本发明属于化学医药领域，具体涉及二氮杂并咔唑类ido抑制剂或其药学可接受的盐，以及含有这些化合物的药物组合物和这些化合物或组合物在药物制备中的应用。
背景技术：
吲哚胺2,3-双加氧酶(ido)是肝脏以外唯一催化色氨酸沿犬尿氨酸途径代谢的限速酶，已被证实与肿瘤、阿尔兹海默病、抑郁症和老年性白内障等多种人类重大疾病密切相关，而ido得表达或活性的异常增高，是导致上述疾病的一个重要因素，因此，筛选高效的ido抑制剂可以为这些疾病提供有效治疗药物。近年来，研究证实ido在多种实体瘤中如肺癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌等肿瘤组织中表达明显增强，且与预后密切相关。因此，使用ido抑制剂可能成为一种治疗肿瘤的有效方法。因此，开发ido抑制剂具有广阔的临床应用前景。技术实现要素：本发明的一个目的是提供通式i的二氮杂并咔唑类ido抑制剂或其药学可接受的盐，本发明的另一个目的是提供包含本发明的通式i的化合物或其药学可接受的盐和药学可接受的载体的组合物。本发明的再一个目的是提供本发明的通式i的化合物或其药学可接受的盐在制备用于治疗和/或预防肿瘤的药物中的应用。针对上述目的，本发明提供以下技术方案：第一方面，本发明提供通式i的化合物或其药学可接受的盐，其中，x选自c或n；r1选自卤素、烷基、烷氧基、羟基、羧基、酯基、卤代烷基、卤代烷氧基中的一个或多个；n选自0、1或2。优选地，本发明的化合物为通式i的化合物及其药学可接受的盐，其中，r1选自羟基、羧基、酯基中的一个或多个；进一步优选地，本发明的化合物为通式i的化合物及其药学可接受的盐，其中，r1选自羧基、酯基中的一个或多个。优选地，本发明的化合物为通式i的化合物及其药学可接受的盐，其中，n选自0或1。本发明提供了以下具体化合物：第二方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供本发明的化合物或其药学可接受的盐及包含本发明的化合物或其药学可接受的盐的药物组合物，所述化合物或药物组合物用于治疗或预防癌症，所述癌症包括但不限于乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、胰腺癌等。可以将本发明的化合物或其药学可接受的盐与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。第三方面，本发明提供本发明的化合物或其药学可接受的盐，或本发明的药物组合物在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用，包括向肿瘤易发人群或肿瘤患者施用本发明的化合物或其药学可接受的盐，或者包含本发明的化合物或其药学可接受的盐的药物组合物，以有效降低肿瘤发生率、延长肿瘤患者生命。术语说明本发明的“烷基”是指直链、支链或环状的饱和烃基。本发明的“烷氧基”是指烷基-o-。本发明的“卤素”是指氟、氯、溴、碘。本发明的“卤代烷基”是指至少被一个卤素取代的烷基。本发明的“卤代烷氧基”是指至少被一个卤素取代的烷氧基。本发明的“药学可接受的盐”是指本发明的化合物与酸形成的药学上可接受的盐，所述的酸包括但不限于磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、醋酸、乳酸、硝酸等等。本发明的“药学上可接受的载体”是指对有机体不引起明显刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的载体，包含溶剂、稀释剂或其它赋形剂、分散剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。除非任何常规载体介质与本发明化合物不相容。可以作为药学上可接受的载体的一些实例包括，但不限于糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、以及纤维素和乙酸纤维素；麦芽、明胶等。具体实施方式下面代表性的实施例是为了更好地说明本发明，而非用于限制本发明的保护范围。实施例11-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-吡啶-3-基甲基脲步骤12-溴-3-((3-氧代环己-1-烯-1-基)氨基)苯甲酸甲酯的合成称取3.58g3-氨基-2-溴苯甲酸甲酯、1.68g环己烷-1,3-二酮于反应瓶中，加入乙酸20ml溶解，80℃反应8h，反应结束后，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得标题化合物。lc-msm/z:[m+h]+＝325。步骤24-氧代-2,3,4,9-四氢-1h-咔唑-5-羧酸甲酯的合成称取1.62g步骤1所得物、0.23g乙酸钯、1.22g三(邻甲苯基)膦和0.63g三乙胺于密封管中，加入乙腈15ml，氮气氛围下100℃密封反应20小时，反应结束后，冷却，加入水15ml稀释，二氯甲烷萃取(50ml*3)，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得标题化合物。lc-msm/z:[m+h]+＝244。步骤32,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮的合成称取0.73g步骤2所得物、1.5ml乙酸和8.6ml水合肼于反应瓶中，加入甲醇40ml，回流反应8小时，趁热过滤，水、乙酸乙酯和二氯甲烷洗涤，得标题化合物。lc-msm/z:[m+h]+＝226。步骤410-(2-叔丁氧羰基氨基)乙基-2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮称取10gn-叔丁氧羰基氨基乙醇和23.96gtscl于反应瓶中，加入吡啶50ml溶解，室温反应过夜，反应结束后，减压蒸除吡啶，加水20ml，乙酸乙酯萃取(50ml*3)，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化得(1-(叔丁氧羰基)氨基)乙醇-(4-甲苯磺酸)酯。称取0.67g步骤3所得物和0.3gnah于反应瓶中，加入10mldmf溶解，45℃反应2h后，加入2.81g所得(1-(叔丁氧羰基)氨基)乙醇-(4-甲苯磺酸)酯，室温搅拌16h，反应结束后，加水10ml，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤，柱层析纯化得标题化合物。lc-msm/z:[m+h]+＝369。步骤510-氨乙基-2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮的合成称取1.0g步骤4所得物于反应瓶中，加入二氯甲烷15ml溶解，室温搅拌下加入10ml三氟乙酸，反应5h，反应结束后，减压蒸除溶剂，用饱和碳酸氢钠水溶液至ph至8，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，过滤干燥得标题化合物。lc-msm/z:[m+h]+＝269。步骤61-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-吡啶-3-基甲基脲的合成称取0.24g3-氨甲基吡啶于反应瓶中，加30ml体积比为1:1的二氯甲烷/饱和碳酸氢钠水溶液的混合溶剂，0℃、搅拌下加入0.22g三聚光气，0℃下继续反应30min，反应结束后，分液，收集有机层，干燥后，加入10ml二氯甲烷溶解后，加入0.15g步骤5所得物，0℃下继续搅拌10h，反应结束后，柱层析纯化得标题化合物。1hnmr(400mhz,cdcl3,δppm):8.70(s,1h),8.56-8.54(m,1h),7.86-7.79(m,2h),7.60-7.51(m,2h),7.38(m,1h),7.25-7.19(m,2h),6.34(m,1h),4.68-4.60(m,2h),4.43(s,2h),3.76-3.72(m,2h),2.77-2.79(m,2h),2.35-2.30(m,2h),1.95-1.93(m,2h)。lc-msm/z:[m+h]+＝403。实施例21-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(4-乙氧羰基)苯甲基脲步骤14-氨甲基苯甲酸乙酯的制备量取10ml乙醇于反应瓶中，加入0.4g3-氨甲基苯甲酸，搅拌溶解后，0℃下缓慢滴加二氯亚砜，滴毕，升至室温搅拌反应8h，反应结束后，减压蒸除溶剂，饱和碳酸氢钠溶液调节ph至7-8，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物，用于投下一步。步骤21-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(4-羧基)苯甲基脲的合成以步骤1所得物4-氨甲基苯甲酸乙酯、实施例1步骤3所得物2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮、n-叔丁氧羰基氨基乙醇为原料，同实施例1步骤4-6的方法制得标题化合物。1hnmr(400mhz,cdcl3,δppm):7.93-7.90(m,2h),7.80-7.79(m,1h),7.60-7.56(m,2h),7.42-7.39(m,2h),7.38(m,1h),7.24-7.20(m,2h),4.68-4.65(m,2h),4.35-4.32(m,2h),4.30-4.29(m,2h),3.65-3.62(m,2h),2.79-2.76(m,2h),2.11-2.09(m,2h),1.89-1.87(m,2h),1.31-1.29(m,3h)。lc-msm/z:[m+h]+＝474。实施例31-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(4-羧基)苯甲基脲称取0.5g实施例2所得物于反应瓶中，加水5ml，乙醇5ml，氢氧化钠0.5g，100℃反应2h，反应结束后，冷却至室温，减压蒸除溶剂，加水，稀盐酸调节ph至6-7，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥，柱层析纯化得标题化合物。1hnmr(400mhz,cdcl3,δppm):12.49(s,1h),7.93-7.91(m,2h),7.79-7.78(m,1h),7.60-7.55(m,2h),7.42-7.39(m,2h),7.38(m,1h),7.24-7.20(m,2h),4.68-4.65(m,2h),4.35-4.32(m,2h),3.65-3.62(m,2h),2.79-2.76(m,2h),2.11-2.09(m,2h),1.89-1.87(m,2h)。lc-msm/z:[m+h]+＝446。实施例41-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(3-羧基)苯甲基脲以3-氨甲基苯甲酸、实施例1步骤3所得物2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮、n-叔丁氧羰基氨基乙醇为原料，同实施例2的方法制得1-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(3-乙氧羰基)苯甲基脲。以1-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(3-乙氧羰基)苯甲基脲为原料，同实施例3的方法制得标题化合物。1hnmr(400mhz,cdcl3,δppm):12.51(s,1h),8.02-8.01(m,1h),7.94-7.92(m,1h),7.80-7.78(m,1h),7.60-7.55(m,2h),7.53-7.50(m,1h),7.42-7.39(m,1h),7.38(m,1h),7.24-7.21(m,2h),4.68-4.66(m,2h),4.29(s,2h),3.65-3.64(m,2h),2.79-2.77(m,2h),2.11-2.09(m,2h),1.89-1.87(m,2h)。lc-msm/z:[m+h]+＝446。实施例51-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(4-乙氧羰基)苯基脲以4-氨基苯甲酸、实施例1步骤3所得物2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮、n-叔丁氧羰基氨基乙醇为原料，同实施例2的方法制得标题化合物。1hnmr(400mhz,cdcl3,δppm):7.88-7.86(m,2h),7.80-7.77(m,3h),7.59-7.57(m,1h),7.54-7.53(m,1h),7.38(m,1h),7.24-7.21(m,2h),4.69-4.67(m,2h),4.30-4.29(m,2h),3.65-3.63(m,2h),2.78-2.76(m,2h),2.10-2.08(m,2h),1.89-1.87(m,2h),1.31-1.29(m,3h)。lc-msm/z:[m+h]+＝460。实施例61-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(4-羧基)苯基脲以实施例5所得物为原料，同实施例3的方法制得标题化合物。1hnmr(400mhz,cdcl3,δppm):12.51(s,1h),8.04-8.02(m,2h),7.89-7.87(m,2h),7.79-7.77(m,1h),7.59-7.57(m,1h),7.54-7.52(m,1h),7.38(m,1h),7.24-7.21(m,2h),4.69-4.67(m,2h),3.64-3.62(m,2h),2.78-2.76(m,2h),2.10-2.08(m,2h),1.89-1.87(m,2h)。lc-msm/z:[m+h]+＝432。实施例71-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(3-乙氧羰基)苯基脲以3-氨基苯甲酸、实施例1步骤3所得物2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮、n-叔丁氧羰基氨基乙醇为原料，同实施例2的方法制得标题化合物。1hnmr(400mhz,cdcl3,δppm):8.31-8.30(s,1h),7.84-7.79(m,3h),7.58-7.53(m,3h),7.38(m,1h),7.24-7.21(m,2h),4.69-4.67(m,2h),4.30-4.29(m,2h),3.65-3.63(m,2h),2.78-2.76(m,2h),2.11-2.09(m,2h),1.89-1.87(m,2h),1.31-1.29(m,3h)。lc-msm/z:[m+h]+＝460。实施例81-(2,3,5,10-四氢-[1,2]二氮杂并[3,4,5,6-def]咔唑-6(1h)-酮-10-基)-3-(3-羧基)苯基脲以实施例7所得物为原料，同实施例3的方法制得标题化合物。1hnmr(400mhz,cdcl3,δppm):12.51(s,1h),8.65(s,1h),8.02-8.00(m,2h),7.79-7.77(m,1h),7.64-7.57(m,3h),7.38(m,1h),7.24-7.20(m,2h),4.69-4.67(m,2h),3.65-3.62(m,2h),2.78-2.76(m,2h),2.10-2.08(m,2h),1.89-1.87(m,2h)。lc-msm/z:[m+h]+＝432。实验例1本发明化合物的体外激酶活性评价建立ido1/2酶活性抑制分子筛选模型，检测阳性对照药epacadostat(incb024360)在此模型上的抑制ic50值，结果表明epacadostat对ido1的ic50值为90nm左右，对ido2的ic50值为3.0um左右，与文献报道相近，说明筛选模型构建成功。在室温环境下，将40nm的ido酶及900um的l-色氨酸混合，并加入反应缓冲液(20mmascorbate,3.5ummethyleneblueand0.2mg/mlcatalasein50mmpotassiumphosphatebufferph6.5)，在室温反应3小时，然后在酶标仪上进行紫外测定，检测波长为321nm。酶活性百分率(％)＝(od值给药孔－od值本底)/(od值对照孔－od值本底)×100％，然后用prismgraphpadsofeware软件拟合计算ic50值，结果见表1.表1化合物ido1(nm)ido2(um)epacadostat903.0实施例1化合物5684.4实施例2化合物3291.2实施例3化合物7503.4实施例4化合物8802.9实施例5化合物860.8实施例6化合物1071.3实施例7化合物740.5实施例8化合物1371.9从以上实验结果可以看出，本发明的化合物对ido1和ido2激酶具有较好的抑制活性，尤其是实施例5化合物和实施例7化合物。实验例2本发明化合物的体外细胞活性评价采用磺酰罗丹明b(srb)比色法，将对数生长期的ht29人结肠癌细胞吹打成单细胞悬液，接种于96孔培养板(5x103细胞/孔)，每孔加入培养基200μl，于37℃、5％co2培养箱中培养过夜；待细胞贴壁后，加入适当浓度的受试化合物和阳性对照药后在培养箱中再培养72小时。加入10％三氯醋酸后于4℃下固定1小时。用双蒸水洗涤5次，干燥后，每孔加入70微升srb溶液(4mg/ml)，室温染色20分钟，1％醋酸洗涤5次，干燥。每孔加入100μl10mmtris-base溶液使srb溶解。酶标仪检测各孔od值，记录结果，按下列公式计算抑制率：抑制率(％)＝(od对照－od给药)/od对照×100％，并计算ic50。结果见表2。表2化合物ht29细胞ic50值epacadostat50.1实施例1化合物78.3实施例2化合物45.7实施例3化合物80.9实施例4化合物44.1实施例5化合物20.5实施例6化合物18.4实施例7化合物23.7实施例8化合物16.8从以上实验结果可以看出，本发明的化合物对结肠癌细胞具有较高的抑制活性。当前第1页12