分体内结合。

iii.合成

提供了用于制备本公开内容的实施方案的一般合成路线和特定合成路线。本领域的技术人员可以认识到，对这些程序进行某些改变或调整也可以合成本公开内容化合物。在一些情况下，短语“例如/诸如”用于列举更多的一般性化合物或结构的各种可选方案。应当理解，“例如/诸如”不应理解为是限制性的，而且其含义与“包括，例如，但不限于”一致。

以下所提供的具体实例的某些条件是共有的。使用emrysliberator或initiator微波反应器进行微波加热。使用sp4快速色谱系统进行柱色谱法。使用büchii旋转蒸发器或离心蒸发器进行溶剂去除。使用氘代溶剂在varian分光光度计上在400mhz处记录nmr光谱。将相对于残余质子化溶剂的化学位移进行报告。

使用各种比例的一种或多种以下溶剂：etoac、庚烷、二氯甲烷或meoh，在预涂有0.25mm硅胶层的玻璃板上进行薄层色谱。

使用xbridge^tmc181.7μm2.1×50mm柱在watersacquity^tm系统上对许多实例进行lc/ms分析。溶剂a和溶剂b分别为水w/0.1％甲酸和乙腈w/0.1％甲酸。5分钟总的方法时间，5％b至99％b经4分钟，流速为0.3ml/min。以电喷雾正离子模式在waterssqd上从100-2000amu获得质谱数据。

可选地，使用xbridge^tmc83.5μm4.6×50mm柱在waters自动纯化系统上进行纯度和质量确认。溶剂a和溶剂b分别为水w/0.1％甲酸和乙腈w/0.1％甲酸。6分钟总的方法时间，10％b至95％b经5分钟，流速为2.5ml/min。以电喷雾正离子模式在micromasszq^tm上从130-1000amu获得质谱数据。

使用xbridge^tmc85μm，19×100mm柱在waters自动纯化系统上对许多实例进行制备型反相lc/ms。溶剂a和溶剂b分别为水w/0.1％甲酸和乙腈w/0.1％甲酸。12分钟总的方法时间，30％b至95％b经10分钟，流速为20ml/min。以电喷雾正离子模式在micromasszq^tm上从130-1000amu获得质谱数据。

使用以下手性柱中的一个：ia(5cm×50cm或2cm×25cm)、ad(2cm×25cm)或od(2cm×25cm)，对许多实例进行外消旋化合物的制备型hplc拆分。在由相同的固定相构成的0.45cm×25cm柱(ia、ad或od)上通过hplc分析来测定经纯化的化合物的对映体比例。

以下阐明了用于制备本公开内容的化合物的一般方法和实验。在某些情况下，通过实施例描述具体的化合物。然而，应当理解，在各个情况中，根据以下所描述的方案和实验来制备一系列本公开内容的化合物。对于可获得nmr和/或质谱数据的那些化合物，该数据示于图3中。

以下缩写用于本文中：

定义：以下缩写具有所指出的含义：

acoh：乙酸

anhyd：无水的

aq.：水性的

bn：苄基

boc：叔丁氧基羰基

csa：樟脑磺酸

d：天

damp：危险相关分子模式

dbu：1，8-重氮双环[5.4.0]十一碳-7-烯

dce：1，2-二氯乙烷

dcm：二氯甲烷

dipea：n，n-二异丙基乙胺

dma：n，n-二甲基乙酰胺

dmap：4-二甲基氨基吡啶

dmf：n，n-二甲基甲酰胺

dmso：二甲基亚砜

dsdna：双链dna

edc：1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

ee：对映体过量

etoac：乙酸乙酯

etoh：乙醇

h：小时

hatu：n，n，n’，n’-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐hcl：盐酸

hcq：羟氯喹

hep：正庚烷

hepes：4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸

hplc：高效液相色谱

ifn：干扰素

ipa：异丙基醇或异丙醇

k2co3：碳酸钾

meoh：甲醇

mgso4：硫酸镁(无水的)

min：分钟

mtbe：甲基叔丁基醚

na2co3：碳酸钠

na2so4：硫酸钠(无水的)

nabh4：硼氢化钠

nacl：氯化钠

nah：分散在油中的60％氢化钠

nahco3：碳酸氢钠

naoh：氢氧化钠

nbs：n-溴丁二酰亚胺

nh4cl：氯化铵

nh4cl：氯化铵

nh4oh：氢氧化铵

nmp：n-甲基吡咯烷酮

ns：对硝基苯磺酰基或邻硝基苯磺酰基

℃：摄氏度

pamp：病原体相关分子模式

pbmc：外周血单核细胞

pbs：磷酸盐缓冲盐水

pdc：浆细胞样树突状细胞

phntf2：n-苯基三氟甲烷磺酰亚胺

qpcr：定量聚合酶链反应

r848：瑞喹莫德(resiquimod)

rt：室温

sat：饱和的

snap：牌快速色谱柱

soc：护理标准

ssrna：单链rna

t3p：丙基磷酸酐

tbuok：叔丁醇钾

tea：三乙胺

tempo：1-氧基-2，2，6，6-四甲基哌啶

tf：三氟甲磺酸酯

tfa：三氟乙酸

thf：四氢呋喃

tlda：低密度阵列

tlr：toll样受体

tsa：对甲苯磺酸

一般合成方法：

根据以下方案中所示的一般合成方法制备本发明的化合物：

方案1

利用中间体3来制备至少一个实例，可以根据方案1中所描述的路线来制备中间体3。用盐酸羟胺处理商购的5-溴喹啉-8-甲醛1(frédériericdemontigny，gillesargouarch，claudelapinte，“newroutetounsymmetrical9，10-disubstitutedethynylanthracenederivatives，”synthesis，2006，293-298.)以提供肟2。随后在催化量的乙酸铜存在下将2转化为相应的腈3以提供本发明的关键中间体中的一种。使用以下详述的适当条件，通过用适当的芳香族化合物、杂芳香族化合物和饱和的杂环化合物，例如哌啶、哌嗪和吗啉，来取代5-溴喹啉-8-甲醛的5-位，使中间体3用于产生本发明的化合物。

在方案2中示出了产生关键中间体3的替代方法，其中用乙酸钠代替合成中第一步的三乙胺。

方案2

在方案3中显示了用于本发明的另一组实例化合物的方法。由适当取代的、商购的吡啶48起始，对游离胺进行保护以提供49，此后使吡啶氮活化以形成50。使用硼氢化物或其它还原剂对吡啶盐还原，提供不饱和的哌啶51，然后在钯催化剂存在下使用氢通过另外的还原条件得到二取代哌啶，为外消旋混合物或52和53。可以通过使用一当量的手性酸(例如(2r，3r)-2，3-二((4-甲氧基苯甲酰基)氧基)琥珀酸)形成非对映体盐的混合物，其中所需的非对映体盐从溶液中结晶出来，从而对所需的对映体进行拆分。对所得的晶体进行收集、重结晶和脱盐，使得获得高度对映体过量的所需对映体53。然后使用适当的偶联剂使53与5-溴喹啉3偶合以提供boc保护的54，其容易去保护成为实例55或er-888840。可以通过使胺55经受亚硝酸钠而容易产生醇类似物56。

方案3

如方案4和方案5所示，可以使用54或55作为关键中间体制备其它实例化合物。可以通过用强碱使酰胺质子进行去质子化，然后添加适当活化的烷化剂而使54烷基化。可以通过还原胺化方法使55烷基化以提供由一般结构57所描述的实例。还可以在适当取代的烷基、芳基、包含适当的离去基团(lg)的基团存在下，通过使用适当的碱使55烷基化，以提供具有如方案4所描述的一般结构57和58的单取代实例和二取代实例的混合物。

方案4

使用活化的酸或使用各种酰胺或肽偶联剂使55酰化以提供如方案5所描述的一般结构59的酰胺。在碱性条件下使59烷基化以提供在一般结构60中所描述的实例。同样地，可以使用本领域的技术人员所熟悉的条件使用活化的烷基磺酰基试剂或芳基磺酰基试剂获得55的磺酰胺，以形成由一般结构61所描述的实例。

方案5

实例的制备

化合物3-方案1

向5-溴喹啉-8-甲醛1(1.00g，4.24mmol)和盐酸羟胺(1.177g，16.94mmol)在乙腈(110ml)中的悬浮液添加tea(2.362ml，16.94mmol)，然后加热至回流3h以提供黄色悬浮液。在完全反应完成后冷却至室温，过滤沉淀物，用乙腈(50ml)冲洗滤饼。将粗固体经过用etoac(300ml)洗脱的短的硅胶垫(10g)纯化，以提供黄色固体的醛肟2。

将醛肟2(1.001g，4.0mmol)和一水合乙酸铜(ii)(84.6mg，0.424mmol)在无水乙腈(180ml)中搅拌回流12h。将完成的反应冷却至室温，过滤并且用h2o洗涤滤垫以提供褐色固体。将粗固体经过用dcm(100ml)洗脱的短的硅胶垫(约10g)纯化，洗脱产物在真空中浓缩和干燥后提供米白色固体的5-溴喹啉-8-甲腈3(0.783g，3.4mmol，收率为79.3％，经过两步)。参见：frédériericdemontigny，gillesargouarch，claudelapinte，synthesis，2006，293。

化合物3-方案2

在15℃下向三水合乙酸钠(31.6g，0.232mol)在etoh(0.498l)中的经搅拌的溶液添加5-溴喹啉-8-甲醛(49.84g，0.211mol)，然后添加盐酸羟胺(15.55g，0.223mol)。将所得的混合物加热至70℃持续3h，此后将反应冷却至35℃，然后用水(250ml)稀释。将混合物部分浓缩至约250ml，此后添加水(250ml)、2-甲氧基-2-甲基丙烷(120ml)和庚烷(120ml)，然后将混合物再浓缩至约250ml。用水(250ml)稀释所获得的浆料并且冷却至0℃，此后添加1mnaoh水溶液(211ml)，并且将最终的混合物剧烈搅拌10min。过滤悬浮液，用水(498ml)冲洗，并且将滤饼在30℃下干燥18h以提供棕褐色粉末的醛肟2(49.75g，0.198mol，93.9％收率)。

在15℃下向2(48.21g，0.192mol)在乙腈(386ml)中的经搅拌的悬浮液添加乙酸铜(ii)(0.523g，2.9mmol)，然后添加乙酸(13.1ml，0.229mol)。将获得的混合物加热至回流21h，此后将完成的反应冷却至50℃。添加水(0.39l)，并且将混合物部分浓缩，然后用水(290ml)稀释并冷却至5℃。添加1mnaoh水溶液(230ml)，并且持续剧烈搅拌10min。过滤悬浮液，用水(500ml)冲洗滤饼并且干燥以提供灰黑色粉末的化合物3(42.80g，0.183mol，95.6％收率)。

使用方案3合成er-888840

化合物50：在17℃下向商购的5-甲基吡啶-3-胺48(17.52g，162.01mmol)在etoac(52.6ml)中的经搅拌的溶液添加dmap(0.990g，8.10mmol)，并且将混合物升温至30℃，此后将二碳酸二叔丁酯(39.5ml，170.11mmol)在etoac(35.0ml)中的溶液在1h内缓慢添加至初始反应混合物，同时控制co2释放和温度＜40℃。将获得的混合物在35-40℃下再搅拌1h，然后加热回流18h。将最终的混合物冷却至室温，用甲苯(175ml)稀释，然后添加硅胶(17.52g)。将获得的浆料在20-23℃下搅拌30h，然后过滤并且用etoac(88ml)和甲苯(88ml)的混合物冲洗滤饼。部分浓缩滤液至干燥以提供橙色/褐色固体的粗品(5-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯49。

在20℃下向粗品49在乙腈(175ml)中的经搅拌的溶液添加溴化苄(19.85ml，167mmol)，然后加热至回流2h。将完成的反应冷却至室温，用甲苯(315ml)稀释，冷却至0℃并搅拌1h。过滤粗混合物，用甲苯(175ml)冲洗，并且将获得的固体在45℃下在真空中干燥17h以提供类白色粉末的1-苄基-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-甲基吡啶-1溴化物50(35.59g，93.8mmol)。将滤液浓缩并悬浮于etoac(150ml)和乙醇(15ml)的混合物中，过滤所获得的固体，用etoac(50ml)冲洗并在真空中干燥以提供额外的50(5.20g，13.7mmol，或2步的总收率为66.4％)。

化合物52和化合物53：在-3℃下向50(9.85g，26.0mmol)在乙醇(89ml)中的经搅拌的溶液添加nabh4(3.013g，79.6mmol)在0.10mnaoh(20ml，2.0mmol)中的冷却溶液(0℃)，维持温度＜3℃，此后将反应在0-3℃下搅拌3h。用mtbe(0.10l)和水(0.05l)稀释完成的反应，维持温度＜10℃，然后添加20wt％柠檬酸(50g)，同时控制h2释放和温度＜10℃。将获得的混合物在5-10℃下剧烈搅拌10min，然后部分浓缩至约50ml。在剧烈搅拌下添加mtbe(100ml)，并且将混合物再浓缩至约50ml。用mtbe(0.10l×2)萃取获得的混合物，并且用水(20ml)、9wt％nahco3(3g)洗涤合并的有机层，浓缩，并与乙醇(每次50ml)共沸两次。用mtbe(50ml)稀释获得的混合物并且过滤。将滤液浓缩并用乙醇稀释以调整粗品51的50.0g总重，将所述51不需进一步浓缩或纯化用于下一步。

用h2气体经过氢化形成52和53：用乙醇(10ml)稀释5.0g等分的51(上述总的10％)，并且在1.04barh2气体下用10wt％pd-c(0.272g)使其经受氢化。24h之后，通过celite(2g)垫过滤反应混合物。用乙醇(10ml)冲洗反应器和滤饼，并且将滤液浓缩干燥以产生白色固体的((3s，5r)-5-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯52和((3r，5s)-5-甲基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯53(0.472g，2.21mmol，85％收率，52∶53的比例为1∶5-6，通过1h-nmr)。

经过转移氢化形成52和53：将10g等分的51(上述总的20％)浓缩并与水(10ml)混合，然后添加甲酸铵(3.28g，52mmol)和乙醇(20ml)。在n2气氛下添加5wt％pd-c(0.548g)，此后将获得的混合物在25-30℃搅拌20h。将完成的反应通过celite545(4g)垫过滤，用乙醇(20ml)冲洗滤饼并且将滤液浓缩至干燥。添加1.0mnaoh(6ml)并且用dcm(每次40ml)对混合物萃取两次。用25wt％nacl(6ml)洗涤合并的有机层，经na2so4(4g)干燥，过滤并且浓缩以产生黄白色固体的52和53(0.844g，3.94mmol，75％收率，顺式/反式3∶1)。

还可以根据所报道的方法(wo2010/009014，通过引用并入本文)制备化合物52。

53的拆分：将52和53的外消旋混合物(84g，0.392mol)悬浮于丙酮/ipa95∶5(1596ml和84ml)中。在环境温度下添加(2r，3r)-2，3-二((4-甲氧基苯甲酰)氧基)琥珀酸(l-data；164g，0.392mol)，并且将所获得的混合物搅拌过夜(20h)。通过过滤收集白色沉淀物，用预冷却的丙酮(1600ml)冲洗，并在真空中干燥。使回收的非对映体盐(dr＝94.9∶5.1)经受在丙酮(1000ml)中再浆化。过滤然后干燥，产生65g53¹/2l-data盐(dr＝98.5∶1.5，0.15mol，39％收率)。手性hplc条件：lux3ucellulose-4柱(00g-4490-e0)，流动相使用90％a(mecn+0.1％dea)和10％b(meoh+0.1％dea)的恒溶剂混合物。

在环境温度下，向53¹/2l-data盐(156g，0.368mol)在dcm(1248ml)中的经搅拌的悬浮液缓慢添加1.0mnaoh(624ml，0.624mol)。1h之后，层被分配。用dcm(1200ml)萃取水层。用水(1500ml)洗涤合并的有机层，并且浓缩以产生白色固体的53(75g，0.350mol，95％收率)。

化合物55(er-888840)：向53(2.52g，11.74mmol)和3(2.28g，9.78mmol)在dma(6.84ml)中的经搅拌的悬浮液添加dipea(3.42ml)，然后加热并回流3h。将完成的反应冷却至室温，在etoac/正庚烷2∶1(180ml)和5wt％nacl(60ml)之间分配，并且通过celite545(5g)垫过滤。用5wt％nacl(60ml)洗涤有机层，用florisil(7.7g)处理，过滤，用etoac(30ml)冲洗并浓缩。经过硅胶(40g，用dcm/meoh19∶1、9∶1和4∶1进行逐步洗脱)纯化由此所获得的粗产物，以提供橙色固体的((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯54，其直接用于下一反应。

向54在dcm(20ml)中的经搅拌的溶液缓慢添加tfa(20ml)，并再搅拌30min。将完成的反应浓缩，在dcm(500ml)和饱和的nahco3(220g)之间分配。用饱和的nahco3(220g)洗涤有机层，并且浓缩以产生橙色的固体/油状的粗产物，所述粗产物经过硅胶(40g，用etoac100％、然后逐步用dcm/meoh4∶1和7∶3进行洗脱)纯化，以产生橙色泡沫状的55(er-888840，1.401g，5.26mmol，收率为53％，基于47)。

er-888840-hcl：将55(33.3mg，0.125mmol)悬浮于ipa(9.63ml)并且加热至45℃，然后添加0.1mhcl(1.13ml，0.12mmol)，同时维持温度为40-45℃。将所获得的混合物冷却至室温，并且持续搅拌2h。通过过滤收集黄色沉淀物，用ipa(2.0ml)冲洗，在n2/真空中干燥2h，并且在45℃的真空烘箱中进一步干燥20h以产生黄色固体的er-888840-hcl(14.5mg，0.048mmol，38％收率)。

以与er-888840相似的方法制备er-878921(5.2mg，0.021mmol，32.8％收率)，其中以化合物3(15mg，0.064mmol)和(r)-哌啶-3-胺二盐酸盐(13.4mg，0.077mmol)起始。将反应在180℃下微波3h，并且通过对该系列实例所描述的方法进行纯化。

er-896464或化合物56的制备，方案14：向er-888840(175mg，0.657mmol)在乙酸(1ml，17.468mmol)中的经搅拌的悬浮液在3min内逐滴添加含亚硝酸钠(91mg，1.314mmol)的150μl水。将混合物在室温搅拌40min，在这段时间中通过tlc证明残留有er-888840。加入另外的1当量的含亚硝酸钠的100μl水，并且在室温下对混合物再搅拌1h。浓缩完成的反应，并且将残余物溶于dcm(10ml)，用饱和nahco3(5ml)洗涤，经mgso4干燥，过滤并且浓缩至干燥。将残余物溶于乙醇(1ml)，并且用10％氢氧化钠水溶液(100μl)处理。在室温搅拌90min之后，用二氯甲烷稀释混合物，并用水洗涤，经mgso4干燥，过滤并且浓缩至干燥。将残余物经硅胶(biotage，用0至70％etoac/庚烷进行洗脱)纯化，以提供2种洗脱的化合物，所述化合物暂时鉴定为o-乙酸酯的顺式异构体和反式异构体。将用70％etoac/庚烷洗脱的主峰鉴定为羟基差向异构体，为顺式异构体与反式异构体的4∶1-5∶1混合物。顺式56或er-896464(95mg，0.355mmol，54.1％收率)作为主要的非对映异构体。

er-897184.hcl的制备：向54(100mg，.273mmol)在dmf(1.00ml，12.915mmol)中的经搅拌的溶液添加氢化钠(60％油分散体，12.01mg，.30mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟，此后添加甲基碘(0.020ml，.327mmol)。将最终的反应混合物在室温下搅拌2h，此后将完成的反应用氯化铵水溶液(5ml)缓慢淬灭。用1∶1etoac/庚烷(每次3ml)对混合物萃取三次，并且用水(3ml)、盐水(3ml)洗涤合并的有机萃取物，经mgso4干燥，过滤并且浓缩。将粗产物经过用40％etoac/庚烷洗脱的硅胶纯化，以提供((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(96mg，0.252mmol，92％收率)。

向((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(96mg，0.252mmol)在dcm(1.0ml)中的经搅拌的溶液添加tfa(1.00ml，12.98mmol)。将混合物在室温搅拌1h，此后将完成的反应浓缩至干燥，将残余物溶于meoh(10ml)，并且添加mp-碳酸酯碱性树脂(～250mg)。将混合物在室温搅拌30min，此后过滤悬浮液，将滤液浓缩并在真空中干燥。用含4.0mhcl的二噁烷(0.037ml)在室温下对胺处理30min，此后使混合物与甲苯(每次2ml)共沸两次至干燥，并且在真空中干燥以提供橙色固体的er-897184-hcl(79.8mg，0.252mmol，100.0％收率)。

以与er-897184相似的方法制备er-897275(49mg，0.151mmol，55.3％收率)，其中以54-2hcl(100mg，0.273mmol)和1-溴-2-甲氧基乙烷(37.9mg，.273mmol)起始。将仲胺分离，而不形成hcl盐。

通过化合物55的还原胺化制备er-899369.hcl，方案4：

向(3-甲酰基氧杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(47mg，.234mmol)和55(81mg，.304mmol)在dce(5ml)中的经搅拌的溶液添加三乙酰氧基硼氢化钠(99mg，.467mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h，此后将完成的反应用1nnaoh(5ml)淬灭。在搅拌10min之后，用水(5ml)和etoac(10ml)稀释混合物。用etoac(每次5ml)对水层萃取两次，并且用水(5ml)和盐水(5ml)洗涤合并的有机层，经mgso4干燥，过滤并且浓缩。将粗产物经过硅胶(20g，用10％-100％etoac/dcm洗脱)纯化以提供boc保护的中间体，其进行去保护并如对er-897184-hcl所述被转化为er-899369.hcl(60.1mg，0.155mmol，66.4％收率)。

以与er-899369相似的方法制备er-899075(48.8mg，0.135mmol，91％收率)，其中以55-2hcl(50.3mg，0.148mmol)和3-甲基氧杂环丁烷-3-甲醛(22.5mg，.225mmol)起始。该实例不需要去保护。不形成hcl盐。

以与er-99075相似的方法制备er-899506(107mg，0.305mmol，92％收率)，其中以55-2hcl(50.3mg，0.148mmol)和四氢-4h-吡喃-4-酮(0.092ml，.999mmol)起始。

以与er-99075相似的方法制备er-899541(11mg，0.034mmol，17.8％收率)，其中以55-2hcl(65mg，0.192mmol)和氧杂环丁烷-3-酮(0.025ml，0.384mmol)与dipea(0.05ml，0.288mmol)一起起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899543(11mg，0.034mmol，17.8％收率)，其中以55-2hcl(57mg，0.168mmol)和5-(三氟甲基)吡啶甲醛(58.8mg，0.336mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899544(37mg，0.110mmol，65.5％收率)，其中以55-2hcl(57mg，0.168mmol)和二氢呋喃-3(2h)-酮(28.9mg，0.336mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899551(23mg，0.066mmol，32.6％收率)，其中以55-2hcl(69mg，0.203mmol)和噁唑-2-甲醛(39.4mg，0.406mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899552(24mg，0.067mmol，32.6％收率)，其中以55-2hcl(69mg，0.203mmol)和1-甲基-1h-咪唑-4-甲醛(44.7mg，0.406mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899563(8.8mg，0.021mmol，12.3％收率)，其中以55-2hcl(57mg，0.168mmol)和6-(三氟甲基)烟醛(58.8mg，0.336mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899564(17mg，0.049mmol，12.3％收率)，其中以55-2hcl(58mg，0.171mmol)和1h-吡唑-5-甲醛(33mg，0.342mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899565(27mg，0.072mmol，38.1％收率)，其中以55-2hcl(64mg，0.189mmol)和1，4-二甲基-1h-吡唑-3-甲醛(46.9mg，0.378mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899566(25mg，0.067mmol，36.0％收率)，其中以55-2hcl(63mg，0.186mmol)和3，5-二甲基异噁唑-4-甲醛(46.5mg，0.372mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899577(18mg，0.052mmol，31.8％收率)，其中以55-2hcl(55mg，0.162mmol)和吡咯烷-2，4-二酮(32.1mg，.324mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899602(11mg，0.028mmol，4.8％收率)，其中以55-2hcl(201mg，0.592mmol)和3-(甲硫基)丙醛(123mg，1.185mmol)起始，然后将中间体硫醇溶于dcm(3ml)，冷却至0℃并添加3-氯过氧苯甲酸(255mg，1.48mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌5min，升温至室温，并再搅拌3h。在将反应冷却至0℃后，添加3-氯过氧苯甲酸(100mg，0.580mmol)，然后在室温搅拌1h。将完成的反应用dcm(10ml)稀释，并用饱和nahco3(5ml)和盐水(5ml)洗涤。用dcm(每次5ml)对合并的水层萃取两次，此后将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并浓缩至干燥。将粗残余物经过硅胶(biotageultra，10g，用含梯度0至20％meoh的dcm洗脱)纯化，然后浓缩所需部分，并且经过反相hplc柱((x-bridgec1819×100mm柱；用包含0.1％nh4oh的渐增梯度的乙腈水溶液洗脱)再纯化。将所需部分在真空中浓缩并干燥以提供er-899602。

以与er-99541相似的方法制备er-899604(18mg，0.050mmol，25.0％收率)，其中以55-2hcl(68mg，0.200mmol)和2-氧代环戊烷甲腈(43.7mg，.401mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899607(15mg，0.040mmol，22.1％收率)，其中以55-2hcl(62mg，0.183mmol)和1-(吡啶-2-基)乙酮(0.041ml，.365mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899621(25mg，0.071mmol，42.5％收率)，其中以55-2hcl(57mg，0.168mmol)和二氢-2h-吡喃-3(4h)-酮(33.6mg，.336mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899633(41.2mg，0.103mmol，52.3％收率)，其中以55-2hcl(67mg，0.197mmol)和二氢-2h-噻喃-4(3h)-酮1，1-二氧化物(58.5mg，.395mmol)起始。

以与er-99541相似的方法制备er-899634(20mg，0.052mmol，30.9％收率)，其中以55-2hcl(57mg，0.168mmol)和1-(6-甲基吡啶-2-基)乙酮(45.4mg，.336mmol)起始。

以与er-899541相似的方法制备er-899630(12mg，0.033mmol，8.7％收率)和er-899631(19mg，0.052mmol，13.7％收率)，其中以55-2hcl(129mg，0.380mmol)和4-羟基环己酮(87mg，.76mmol)起始，其中两种非对映体通过硅胶色谱法分离。注释：两种化合物的立体化学可任意指定，并且尚未确定。

通过在室温下于1h内添加分成四份的dmp(373mg，.879mmol)，其中每份在dcm(3ml)中，从而由er-899630和er-899631的非对映体混合物(64mg，0.176mmol)的氧化来制备er-899632(12mg，0.033mmol，18.9％收率)。将完成的反应用dcm(10ml)稀释，并用饱和的nahco3(5ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。用dcm(每次5ml)对合并的水层萃取两次，此后将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并浓缩至干燥。将粗残余物经过硅胶(biotageultra，10g，用含0至20％meoh的dcm洗脱)纯化，然后所需部分浓缩，并且经过反相hplc柱((x-bridgec1819×100mm柱；用包含0.1％nh4oh的渐增梯度的乙腈水溶液洗脱)再纯化。所需部分在真空中浓缩并干燥以提供er-899632。

er-899508：向55(85mg，.251mmol)和碳酸钾(34.6mg，.251mmol)在dmf(1ml，12.92mmol)中的经搅拌的悬浮液添加3，3，3-三氟丙基甲磺酸酯(0.052ml，.376mmol)。将反应在室温下搅拌24h，此后用etoac-庚烷(～4∶1)(10ml)和水(5ml)稀释反应。用etoac-庚烷(～4∶1)(每次5ml)对水层萃取两次，并且将合并的有机层用盐水(5ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗品经过硅胶(12g柱，用含25100％etoac的庚烷洗脱)纯化，在所需部分合并、在真空中浓缩和干燥之后提供作为副产物的er-899508(3.7mg，0.013mmol，5.0％收率)。

er-899823：在-78℃下向草酰氯(0.108ml，1.234mmol)在dcm(2ml)中的经搅拌的溶液逐滴添加dmso(0.175ml，2.469mmol)。在完成添加后，将混合物在-78℃下搅拌30分钟，此后逐滴添加er-896464(220mg，.823mmol)在dcm(2ml)中的溶液，然后升温至室温并再搅拌1h。逐滴添加dipea(0.719ml，4.115mmol)，搅拌1h，然后用氯化铵水溶液(2ml)淬灭。用etoac(每次5ml)对混合物萃取三次。将合并的有机层用盐水(5ml)洗涤，经mgso4干燥，过滤并浓缩以提供粗品(s)-5-(3-甲基-5-氧代哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈，其不需经进一步纯化而用于下一步。

向(s)-5-(3-甲基-5-氧代哌啶-1-基)喹啉-8-甲腈(50mg，.188mmol)和2-氨基丙-1-醇(28.3mg，.377mmol)在dce(2ml，25.384mmol)中的经搅拌的溶液添加乙酸(10.79μl，.188mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(160mg，.754mmol)，然后在50℃加热24h。将完成的反应冷却至室温，用1nnaoh(2ml)和水(5ml)淬灭。用etoac(每次5ml)对混合物萃取三次，并且将合并的有机层用盐水(5ml)洗涤，经mgso4干燥，过滤并且浓缩。将粗产物经过硅胶(10g，用含0至10％meoh的dcm洗脱)，在所需部分合并、在真空中浓缩和干燥之后，提供er-899823(29mg，0.089mmol，47.4％收率)。

er-899504和er-899505：向er-888840(688mg，2.028mmol)和碳酸钾(423mg，3.061mmol)在dmf(3.00ml)中的经搅拌的悬浮液添加溴乙酸乙酯(368μl，3.305mmol)。将反应混合物在室温搅拌14h，此后用饱和的nahco3(5ml)和etoac(10ml)稀释完成的反应，并且使层分离。用etoac(每次5ml)对水层萃取两次，并且将合并的有机层用盐水(5ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并且浓缩。将粗产物经过硅胶(10g，用含0至100％etoac的庚烷洗脱)纯化，在将合并的各个所需部分分离、在真空下浓缩和干燥之后，提供两种黄色油状的产物er-899505(382mg，0.871mmol，43.0％收率)和er-899504(207mg，0.587mmol，29.0％收率)。

er-899715：向er-899541(40mg，.124mmol)在37％甲醛水溶液(1ml，.124mmol)中的经搅拌的溶液添加甲酸(70μl，1.825mmol)，然后在100℃加热2h。将完成的反应用nahco3水溶液(5ml)稀释，并且用etoac(每次3ml)萃取三次。将合并的有机层用盐水(5ml)洗涤，经mgso4干燥，过滤并浓缩。将残余物溶于etoac(0.5ml)，然后溶入乙酸(0.008ml，0.124mmol)并在室温搅拌30min，此后在真空中浓缩干燥以提供er-899715-hoac(32mg，0.081mmol，65.1％收率)，而不需进一步纯化。

er-896310：向er-888840(100mg，.375mmol)在dcm(1.0ml，15.542mmol)中的经搅拌的溶液添加吡啶(0.091ml，1.126mmol)，然后添加乙酸酐(0.043ml，.451mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h，此后将完成的反应用dcm(5ml)稀释，并用nahco3水溶液(2ml)洗涤。将有机层经mgso4干燥，过滤并且浓缩。将粗产物经过硅胶(biotage)纯化，在将合并的各个所需部分分离、在真空下浓缩和干燥之后，提供er-896310(97mg，0.315mmol，84％收率)。

以与er-896310相似的方法制备er-898758(17mg，0.047mmol，15.9％收率)，其中以er-888840-2hcl(100mg，0.295mmol)和三氟乙酸酐(0.052ml，0.368mmol)起始。

er-898912：向er-888840(50mg，0.188mmol)和吡啶(0.046ml，.563mmol)在dcm(2ml)中的混合物添加5-甲基异噁唑-3-碳酰氯(27.3mg，.188mmol)。将混合物在室温搅拌18h，然后添加dmap(23mg，0.188mmol)并使反应混合物在室温搅拌6h。添加hatu(85.8mg，0.226mmol)，并且将反应在室温搅拌18h。将完成的反应用dcm(10ml)稀释，并且然后用0.5m柠檬酸(3ml)、水(3ml)及饱和的nahco3(3ml)洗涤。将有机层经mgso4干燥，过滤并浓缩，然后经硅胶(10g，用含0-10％meoh的dcm洗脱)纯化。将所需部分合并，在真空中浓缩并干燥以提供er-898912(51mg，0.136mmol，72.4％收率)。

er-897272：向er-888840(50mg，.188mmol)、2-(二甲基氨基)乙酸盐酸盐(31.4mg，.225mmol)和hbtu(85mg，.225mmol)在dcm(2ml)中的经搅拌的溶液添加tea(78μl，.563mmol)。将反应混合物在室温搅拌18h，此后将完成的反应用etoac(5ml)稀释，用nh4cl水溶液(2ml)、水(2ml)和盐水(2ml)洗涤。将有机层经mgso4干燥，过滤，浓缩，并经硅胶色谱(biotage，10g，用含0-30％etoac的庚烷洗脱)纯化，在对所需部分进行真空浓缩和干燥后提供er-897272(40mg，0.114mmol，60.5％收率)。

以与er-897272相似的方法制备er-897273(43mg，0.127mmol，67.6％收率)，其中以er-888840(50mg，0.188mmol)和2-甲氧基乙酸(20.29mg，.225mmol)起始。

以与er-897272相似的方法制备er-897274(53mg，0.163mmol，87.2％收率)，其中以er-888840(50mg，0.188mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸(39.5mg，.225mmol)起始，然后使用tfa和前述实例中所描述的中和方法对boc基团进行去保护。

以与er-897272相似的方法制备er-897607.hcl(47mg，0.121mmol，64.9％收率)，其中以er-888840(50mg，0.188mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(45.8mg，.225mmol)以及添加有edc(54.0mg，.282mmol)起始，然后按照前述实例中所描述的方法使用含hcl的二噁烷对boc基团进行去保护。

以与er-897607相似的方法制备er-897608.hcl(40mg，0.107mmol，71.2％收率)，其中以er-888840(40mg，0.150mmol)和2-((叔丁氧基羰基)-(甲基)氨基)乙酸(34.1mg，.18mmol)起始。

er-897971：向er-888840-hcl(35.0mg，0.103mmol)在nmp(500.0μl)中的经搅拌的溶液添加2-羟基乙酸(11.0mg，0.145mmol)、hbtu(43.0mg，0.113mmol)和dipea(45.0μl，0.258mmol)。将反应混合物在50℃搅拌过夜，然后经过反相hplc柱((x-bridgec1819×100mm柱；用包含0.1％nh4oh的渐增梯度的乙腈水溶液洗脱)直接纯化。将包含产物的部分合并，并在真空中浓缩以提供er-897971(16.9mg，0.052mmol，50.5％收率)。

以与er-897971相似的方法制备er-897972(15.2mg，0.014mmol，13.8％收率)，其中以er-888840-hcl(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-羟基-3-甲基丁酸(18.0mg，0.152mmol)起始。

以与er-897971相似的方法制备er-897973(5.2mg，0.039mmol，38.1％收率)，其中以er-888840-hcl(35.0mg，0.103mmol)和3-羟基苯甲酸(21.0mg，0.152mmol)起始。

以与er-897971相似的方法制备er-897975(4.7mg，0.012mmol，11.8％收率)，其中以er-888840-hcl(35.0mg，0.103mmol)和4-羟基苯甲酸(21.0mg，0.152mmol)起始。

以与er-897971相似的方法制备er-897976(15.9mg，0.045mmol，43.5％收率)，其中以er-888840-hcl(35.0mg，0.103mmol)和2-(甲硫基)乙酸(16.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897971相似的方法制备er-897977(16.7mg，0.045mmol，43.9％收率)，其中以er-888840-hcl(35.0mg，0.103mmol)和2-(乙硫基)乙酸(18.0mg，0.150mmol)起始。

以与er-897971相似的方法制备er-897978(12.6mg，0.033mmol，31.6％收率)，其中以er-888840-hcl(35.0mg，0.103mmol)和2-(甲基磺酰基)乙酸(21.0mg，0.152mmol)起始。

以与er-897971相似的方法制备er-897979(9.2mg，0.027mmol，26.2％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(29.4mg，0.155mmol)起始，然后使用tfa和前述实例中所描述的中和方法对boc基团进行去保护。

以与er-897979相似的方法制备er-897980(12.6mg，0.033mmol，32.0％收率)，其中以54b(35.0mg，0.103mmol)和(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(28.4mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897981(12.8mg，0.037mmol，35.9％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和1-((叔丁氧基羰基)氨基)-环丙烷甲酸(30.7mg，0.153mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897982(1.9mg，0.005mmol，4.9％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-羟基丙酸(30.9mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897983(5.6mg，0.015mmol，14.6％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(r)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸(33.2mg，0.154mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897984(0.3mg，0.001mmol，1.0％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和2-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸(33.0mg，0.153mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897985(8.7mg，0.024mmol，23.3％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-甲酸(32.3mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897986(12.5mg，0.034mmol，33.0％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸(34.0mg，0.156mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897987(2.8mg，0.008mmol，7.8％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸(33.5mg，0.154mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897988(9.9mg，0.027mmol，26.2％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和5-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸(33.1mg，0.152mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897989(9.0mg，0.025mmol，24.3％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸(32.7mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897990(3.5mg，0.010mmol，9.2％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基丙酸(33.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897991(7.1mg，0.019mmol，18.4％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(2r，3s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-羟基丁酸(33.9mg，0.155mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897992(12.2mg，0.032mmol，31.1％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-甲酸(34.8mg，0.152mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897993(9.7mg，0.026mmol，25.2％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-甲酸(34.4mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897994(9.8mg，0.026mmol，25.2％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)乙酸(34.4mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897995(10.8mg，0.030mmol，27.2％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-2-甲酸(34.5mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897996(11.2mg，0.028mmol，29.1％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(2s，4r)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酸(35.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897997(4.9mg，0.013mmol，12.6％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(2s，3s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基戊酸(35.6mg，0.154mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897998(9.3mg，0.025mmol，24.3％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸(35.7mg，0.154mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-897999(7.7mg，0.020mmol，29.5％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸(34.8mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898000(9.5mg，0.025mmol，24.3％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3，3-二甲基丁酸(34.9mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898001(3.3mg，0.009mmol，8.7％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3，3-二甲基丁酸(34.9mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898334(4.5mg，0.012mmol，11.7％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酸(35.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898335(5.1mg，0.013mmol，12.6％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-4-氨基-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-氧代丁酸(35.3mg，0.152mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898336(2.6mg，0.007mmol，6.6％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-4-氨基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-氧代丁酸(35.3mg，0.152mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898337(2.8mg，0.007mmol，7.1％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(r)-4-氨基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-氧代丁酸(35.4mg，0.152mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898338(4.5mg，0.012mmol，11.7％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-3-(叔丁氧基羰基)噻唑烷-4-甲酸(35.8mg，0.153mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898339(2.7mg，0.007mmol，6.8％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯甲酸(36.1mg，0.152mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898341(7.5mg，0.019mmol，18.4％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙酸(36.0mg，0.148mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898342(8.8mg，0.022mmol，21.3％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和1-(叔丁氧基羰基)-4-甲基哌啶-4-甲酸(36.0mg，0.148mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898343(2.2mg，0.006mmol，5.4％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和1-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-羟基环戊烷甲酸(37.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898344(9.4mg，0.024mmol，23.3％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-甲基戊酸(37.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898345(8.0mg，0.020mmol，19.4％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4，4-二甲基戊酸(37.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898346(6.5mg，0.017mmol，16.5％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)-(甲基)氨基)己酸(37.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898347(0.9mg，0.002mmol，2.2％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-5-氨基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代戊酸(37.0mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898348(6.3mg，0.016mmol，15.5％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(乙硫基)丙酸(37.0mg，0.148mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898349(6.0mg，0.015mmol，14.6％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(甲硫基)丁酸(37.0mg，0.148mmol)起始。

以与er-897979相以的方法制备er-898350(5.6mg，0.014mmol，13.6％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-苯乙酸(38.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898351(8.6mg，0.022mmol，21.3％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-苯乙酸(38.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898352(5.1mg，0.013mmol，12.6％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(1h-咪唑-4-基)丙酸(38.0mg，0.149mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898353(6.8mg，0.017mmol，16.5％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和3-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)丙酸(39.0mg，0.152mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898354(4.9mg，0.012mmol，11.7％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和3-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-基)丙酸(39.0mg，0.152mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898355(3.2mg，0.008mmol，7.7％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和1-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-羟基环己烷甲酸(39.0mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898356(3.3mg，0.008mmol，7.8％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-苯丙酸(40.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898357(9.1mg，0.022mmol，21.3％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(甲基亚硫酰基)丁酸(40.1mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898358(12.6mg，0.030mmol，29.1％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(吡啶-2-基)丙酸(40.0mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898359(16.3mg，0.039mmol，37.9％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(吡啶-4-基)丙酸(40.0mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898360(17.1mg，0.041mmol，39.8％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(吡啶-3-基)丙酸(40.0mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898361(19.6mg，0.047mmol，45.6％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(吡啶-3-基)丙酸(40.0mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898362(9.1mg，0.022mmol，21.4％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和5-(叔丁氧基羰基)-4，5，6，7-四氢-1h-吡唑并[4，3-c]吡啶-3-甲酸(40.0mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898364(9.1mg，0.022mmol，21.4％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和2-(1-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-环己基)乙酸(41.7mg，0.154mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898365(11.7mg，0.028mmol，27.2％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(噻唑-4-基)丙酸(41.0mg，0.151mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898366(13.7mg，0.032mmol，31.1％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-3-苯丙酸(42.0mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898367(14.5mg，0.034mmol，33.0％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(r)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-3-苯丙酸(43.0mg，0.154mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898368(6.8mg，0.016mmol，15.5％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-羟基苯基)丙酸(42.2mg，0.150mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898369(9.5mg，0.022mmol，21.4％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(甲基磺酰基)丁酸(43.0mg，0.153mmol)起始。

以与er-897979相似的方法制备er-898758(9.5mg，0.022mmol，21.4％收率)，其中以er-888840(35.0mg，0.103mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(甲基磺酰基)丁酸(43.0mg，0.153mmol)起始。

er-898761：

向er-888840-2hcl(50mg，.147mmol)和dcm(1.0ml，15.542mmol)以及tea(0.041ml，.295mmol)的搅拌溶液添加3，3，3-三氟丙酸(56.6mg，.442mmol)和hobt(29.9mg，.221mmol)，然后冷却至0℃。添加edc(85mg，.442mmol)并且将获得的反应混合物在40℃搅拌3h。将完成的反应用dcm(2ml)稀释，并用饱和的nh4cl水溶液(1ml)、饱和的nahco3水溶液(1ml)和盐水(1ml)洗涤。有机层经无水na2so4干燥，过滤并浓缩，然后经硅胶(biotagesp4.columninterchim25g)纯化，在对所需部分进行真空浓缩和干燥之后提供er-898761(36mg，0.096mmol，64.9％收率)的白色固体。

以er-888840-2hcl(60mg，0.177mmol)和2-氨基-3，3，3-三氟丙酸(25.3mg，.177mmol)起始，通过使用与er-898761相似的制备方法分离er-898991(3.6mg，0.009mmol，5.1％收率)和er-898992(1.6mg，0.004mmol，2.3％收率)。两种非对映体的立体化学可任意指定，并且尚未确定。

以与er-898761相似的方法制备er-899072(51.4mg，0.137mmol，89％收率)，其中以er-888840-2hcl(52.3mg，0.154mmol)和3-甲基氧杂环丁烷-3-甲酸(50.2mg，0.432mmol)起始。

以与er-898761相似的方法制备er-898763(19mg，0.050mmol，34.0％收率)，其中以er-888840-2hcl(50mg，0.147mmol)和(s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸(102mg，.442mmol)开始，然后使用tfa和前述实例中描述的中和方法对boc基团进行去保护。

以与er-898763相似的方法制备er-898765(19mg，0.054mmol，36.7％收率)，其中以er-888840-2hcl(50mg，0.147mmol)和(s)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(90mg，.442mmol)起始。

以与er-898763相似的方法制备er-898901(42mg，0.120mmol，81.6％收率)，其中以er-888840-2hcl(50mg，0.147mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丙酸(90mg，.442mmol)起始。

以与er-898763相似的方法制备er-898902(13mg，0.034mmol，23.1％收率)，其中以er-888840-2hcl(50mg，0.147mmol)和(r)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸(102mg，.442mmol)起始。

以与er-898763相似的方法制备er-898976(19mg，0.054mmol，36.7％收率)，其中以er-888840-2hcl(50mg，0.147mmol)和(r)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(90mg，.442mmol)起始。

以与er-898763相似的方法制备er-898977(50mg，0.132mmol，89.8％收率)，其中以er-888840-2hcl(50mg，0.147mmol)和(s)-2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酸(102mg，.442mmol)起始。

er-899127：在室温下向(r)-4-(叔丁氧基羰基)吗啉-3-甲酸(87mg，.375mmol)在thf(2.0ml)中的经搅拌的溶液添加4-甲基吗啉(0.041ml，.375mmol)，然后逐滴添加氯甲酸异丁酯(0.049ml，.375mmol)。另外，将er-888840-2hcl(51.2mg，0.150mmol)和dipea(0.052ml，.30mmol)的溶液在室温下搅拌，15min之后，将该溶液添加至前述制备的混合酸酐。将总反应混合物再搅拌3h，此后将完成的反应浓缩并将残余物溶于dcm(5ml)。将溶液经硅胶(12g，用含0-75％etoac的庚烷洗脱)纯化，以提供黄色固体的boc保护的中间体。

将中间体溶于dcm(1.0ml)，并且一次性加入tfa(1.00ml，12.98mmol)。将混合物在室温下搅拌1h，此后将完成的反应浓缩至干燥。将残余物溶于meoh(10ml)并添加mp-碳酸酯碱性树脂(～250mg)。将混合物在室温下搅拌30min，此时橙色已变为浅黄色。过滤悬浮液，将滤液浓缩，并在真空中干燥以提供er-899127(21.7mg，0.057mmol，37.9％收率)。

以与er-899127相似的方法制备er-899128(29.9mg，0.078mmol，52.2％收率)，其中以er-888840-2hcl(51.2mg，0.150mmol)和(s)-4-(叔丁氧基羰基)吗啉-3-甲酸(87mg，.375mmol)起始。

以与er-899127相似的方法制备er-898881(101mg，0.266mmol，31.6％收率)，其中以er-888840-2hcl(250mg，0.841mmol)和(s)-2-(氨基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(364mg，1.682mmol)起始。

er-898979：向2-(1h-咪唑-4-基)乙酸盐酸盐(33mg，0.200mmol)在dmf(0.5ml)中的经搅拌的溶液添加hatu(76mg，0.200mmol)。将混合物在室温搅拌30min，此后添加含er-888840-2hcl(68mg，0.200mmol)的dmf(0.5ml)，然后再添加dipea(0.14ml，0.80mmol)。将混合物在室温搅拌24h，此后用nahco3水溶液(2ml)和水(10ml)将其淬灭。通过过滤收集固体，用水洗涤，在真空中干燥，并经过硅胶(10g，0-10％meoh在dcm中)纯化，在将所需部分收集、在真空中浓缩和干燥之后，提供er-898979(23mg，0.061mmol，30.7％收率)。

以与er-898979相似的方法制备er-898980(30mg，0.078mmol，36.7％收率)，其中以er-888840-2hcl(68mg，0.200mmol)和2-(吡啶-2-基)乙酸盐酸盐(34.7mg，.200mmol)起始。

以与er-898979相似的方法制备er-898981(25mg，0.067mmol，33.4％收率)，其中以er-888840-2hcl(68mg，0.200mmol)和2-(1h-吡唑-1-基)乙酸(25.2mg，.200mmol)起始。

以与er-898979相似的方法制备er-898982(10mg，0.028mmol，13.9％收率)，其中以er-888840-2hcl(68mg，0.200mmol)和1h-吡唑-4-甲酸(22.4mg，.200mmol)起始。

以与er-898979相似的方法制备er-898984(18mg，0.048mmol，24.4％收率)，其中以er-888840-2hcl(68mg，0.200mmol)和烟酸(25mg，.200mmol)起始。

以与er-898979相似的方法制备er-898985(27mg，0.072mmol，36.1％收率)，其中以er-888840-2hcl(68mg，0.200mmol)和1-甲基-1h-咪唑-5-甲酸(25.2mg，.200mmol)起始。

以与er-898979相似的方法制备er-898986(45mg，0.120mmol，60.1％收率)，其中以er-888840-2hcl(68mg，0.200mmol)和1-甲基-1h-吡唑-5-甲酸(25.2mg，.200mmol)起始。

以与er-898979相似的方法制备er-899350.hcl(36mg，0.090mmol，30.5％收率)，其中以er-888840-2hcl(100mg，0.295mmol)和3-((叔丁氧基羰基)氨基)氧杂环丁烷-3-甲酸(70.4mg，.324mmol)起始，如前述实例中所述的那样使用tfa对boc基团进行去保护并形成hcl盐。

er-896760：向er-888840-2hcl(100mg，.295mmol)在dcm(1.0ml)中的经搅拌的溶液添加tea(0.205ml，1.474mmol)，然后添加异丙基磺酰氯(0.050ml，.442mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h，此后将完成的反应用dcm(10ml)稀释，然后用饱和的nahco3(5ml)和盐水(5ml)洗涤。有机层用na2so4干燥，过滤并浓缩，然后经硅胶(biotagesp4.columninterchim25g，庚烷中的30μm6％-50％etoac)纯化，在将所需产物部分浓缩、在真空中浓缩和干燥之后，获得白色固体的er-898760(3.7mg，9.93μmol，3.37％收率)。

以与er-898760相似的方法制备er-899672.hcl(25mg，0.055mmol，37.6％收率)，其中以er-888840-2hcl(50mg，0.147mmol)和3-(二甲基氨基)丙烷-1-磺酰氯盐酸盐(65.5mg，.295mmol)开始。以与其它实例中所描述的相似方式制备盐酸盐。

er-899669-hcl：向er-888840-2hcl(200mg，.59mmol)在dcm(2.0ml，31.083mmol)中的经搅拌的溶液添加tea(0.411ml，2.948mmol)，然后添加2-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙烷磺酰氯(323mg，1.179mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h，此后将完成的反应用dcm(5ml)稀释，用饱和的nahco3(2ml)和盐水(2ml)洗涤。有机层经na2so4干燥，过滤并浓缩，然后经硅胶(biotagesp4.columnbiotagesnapultra50g，30μm.12％-100％etoac/庚烷)纯化。将所需部分在真空下浓缩并干燥以获得n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙烷磺酰胺(266mg，0.528mmol，90％收率)。

将n-((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)-2-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙烷磺酰胺(100mg，.199mmol)添加至含一水合肼(0.096ml，1.986mmol)的thf(2.00ml)。将反应混合物在室温搅拌过夜，此后将完成的反应通过celite545垫过滤并且用thf(5ml)冲洗。将粗产物经硅胶(biotagesp4.columnbiotagesnapultra25g，30μm.1％-40％meoh/dcm)纯化，并且将所需的部分合并，在真空中浓缩并干燥以提供黄色固体的er-899669(52mg，0.139mmol，70.1％收率)。

将er-899669(52mg，0.139mmol)溶于1，4-二噁烷(2.0ml)，并且用含4.00mhcl的二噁烷(0.037ml)在室温下处理30min。用甲苯(2ml)稀释混合物并浓缩。将产物与甲苯(2ml)共沸。在真空泵上干燥产物以获得橙色固体的er-899669-hcl(57mg，0.139mmol，100.0％收率)。

er-899671-hcl：将er-899669(50mg，.134mmol)和37％甲醛水溶液(109mg，1.339mmol)在甲酸(0.1ml，2.607mmol)中的溶液在80℃搅拌8h。将完成的反应与甲苯(每次2ml)共沸两次。将残余物溶于meoh(5ml)，然后添加amberliteira400氢氧化物形式，搅拌10min直到获得中性ph。过滤amberlite，用meoh冲洗，并将滤液浓缩，然后与甲苯(2ml)共沸两次至干燥。将残余物经硅胶(biotagesp4.columnbiotagesnapultra25g，30μm.1％-40％meoh/dcm)纯化，并且将所需的部分合并，在真空中浓缩并干燥以提供er-899671(28mg，0.070mmol，52.1％收率)。

将er-899671(28mg，0.070mmol)溶于1，4-二噁烷(2.0ml)，并且用含4.0mhcl的二噁烷(0.017ml，.066mmol)在室温下处理30min。将混合物与甲苯(每次2ml)共沸三次。在真空中干燥产物以获得橙色固体的er-899671-hcl(30mg，0.068mmol，100％收率)。

其它实例：

er-889591：将er-888840(15mg，0.056mmol)、甲酸(0.0.64ml，mmol)和37％甲醛水溶液(0.042ml，mmol)合并，并在80℃下微波8h，此后将冷却的反应浓缩。将粗产物在meoh(2ml)中稀释并且经c-18反相hplc(用含有0.1％tfa的10％-100％乙腈水溶液洗脱)纯化。将所需部分浓缩，溶于meoh(1ml)并经过碱性硅胶柱(biotageisolutespe，1gsico3，用meoh洗脱)，然后在真空中浓缩并干燥以提供er-889591(2.1mg，0.007mmol，12.7％收率)。

er-895386：在0℃下向(r)-(1，5-二羟基-4，4-二甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(636mg，2.571mmol)和tea(1.434ml，10.286mmol)在etoac(10ml)中的溶液逐滴添加甲磺酰氯(0.421ml，5.40mmol)，此后将混合物在0℃搅拌2h。用nahco3水溶液(5ml)淬灭反应，将层分离并用etoac(每次5ml)对水层萃取三次。将合并的etoac层用水(5ml)洗涤，经mgso4干燥，过滤并浓缩至干燥。产物为(r)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2，2-二甲基戊烷-1，5-二基二甲磺酸酯(1.01g，2.503mmol，97％收率)，其不需纯化而进行使用。

将苄胺(0.819ml，7.50mmol)升温至50℃，然后在15min内逐滴添加(r)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2，2-二甲基戊烷-1，5-二基二甲磺酸酯(1.009g，2.50mmol)在dme(1.50ml，14.431mmol)中的溶液。在完成添加之后，将混合物在50℃搅拌20h。将完成的反应冷却至室温并用饱和的nahco3(10ml)和etoac(10ml)稀释，然后剧烈搅拌10min。将所得的混合物中的有机部分用盐水(5ml)洗涤，经mgso4干燥，过滤并浓缩。将残余物经过硅胶(biotage，用含0至10％etoac的庚烷洗脱)纯化，在将所需部分合并、在真空中浓缩和干燥之后，提供(r)-(1-苄基-5，5-二甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.570mmol，62.8％％收率)。

将((3r，5s)-1-苄基-5-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.642mmol)溶于乙醇(50ml，856.335mmol)，并且在45℃和50bar下，使用5％pd/c介质催化剂(catcart)与h2气体在h-cube上进行氢化，溶液流速为1ml/min，持续7h。将溶液浓缩以提供白色粉末的((3r，5s)-5-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(350mg，1.633mmol，99.5％收率)，并且不需进一步纯化而进行使用。

向((3r，5s)-5-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(890mg，4.153mmol)和5-溴喹啉-8-甲腈(1452mg，6.229mmol)在dmac(14ml)中的经搅拌的溶液添加dipea(2.176ml，12.459mmol)，然后密封并加热至110℃，同时搅拌48h。将完成的反应冷却至室温，用水(20ml)稀释，然后用etoac(每次10ml)萃取三次。将合并的有机层用水(10ml)和盐水(10ml)洗涤，经mgso4干燥，过滤并浓缩至干燥。将粗产物经过硅胶(biotage，sp4，用含0至10％etoac的庚烷洗脱)纯化，在将所需部分合并、在真空中浓缩和干燥之后，提供((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(817mg，2.229mmol，53.7％收率)。

用含4mhcl的二噁烷(2ml，8.00mmol)处理(r)-(1-(8-氰基喹啉-5-基)-5，5-二甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，.184mmol)，并且在室温下搅拌1h。将完成的反应在真空中浓缩并干燥，不需进一步纯化，提供作为二盐酸盐的er-895386(51.6mg，0.184mmol，100％收率)。

er-897810：向((3r，5s)-1-(8-氰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯54(75mg，0.205mmol)在乙醇(4.5ml)中的经搅拌的溶液添加0.5m氢氧化钠(4.503ml，2.251mmol)，然后添加60％过氧化氢水溶液(0.233ml，2.281mmol)。将反应混合物升温至50℃，并且然后搅拌4h。将完成的反应冷却至室温，然后添加5％硫代硫酸钠水溶液(1ml)，搅拌5min，并且添加1nhcl至ph7-8。将混合物浓缩至50％体积，然后用dcm(每次5ml)萃取三次。将合并的有机层用水(5ml)洗涤，经mgso4干燥，过滤并浓缩至干燥。将粗产物经硅胶(10g，用含0-60％etoac的庚烷洗脱)纯化，在将所需部分收集、在真空中浓缩并干燥之后，提供((3r，5s)-1-(8-氨基甲酰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(57mg，0.148mmol，72.4％收率)。

向((3r，5s)-1-(8-氨基甲酰基喹啉-5-基)-5-甲基哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(57mg，.148mmol)在dcm(5ml)中的经搅拌的溶液添加tfa(0.5ml，6.49mmol)，此后将混合物在室温下搅拌1h。将完成的反应浓缩，然后溶于meoh(2ml)并用0.5g碳酸氢盐树脂处理。在室温下搅拌30min之后，将悬浮液过滤，用meoh(1ml)洗涤两次，并且将合并的滤液浓缩为淡黄色固体。将该固体溶于etoac(1ml)，用含4mhcl的二噁烷(0.029ml，0.115mmol)处理，搅拌15min。通过过滤收集所得的固体，并且在真空中干燥以提供er-897810-hcl(37mg，0.115mmol，78％收率)。

一般筛选测定和药理学策略

为了鉴定有效的和选择性的tlr7/8化合物，故对全部人tlr4、tlr7和tlr9报告物系的基于细胞的组进行初始筛选(更多细节参见“材料与方法”)。在原代人pbmc测定中，还测试了对tlr7有效和选择性的至少一种化合物对tlr8的活性(见以下表2)和对tlr7/8的效能(更多细节参见“材料与方法”)。将某些化合物推进入短期体内(stiv)测定以测定对小鼠tlr7的剂量依赖性活性和作用持续时间(更多细节参见“材料与方法”)。然后评估所选择的化合物对以下小鼠狼疮疾病模型bxsb-yaa、nzbxnzw和pristane：dba/1中的一种或多种的影响。

当在细胞系或原代细胞上表达的这些受体受到合成的小分子(cl097，r848)或核酸(rna)配体刺激时，本文中的实施方案报道的许多化合物显示了对人tlr7和小鼠tlr7及人tlr8的纳摩尔效能。相反地，本文的实施方案中所报道的大多数化合物对tlr9途径是无活性的。

目前，狼疮soc药物包括诸如氯喹和羟氯喹(hcq)的抗疟药物，其已经显示可在体内抑制tlr7/9活性。这可以至少部分地解释这些药物在控制狼疮突发中的有效性。然而，本公开内容的实施方案已经显示出提供更显著有效的抑制。这通过以下表1中显示的结果得以证实。

表1.化合物er-888840相对于羟氯喹(plaquenil)的效能和选择性。

表2.在hek-293测定形式中所选化合物对人tlr8的效能(更多细节参见“材料与方法”)。

短期体内(stiv)测定：为了在体内评估化合物对于小鼠tlr7的效能，利用了短期体内(stiv)测定。简而言之，将化合物口服给药于小鼠，然后小鼠在各个时间点皮下注射激动剂r848以刺激tlr7。然后在r848刺激之后，通过elisa检测了血浆il-6水平以评估化合物效能和作用持续时间。重要的是，利用tlr7缺失的小鼠，在用r848进行体外或体内刺激之后，细胞因子的产生显示出完全为tlr7依赖性的。因此，可以确信化合物在stiv测定中的活性归因于对tlr7途径的调节。在以下表3中示出了一组化合物的stiv测定效能的汇总。

表3.所选化合物的短期体内(stiv)测定数据的汇总。

小鼠狼疮疾病模型。选择两种不同的狼疮疾病模型(nzb/w和姥鲛烷)用于化合物poc评估，因为(1)nzb/w品系发展为具有多基因病因学的自发性疾病，显示出人狼疮的许多标志，例如dna相关的自身反应性、蛋白尿和免疫复合物介导的肾炎，以及(2)已经报道了对于两种疾病模型的阳性tlr7和/或tlr9靶标确认结果。

在sle疾病模型中对于er-888840的关键发现如下(参见图1a至图1d和图2a至图2e)：

1)er-888840在姥鲛烷模型中抑制多种自身抗体特异性。er-888840还剂量依赖性地显著降低了干扰素调节的基因在姥鲛烷诱导的患病动物中的表达，正如在干扰素评分中所体现的。

结果汇总：这些数据显示了所述化合物对在人狼疮的重要方面中所涉及的过程的调节作用。包含核酸的免疫复合物可以通过树突状细胞驱使1型干扰素产生，并且反映干扰素的存在和干扰素调节基因的后续表达的“干扰素信号”与疾病的严重程度有关。在姥鲛烷模型中er-888840抑制干扰素驱动的基因的上调。er-888840限制若干自身抗体特异性的产生。结果表明这些化合物具有控制狼疮症状和在人类患者中进展的潜力。

药理学材料与方法：

体外药理学：

将hek-293细胞(atcc)设计成稳定表达nf-kappab转录因子可诱导的e-选择素(elam-1)荧光素酶报告物，所述荧光素酶报告物来源于包含来自人e-选择素基因(登记号nm_000450)的启动子的碱基对-2241bp至-254bp的质粒pgl3(promega)。随后将这些细胞设计成稳定地并分别地表达人tlr4、tlr7或tlr9全长orfcdnas。将人tlr4cdna(登记号nm_138554)克隆至pcdna3.0表达载体(invitrogen)中。还将tlr4转染的细胞设计成表达人md-2共受体[将md-2cdna(登记号nm_015364)克隆至pef-bos载体]，并且在培养基中补充10nm可溶的cd14(r&dsystems)以使lps响应性最优化。将人tlr9cdna(登记号nm_017442)克隆至pbluescriptiiks载体(agilent)中。从origene获得人tlr7cdna(登记号nm_016562)。稳定表达人tlr8(登记号nm_138636)或小鼠tlr7(登记号nm_133211)的hek-293细胞购自于invivogen，并且然后用pnifty2(nf-kappab)-荧光素酶报告物质粒(invivogen)稳定转染。将在包含10％胎牛血清(fbs)的dulbecco改良eagle培养基(dmem)中密度为2.22×10⁵个细胞/ml的各个细胞类型接种至384孔板中，并且在37℃、5％co2下孵育2天。然后添加不同浓度的拮抗剂化合物。然后将细胞再孵育30分钟，之后添加以下适当的tlr激动剂(显示为最终浓度)：10ng/ml的脂多糖(lps；sigma)用于tlr4、3μg/ml的cl097(invivogen)用于人tlr7和人tlr8以及小鼠tlr7、以及0.6μm的cpg-2006-2a[序列：tcgtcgttaagtcgttaagtcgtt(seqidno：1)，具有硫代磷酸酯骨架，由sigma-aldrich合成]用于tlr9。然后将细胞孵育过夜，并且按照制造商建议的方案通过用(promega)或steadylite^tm(perkinelmer)试剂测量发光对nf-kappab依赖性荧光素酶报告物活化进行定量。

基于人pbmc细胞的测定。从新鲜抽取的肝素化(10usp单元/ml，hospira，lakeforest，il)的健康供体的全血中通过密度梯度分离人外周血单核细胞(pbmc)(1077，sigma，inc.，st.louis，mo)。简而言之，将25ml血液在50ml圆锥管中用15mlpbs(不含ca²⁺、mg²⁺)稀释，并且使用脊椎穿刺针将12mlhistopaque置于下面。将管以1200rpm(350xg)离心45分钟，并且从血沉棕黄层收集pbmc。然后将细胞在pbs中洗涤两次，并且使红细胞在室温下通过在5ml氯化铵溶液(1x红细胞裂解缓冲液，ebioscience)中悬浮5分钟而裂解。在pbs中最终洗涤之后，将pbmc以最终浓度2×10⁶/ml重悬浮于具有l-谷氨酰胺(invitrogen)的rpmi-1640培养基中，并且补充25mmhepes(mediatech，inc，manassasva)、10％胎牛血清(hyclone，logan，ut)和青霉素-链霉素-谷氨酰胺(mediatech)，并且以100μl/孔(2×10⁵个细胞/孔)接种于组织培养物处理过的96孔板(falcon)中。

将溶解和连续稀释于100％dmso中的拮抗剂化合物以一式三份添加至细胞以获得0.1％dmso(v/v)的最终浓度。将溶解和连续稀释于pbs中的羟氯喹(acrosorganics)以一式三份添加至细胞。将pbmc与拮抗剂化合物或hcq在37℃、5％co2下孵育30分钟，之后以每孔100μl完全培养基添加以下各种tlr激动剂试剂(显示为最终浓度)中：1μm的r848(瑞喹莫德；glsynthesis，worcester，ma)用于tlr7和tlr8，50ng/ml的pam3csk4(invivogen)用于tlr1/2，10ng/ml的lps(sigma)用于tlr4，以及5μg/ml的cpg-2216(invivogen)用于tlr9。为了制备模拟狼疮患者中包含rna的自身抗体免疫复合物的tlr7/8激动剂，合成具有来自人u1snrna茎环iv[(序列：gggggacugcgu-ucgcgcuuuccc(seqidno：2)，具有硫代磷酸酯骨架]的序列的26-merrna(dharmacon，inc.，lafayette，co)，其在之前已显示为有效的tlr7和tlr8激动剂。将这种rna分子在无血清的rpmi中稀释至2.5μm，并且以1∶25稀释或1μg/ml添加的小鼠抗人单链dna单克隆抗体(mab3034，millipore，inc.，billerica，ma)，其还与rna交叉反应。在被添加至细胞之前，将产生的“rna-ig”刺激物在室温下孵育15-30分钟。将pbmc与各种tlr激动剂在37℃、5％co2下孵育20小时。收集细胞培养上清液，并且根据制造商(bdbiosciences，inc.，sandiego，ca)建议的方案通过标准elisa程序所示来评估各种人细胞因子的水平。在表4中显示了结果。

表4--所选化合物的pbmc测定数据的汇总

基于小鼠脾细胞的测定。从通过co2安乐死的雌性balb/c小鼠(jacksonlabs，barharbor，me)获得脾脏。通过将脾脏经过40μm尼龙细胞过滤器而获得单细胞悬浮液。用50mlpbs(mediatech，inc.，manassas，va)对细胞洗涤两次，并且将红细胞在5mlrbc裂解缓冲液中裂解，在室温下保持5分钟。将细胞在pbs中再洗涤两次，并且最终以2.5×10⁶个细胞/ml重悬浮于补充的rpmi-1640中。将细胞以100μl/孔(2.5×10⁵个细胞/孔)接种于组织培养物处理过的96孔板中(falcon)。将溶于100％dmso中的连续稀释的化合物以一式三份添加至细胞，以获得0.1％dmso的最终浓度。将细胞用化合物在37℃、5％co2下孵育30分钟，然后添加100μl/孔的在完全培养基中的740nmr848(瑞喹莫德；glsynthesis，worcester，ma)至最终浓度为370nmr848。使细胞在37℃、5％co2下孵育20小时。收集培养上清液，根据制造商(bdbiosciences，inc.，sandiego，ca)建议的方案通过标准elisa方法评估il-6的水平。

体内药理学：

短期体内(stiv)测定：通过灌胃口服200ul体积的在0.5％甲基纤维素水溶液(sigma，st.louis，mo)中配制的拮抗剂化合物对六周龄至八周龄的雌性balb/c小鼠(jacksonlabs，barharbor，me)给药。在之后的各时间点，向小鼠皮下(s.c.)注射100μl体积的15μgr848(瑞喹莫德；glsynthesis，worcester，ma)以刺激tlr7。通过心脏穿刺收集血浆，然后根据制造商(r&dsystems)建议的方案通过标准elisa方法评估在tlr7刺激之后1.5小时的il-6的水平。

小鼠狼疮疾病模型品系。从jacksonlabs(barharbor，me)购买雄性bxsb-yaa小鼠和雌性nzbwf1/j小鼠，两者都显示具有自发性狼疮疾病。从harlanlaboratories(indianapolis，in)购买雌性dba/1小鼠，并且在指定鼠龄给予腹膜内注射0.5ml姥鲛烷(2，6，10，14-四甲基十五烷；sigma，st.louis，mo)以化学诱导狼疮疾病，或腹膜内注射0.5mlpbs以产生鼠龄一致的未患病的对照小鼠。

通过elisa评估自身抗体滴度。通过标准elisa方法评估抗-dsdna滴度、抗-sm/nrnp滴度、抗-ribop滴度和抗组蛋白滴度。简而言之，用100μl如下的含稀释的抗原的pbs(显示最终浓度)对96孔eia/riaelisa板(corning)进行涂覆，在室温下保持90分钟：10u/mlsm/nrnp复合物(immunovision)、10μg/ml小牛胸腺dsdna(sigma)、5u/mlribop(immunovision)和5μg/ml组蛋白(immunovision)。将板用pbs/0.05％tween20(洗涤缓冲液)进行洗涤，并且用pbs/1％bsa(封闭缓冲液)在4℃封闭过夜。对板进行洗涤，将在封闭缓冲液中稀释的小鼠血浆样品(根据模型和抗原，以1∶25-1∶10,000进行稀释)以每孔100μl体积添加至孔，并且将板在室温下孵育90分钟。然后对板进行洗涤，将100μl以1∶50,000稀释于pbs/1％bsa/0.05％tween中的抗小鼠-igg-hrpo(southernbiotech)添加至各个孔，并且将板在室温下孵育90分钟。对板进行洗涤，并且将100μl来自opteiatmb底物试剂盒(bdbiosciences)的底物组分的1∶1混合物添加至孔。在室温下孵育板，并且在充分显色后，通过添加100μl0.18m硫酸溶液使反应停止。通过分光光度法在450nm对板进行读数。

蛋白尿的评估。从各只小鼠手动收集尿，或通过每个代谢笼饲养1-2只小鼠18小时来收集尿，并且对各个动物测定尿白蛋白肌酸酐比例(uacr)作为肾脏功能的间接测量(将uacr计算为每分升(dl)尿的白蛋白(mg)/肌酸酐(g)的比值)。使用抗小鼠白蛋白抗体组(bethyllabs)通过定制夹心elisa方案测定尿样中的白蛋白水平，其中该抗体组包括包被抗体和用于检测的标记有hrp缀合物的二级抗体。使用商购的肌酸酐测试盒(cayman)测定肌酸酐水平。

肾炎的组织学评估。从各只小鼠收集肾脏，将肾脏固定在福尔马林中24小时，嵌入石蜡，并且以盲检的方式产生h&e染色切片用于组织病理学评估。以下为肾炎疾病评分的特征：0级-正常限度；1级-带状毛细血管壁增厚；2级-细胞过多、细胞分裂、新月体形成；3级-参见2级，肾小球病变的严重程度和范围增加(受损肾小球％)；4级-硬化；严重的肾小球疾病(非功能器官)。

评估全血中的干扰素基因表达。通过qpcr测量ifn调节基因在全血中的表达。简而言之，使小鼠安乐死，经由腔静脉收集血液，并且在包含rnalater(ambion，austintx)的管中保藏100ul。使用mouseribopure血液rna分离试剂盒(ambion)分离总的rna。使用nanodropnd-1000分光光度计(thermoscientific，walthamma)测定rna浓度。使用vilo^tmmastermix(lifetechnologies，grandisland，ny)由100ng总rna合成第一链cdna。在逆转录之后，将cdna用无核酸酶的水稀释并且与fastadvancedmastermix(appliedbiosystems)混合。然后将混合物应用于由appliedbiosystems制造的定制lowdensityarray(tlda)，并且在abi7900htfastreal-timepcrsystem(appliedbiosystems)上进行qpcr。使用rqmanager1.2.1(appliedbiosystems)收集原始数据并且使用genedataanalyst2.2software(genedata)分析。

tlda组包含多至45个选自以下表7的靶基因，和3个用于归一化的管家基因。基于变差系数，选择管家基因hprt1用于进行归一化。对靶基因测定相对量，并且将该相对量用于计算各只患病小鼠相对于仅接受腹膜内注射pbs的未患病对照组的倍数变化。进行标准studentt检验以测定在未患病组(pbs治疗)与媒介物治疗的患病组(姥鲛烷治疗)之间何种靶基因显著降低，由此表示出疾病调节基因集。随后对各只小鼠计算作为在t检验中所鉴定的所有疾病调节基因的中值倍数变化的“ifn评分”。

表7