用于干细胞培养和治疗的培养基、方法、细胞和分泌的因子与流程

本申请要求于2016年3月31日提交的美国临时申请第62/316,131号的优先权，该申请通过引用并入本文。

背景

经由选择性刺激toll-样受体，可以将多能干细胞和间充质干细胞从幼稚或未刺激状态诱导为促炎性(1型)表型或抗炎性(2型)表型。

发明概述

本公开内容提供了新型培养基组合物、干细胞培养方法和治疗方法，其目的为将幼稚多能干细胞——在一些实施方案中为间充质干细胞——诱导、活化或引发成选择性促进或抑制炎症和免疫的独立的(discrete)、多能的、1型或2型细胞表型。因此，本公开内容提供了有用的治疗方案，其中对免疫系统或炎症反应(例如癌症、视神经炎)的调节是期望的。与之前的方法相比，在本发明中，细胞可被诱导成同类的2型群，该群更有效地迁移到疾病部位并且一致性地表达更高水平的抗炎细胞因子，并且因此细胞的效力和功效预期更高。与之前的方法相比，在本发明中，细胞可被诱导成同类的1型群，该群具有独特的促炎性质和某些细胞因子的一致性更高表达，引起肿瘤坏死和有效迁移至肿瘤微环境的能力，因此细胞的安全性、效力和功效预期更高。

本公开内容提供了新型干细胞培养和治疗方法以及培养基组合物，用于诱导、极化、活化或引发独立的一致性细胞表型以选择性地促进或抑制炎症和免疫的目的，提供优于已知的培养基以及已知的用于基于细胞的治疗的方法的显著优势。该方法和培养基组合物可用于提供更一致和可预测的离体扩增以及所诱导、极化、活化或引发的多能干细胞群，所述多能干细胞群可用于基于细胞的治疗。本公开内容的多种实施方案的优点在于它们可用于将多能干细胞的培养物诱导、极化、活化或引发成一致且独立的表型，该表型在被引入患者后以可预测的方式表现。在一些实施方案中，多能干细胞为间充质干细胞。

本公开内容还提供了干细胞培养物的新型副产物、治疗方法和以产生所述副产物为目的的培养基组合物。在某些实施方案中，副产物为使用本公开内容的新型干细胞培养方法和组合物由多能干细胞产生的条件培养基。在某些实施方案中，副产物为使用本公开内容的新型干细胞培养方法和组合物由多能干细胞产生的细胞外囊泡。在一些实施方案中，多能干细胞为间充质干细胞。

在某些实施方案中，本文描述了一种用于从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的培养基，该培养基包含：toll-样受体3(tlr3)配体；第二诱导剂，其中所述第二诱导剂包含不同的toll-样受体配体、神经递质、神经递质样分子、非促红细胞生成素多肽或脂质。在某些实施方案中，第二诱导剂选自由以下组成的列表：组胺、乙酰胆碱、谷氨酸、去甲肾上腺素、肾上腺素、血清素、褪黑激素、脂氧素a4、α-黑素细胞刺激素(α-msh)和白三烯b4。在某些实施方案中，tlr3配体包含poly(i:c)、poly(a:u)或其组合。在某些实施方案中，培养基还包含i)低氧条件，ii)低氧模拟物，iii)促红细胞生成素，或iv)i)、ii)或iii)的任何组合。在某些实施方案中，低氧模拟物包含氯化钴、去铁胺或其组合。在某些实施方案中，培养基还包含多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群包含间充质干细胞群。在某些实施方案中，与在未刺激的多能干细胞群中相比，该培养基产生超过20倍的cxcl9mrna诱导。在某些实施方案中，该培养基产生超过未刺激的多能干细胞群2倍的选自由以下组成的列表的任一mirna的诱导：mir-let7a/d、mir-17_1、mir-222、mir-92a和mir-1260a。在本文的某实施方案中，是一种从培养基中收获的多能干细胞群。在某实施方案中，多能细胞群包含间充质细胞群。在某些实施方案中，其中多能细胞群主要由间充质细胞群组成。在某实施方案中，多能干细胞用于治疗炎性状况或自身免疫性状况。在本文的某实施方案中，是一种治疗炎性状况或自身免疫性状况的方法，包括向受试者施用治疗有效量的从本文描述的培养基中收获的免疫极化多能干细胞群。在本文的某实施方案中，是一种从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的方法，包括使未刺激的多能干细胞群与本文描述的培养基接触。在某实施方案中，多能干细胞群包含间充质细胞群。在某实施方案中，多能干细胞群主要由间充质细胞群组成。在某些实施方案中，该方法还包括向受试者施用治疗有效量的免疫极化多能干细胞群。在本文的某实施方案中，为一种产生细胞外囊泡的方法，包括使未刺激的多能干细胞群与本文的培养基接触。在某实施方案中，多能干细胞包含间充质干细胞群。在某实施方案中，多能干细胞主要由间充质干细胞群组成。在某实施方案中，细胞外囊泡是从培养基中分离和/或纯化的。

在某实施方案中，本文描述了一种用于从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的培养基，该培养基包含：第一诱导剂，toll-样受体4(tlr4)配体；第二诱导剂，其中第二诱导剂包含与第一诱导剂不同的toll-样受体配体、神经递质、神经递质样分子、非促红细胞生成素多肽或脂质。在某实施方案中，第二诱导剂选自由以下组成的列表：组胺、乙酰胆碱、谷氨酸、去甲肾上腺素、肾上腺素、血清素、褪黑激素、脂氧素a4、α-黑素细胞刺激素(α-msh)和白三烯b4。在某实施方案中，tlr4配体包含脂多糖、4-磷酸氨基烷基氨基葡糖苷或其组合。在某实施方案中，培养基还包含i)低氧条件，ii)低氧模拟物，iii)促红细胞生成素，或iv)i)、ii)或iii)的任何组合。在某实施方案中，低氧模拟物包含氯化钴、去铁胺或其组合。在某实施方案中，培养基还包含多能干细胞群。在某实施方案中，多能干细胞群包含间充质干细胞群。在某实施方案中，该培养基产生与未刺激的多能干细胞群相比超过20倍的tnfsf10mrna诱导。在某实施方案中，该培养基产生超过未刺激的多能干细胞群2倍的选自由mir-146、mir-155、mir-1305、mir-575和mir-1973组成的列表的任一mirna的诱导。在本文的某实施方案中，是一种从培养基中收获的多能干细胞群。在某实施方案中，多能干细胞群包含间充质细胞群。在某实施方案中，多能干细胞群主要由间充质细胞群组成。在某实施方案中，多能干细胞群用于治疗肿瘤或癌症。在本文的某实施方案中，是一种治疗肿瘤或癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的从本文的培养基收获的多能干细胞群。在某实施方案中，多能干细胞群包含间充质细胞群。在某实施方案中，多能干细胞群主要由间充质细胞群组成。在本文的某实施方案中，是一种从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的方法，包括使未刺激的多能干细胞群与本文的培养基接触。在某实施方案中，多能干细胞群包含间充质细胞群。在某实施方案中，多能干细胞群主要由间充质细胞群组成。在某实施方案中，该方法还包括向受试者施用治疗有效量的免疫极化多能干细胞群。在本文的某实施方案中，是一种产生细胞外囊泡的方法，包括使多能干细胞群与本文的培养基接触。在某实施方案中，多能干细胞包含间充质干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞主要由间充质干细胞群组成。在某些实施方案中，细胞外囊泡是从培养基中分离和/或纯化的。

在某实施方案中，本文描述了一种分离和纯化的细胞外囊泡，其包含升高的水平的以下蛋白中的任何一种或更多种或其部分：甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)、连接桥粒斑珠蛋白(jup)、桥粒斑蛋白(dsp)、膜突蛋白(msn)、波形蛋白(vim)、肌动蛋白(actb)、膜联蛋白a2(anxa2)，其中升高的水平被与幼稚未刺激的间充质干细胞比较。在某实施方案中，分离和纯化的细胞外囊泡包含升高的水平的以下中的任何两种或更多种：甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)、连接桥粒斑珠蛋白(jup)、桥粒斑蛋白(dsp)、膜突蛋白(msn)、波形蛋白(vim)、肌动蛋白(actb)或膜联蛋白a2(anxa2)。在某实施方案中，分离和纯化的细胞外囊泡包含升高的水平的全部以下七种：甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)、连接桥粒斑珠蛋白(jup)、桥粒斑蛋白(dsp)、膜突蛋白(msn)、波形蛋白(vim)、肌动蛋白(actb)或膜联蛋白a2(anxa2)。在某实施方案中，分离和纯化的细胞外囊泡还包含药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。在某实施方案中，分离和纯化的细胞外囊泡用于在治疗患有肿瘤或癌症的受试者中使用。在本文的某实施方案中，是一种治疗受试者的癌症或肿瘤的方法，包括施用治疗有效量的本文描述的分离和纯化的细胞外囊泡。

在某实施方案中，本文描述了一种分离和纯化的细胞外囊泡，所述细胞外囊泡包含升高的水平的以下蛋白中的任何一种或更多种或其部分：肌球蛋白-1(myh1)、肌球蛋白-2(mth2)、肌球蛋白-7(myh-7)或组织因子途径抑制剂2(tfpi2)，其中升高的水平被与幼稚未刺激的间充质干细胞进行比较。在某实施方案中，分离和纯化的细胞外囊泡包含升高的水平的选自肌球蛋白-1(myh1)、肌球蛋白-2(mth2)、肌球蛋白-7(myh-7)或组织因子途径抑制剂2(tfpi2)的任何两种或更多种蛋白。在某实施方案中，分离和纯化的细胞外囊泡包含升高的水平的全部以下四种：肌球蛋白-1(myh1)、肌球蛋白-2(mth2)、肌球蛋白-7(myh-7)或组织因子途径抑制剂2(tfpi2)。在某实施方案中，分离和纯化的细胞外囊泡还包含选自药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体的非活性成分。在某实施方案中，分离和纯化的细胞外囊泡用于在治疗患有肿瘤或癌症的受试者中使用。在本文的某实施方案中，是一种治疗受试者中的癌症或肿瘤的方法，包括施用治疗有效量的本文描述的分离和纯化的细胞外囊泡。

在某些实施方案中，本文描述了一种用于从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的培养基，该培养基包含第一诱导剂和第二诱导剂，其中第一诱导剂为toll-样受体3(tlr3)配体，其中第二诱导剂为与第一诱导剂不同的toll-样受体配体、神经递质、神经递质样分子、不是促红细胞生成素的多肽或脂质。在某些实施方案中，第二诱导剂为组胺。在某些实施方案中，第二诱导剂为乙酰胆碱。在某些实施方案中，第二诱导剂为谷氨酸。在某些实施方案中，第二诱导剂为去甲肾上腺素。在某些实施方案中，第二诱导剂为肾上腺素。在某些实施方案中，第二诱导剂为血清素。在某些实施方案中，第二诱导剂为褪黑激素。在某些实施方案中，第二诱导剂为脂氧素a4。在某些实施方案中，第二诱导剂为α-黑素细胞刺激素。在某些实施方案中，第二诱导剂为白三烯b4。在某些实施方案中，tlr3配体为poly(i:c)。在某些实施方案中，tlr3配体为poly(a:u)。在某些实施方案中，培养基还包含第三诱导剂，其中第三诱导剂包含低氧条件、低氧模拟物或促红细胞生成素。在某些实施方案中，低氧模拟物为氯化钴。在某些实施方案中，低氧模拟物为去铁胺。在某些实施方案中，培养基还包含第四诱导剂，其中第四诱导剂不同于第三诱导剂并且包含低氧条件、低氧模拟物或促红细胞生成素。在某些实施方案中，低氧模拟物为氯化钴。在某些实施方案中，低氧模拟物为去铁胺。在某些实施方案中，培养基还包含多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为未刺激的多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为刺激的多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为诱导的多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为成体多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为人多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为间充质干细胞群。在某些实施方案中，培养基不包含人或动物来源的血清。在某些实施方案中，培养基能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过20倍的cxcl9mrna诱导。在某些实施方案中，培养基能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过30倍的cxcl9mrna诱导。在某些实施方案中，培养基能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过50倍的cxcl9mrna诱导。在某些实施方案中，该培养基用于在治疗类风湿性关节炎中使用。在某些实施方案中，该培养基用于在治疗糖尿病性神经病中使用。在某些实施方案中，该培养基用于在治疗克罗恩病(crohn’sdisease)中使用。在某些实施方案中，该培养基用于在治疗急性肺损伤中使用。在某些实施方案中，该培养基用于在治疗多发性硬化中使用。在某些实施方案中，该培养基用于在治疗急性视神经炎中使用。在某些实施方案中，该培养基用于在治疗克拉伯病(krabbedisease)中使用。

在某些实施方案中，本文描述了一种用于从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的培养基，该培养基包含第一诱导剂和第二诱导剂，其中第一诱导剂为toll-样受体4(tlr4)配体，其中第二诱导剂为与第一诱导剂的不同toll-样受体配体、神经递质、神经递质样分子、不是促红细胞生成素的多肽或脂质。在某些实施方案中，第二诱导剂为组胺。在某些实施方案中，第二诱导剂为乙酰胆碱。在某些实施方案中，第二诱导剂为谷氨酸。在某些实施方案中，第二诱导剂为去甲肾上腺素。在某些实施方案中，第二诱导剂为肾上腺素。在某些实施方案中，第二诱导剂为血清素。在某些实施方案中，第二诱导剂为褪黑激素。在某些实施方案中，第二诱导剂为脂氧素a4。在某些实施方案中，第二诱导剂为α-黑素细胞刺激素。在某些实施方案中，第二诱导剂为白三烯b4。在某些实施方案中，tlr4配体为lps。在某些实施方案中，tlr4配体为4-磷酸氨基烷基氨基葡萄糖苷。在某些实施方案中，培养基还包含第三诱导剂，其中第三诱导剂包括低氧条件、低氧模拟物或促红细胞生成素。在某些实施方案中，低氧模拟物为氯化钴。在某些实施方案中，低氧模拟物为去铁胺。在某些实施方案中，培养基还包含第四诱导剂，其中第四诱导剂不同于第三诱导剂并且包含低氧条件、低氧模拟物或促红细胞生成素。在某些实施方案中，低氧模拟物为氯化钴。在某些实施方案中，低氧模拟物为去铁胺。在某些实施方案中，培养基还包含多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为未刺激的多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为被刺激的多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为诱导的多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为成体多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为人多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为间充质干细胞群。在某些实施方案中，培养基不包含人或动物来源的血清。在某些实施方案中，该培养基能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过20倍的tnfsf10mrna诱导。在某些实施方案中，该培养基能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过30倍的tnfsf10mrna诱导。在某些实施方案中，该培养基能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过50倍的tnfsf10mrna诱导。在某些实施方案中，该培养基用于治疗卵巢癌。在某些实施方案中，该培养基用于治疗乳腺癌。

在某些实施方案中，本文描述了一种从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的方法，包括：使未刺激的多能干细胞群与包含第一诱导剂和第二诱导剂的培养基接触，其中第一诱导剂为toll-样受体3(tlr3)配体，其中第二诱导剂为神经递质、不是促红细胞生成素的多肽或脂质。在某些实施方案中，第二诱导剂为组胺。在某些实施方案中，第二诱导剂为乙酰胆碱。在某些实施方案中，第二诱导剂为谷氨酸。在某些实施方案中，第二诱导剂为去甲肾上腺素。在某些实施方案中，第二诱导剂为肾上腺素。在某些实施方案中，第二诱导剂为血清素。在某些实施方案中，第二诱导剂为褪黑激素。在某些实施方案中，第二诱导剂为脂氧素a4。在某些实施方案中，第二诱导剂为α-黑素细胞刺激素。在某些实施方案中，第二诱导剂为白三烯b4。在某些实施方案中，tlr3配体为poly(i:c)。在某些实施方案中，tlr3配体为poly(a:u)。在某些实施方案中，培养基还包含第三诱导剂，其中第三诱导剂包含低氧条件、低氧模拟物、促红细胞生成素或其任何组合。在某些实施方案中，低氧模拟物为氯化钴。在某些实施方案中，低氧模拟物为去铁胺。在某些实施方案中，培养基还包含第四诱导剂，其中第四诱导剂不同于第三诱导剂并且包含低氧条件、低氧模拟物、促红细胞生成素或其任何组合。在某些实施方案中，低氧模拟物为氯化钴。在某些实施方案中，低氧模拟物为去铁胺。在某些实施方案中，多能干细胞群为诱导的多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为成体多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为人多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为间充质干细胞群。在某些实施方案中，培养基不包含人或动物来源的血清。在某些实施方案中，该方法能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过20倍的cxcl9mrna诱导。在某些实施方案中，该方法能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过30倍的cxcl9mrna诱导。在某些实施方案中，该方法能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过50倍的cxcl9mrna诱导。在某些实施方案中，本文描述了一种通过前述方法产生的极化多能干细胞群。在某些实施方案中，通过前述方法产生的极化多能干细胞群用于在治疗类风湿性关节炎中使用。在某些实施方案中，通过前述方法产生的极化多能干细胞群用于在治疗糖尿病性神经病中使用。在某些实施方案中，通过前述方法产生的极化多能干细胞群用于在治疗克罗恩病中使用。在某些实施方案中，通过前述方法产生的极化多能干细胞群用于在治疗急性肺损伤中使用。在某些实施方案中，通过前述方法产生的极化多能干细胞群用于在治疗多发性硬化中使用。在某些实施方案中，通过前述方法产生的极化多能干细胞群用于在治疗急性视神经炎中使用。在某些实施方案中，通过前述方法产生的极化多能干细胞群用于治疗在克拉伯病中使用。

在某些实施方案中，本文描述了一种从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的方法，包括：使未刺激的多能干细胞群与包含第一诱导剂和第二诱导剂的培养基接触，其中第一诱导剂为toll-样受体4(tlr4)配体，其中第二诱导剂为神经递质、不是促红细胞生成素的多肽或脂质。在某些实施方案中，第二诱导剂为组胺。在某些实施方案中，第二诱导剂为乙酰胆碱。在某些实施方案中，第二诱导剂为谷氨酸。在某些实施方案中，第二诱导剂为去甲肾上腺素。在某些实施方案中，第二诱导剂为肾上腺素。在某些实施方案中，第二诱导剂为血清素。在某些实施方案中，第二诱导剂为褪黑激素。在某些实施方案中，第二诱导剂为脂氧素a4。在某些实施方案中，第二诱导剂为α-黑素细胞刺激素。在某些实施方案中，第二诱导剂为白三烯b4。在某些实施方案中，tlr4配体为lps。在某些实施方案中，tlr4配体为4-磷酸氨基烷基氨基葡萄糖苷。在某些实施方案中，培养基还包含第三诱导剂，其中第三诱导剂包含低氧条件、低氧模拟物、促红细胞生成素或其任何组合。在某些实施方案中，低氧模拟物为氯化钴。在某些实施方案中，低氧模拟物为去铁胺。在某些实施方案中，培养基还包含第四诱导剂，其中第四诱导剂不同于第三诱导剂并且包含低氧条件、低氧模拟物、促红细胞生成素或其任何组合。在某些实施方案中，低氧模拟物为氯化钴。在某些实施方案中，低氧模拟物为去铁胺。在某些实施方案中，多能干细胞群为诱导的多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为成体多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为人多能干细胞群。在某些实施方案中，多能干细胞群为间充质干细胞群。在某些实施方案中，培养基不包含人或动物来源的血清。在某些实施方案中，该方法能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过20倍的tnfsf10mrna诱导。在某些实施方案中，该方法能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过30倍的tnfsf10mrna诱导。在某些实施方案中，该方法能够产生与未刺激的多能干细胞相比超过50倍的tnfsf10mrna诱导。在某些实施方案中，本文描述了一种通过前述方法产生的极化多能干细胞群。在某些实施方案中，通过前述方法产生的极化多能干细胞群用于在治疗卵巢癌中使用。在某些实施方案中，通过前述方法产生的极化多能干细胞群用于在治疗乳腺癌中使用。

在某些实施方案中，本文描述了一种已从被刺激的多能干细胞群被分泌的因子。在某些实施方案中，该因子已从与被刺激的多能干细胞接触的培养基中分离。在某些实施方案中，分离方法包括以下中的任何一个或更多个：离心、提取、沉淀、过滤和冷冻。在某些实施方案中，该因子为促炎性的。在某些实施方案中，该因子为抗炎性的。在某些实施方案中，该因子为细胞外囊泡。在某些实施方案中，该因子为细胞因子。在某些实施方案中，该因子为趋化因子。在某些实施方案中，该因子为mirna。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群已被toll-样受体3(tlr3)配体刺激。在某些实施方案中，tlr3配体为poly(i:c)。在某些实施方案中，tlr3配体为poly(a:u)。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群已被toll-样受体4(tlr4)配体刺激。在某些实施方案中，tlr4配体为脂多糖。在某些实施方案中，tlr4配体为4-磷酸氨基烷基氨基葡萄糖苷。在某些实施方案中，诱导剂为低氧条件或低氧模拟物。在某些实施方案中，低氧条件为低氧模拟物。在某些实施方案中，低氧模拟物为氯化钴。在某些实施方案中，低氧模拟物为去铁胺。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群已被促红细胞生成素刺激。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群已被组胺刺激。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群已被乙酰胆碱刺激。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群已被谷氨酸刺激。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群已被肾上腺素刺激。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群已被血清素刺激。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群已被脂氧素a4刺激。在某些实施方案中，被刺激的多能细胞群已被α-黑素细胞刺激素刺激。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群已被白三烯b4刺激。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群已在不存在人或动物来源的血清的情况下被刺激。在某些实施方案中，被刺激的多能细胞群为诱导的多能干细胞群。在某些实施方案中，被刺激的多能细胞群为成体多能干细胞群。在某些实施方案中，被刺激的多能细胞群为人多能干细胞群。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞群为间充质干细胞群。在某些实施方案中，被刺激的多能细胞群为1型间充质干细胞群。在某些实施方案中，，1型间充质干细胞群以比未刺激的间充质干细胞群高的水平表达tnfsf10mrna。在某些实施方案中，被刺激的多能细胞群为2型间充质干细胞群。在某些实施方案中，2型间充质干细胞群以比未刺激的间充质干细胞群高的水平表达cxcl9mrna。在某些实施方案中，该因子用于在治疗类风湿性关节炎中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗糖尿病性神经病中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗克罗恩病中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗急性肺损伤中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗多发性硬化中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗急性视神经炎中使用。在某些实施方案中，该因子用于在用于治疗克拉伯病的治疗方法中使用。

在某些实施方案中，本文描述了一种从已用包含tlr4配体的培养基刺激的间充质干细胞群分泌的细胞外囊泡。在某些实施方案中，培养基包含促红细胞生成素和低氧条件或低氧模拟物。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗卵巢癌中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗乳腺癌中使用。

在某些实施方案中，本文描述了一种从已用包含tlr3配体的培养基刺激的间充质干细胞群分泌的细胞外囊泡。在某些实施方案中，培养基包含促红细胞生成素和低氧条件或低氧模拟物。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗乳腺癌中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗类风湿性关节炎中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于治疗在糖尿病性神经病中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗克罗恩病中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗急性肺损伤中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗多发性硬化中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗急性视神经炎中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗克拉伯病中使用。

在某些实施方案中，本文描述了一种用于产生从被刺激的多能干细胞群分泌的因子的方法，包括：使未刺激的多能干细胞群与包含诱导剂的培养基接触；将培养基与未刺激的多能干细胞群一起孵育；以及收获培养基；其中与培养基一起孵育从未刺激的多能干细胞群产生被刺激的多能干细胞群，并且引起至少一种因子从被刺激的多能干细胞群分泌。在某些实施方案中，该方法包括从培养基中分离因子。在某些实施方案中，分离包括以下中的任何一个或更多个：离心、提取、沉淀、过滤和冷冻。在某些实施方案中，该因子为促炎性的。在某些实施方案中，该因子为抗炎性的。在某些实施方案中，该因子为细胞外囊泡。在某些实施方案中，该因子为细胞因子。在某些实施方案中，该因子为趋化因子。在某些实施方案中，该因子为mirna。在某些实施方案中，诱导剂为toll-样受体3(tlr3)配体。在某些实施方案中，tlr3配体为poly(i:c)。在某些实施方案中，tlr3配体为poly(a:u)。在某些实施方案中，诱导剂为toll-样受体4(tlr4)配体。在某些实施方案中，tlr4配体为脂多糖。在某些实施方案中，tlr4配体为4-磷酸氨基烷基氨基葡萄糖苷。在某些实施方案中，诱导剂为低氧条件或低氧模拟物。在某些实施方案中，低氧模拟物为氯化钴。在某些实施方案中，低氧模拟物为去铁胺。在某些实施方案中，诱导剂为促红细胞生成素。在某些实施方案中，诱导剂为组胺。在某些实施方案中，诱导剂为乙酰胆碱。在某些实施方案中，诱导剂为谷氨酸。在某些实施方案中，诱导剂为肾上腺素。在某些实施方案中，诱导剂为血清素。在某些实施方案中，诱导剂为脂氧素a4。在某些实施方案中，诱导剂为α-黑素细胞刺激素。在某些实施方案中，诱导剂为白三烯b4。在某些实施方案中，培养基不含人或动物来源的血清。在某些实施方案中，被刺激的多能细胞群为诱导的多能干细胞群。在某些实施方案中，被刺激的多能细胞群为成体多能干细胞群。在某些实施方案中，被刺激的多能细胞群为人多能干细胞群。在某些实施方案中，被刺激的多能干细胞为间充质干细胞群。在某些实施方案中，被刺激的多能细胞为1型间充质干细胞群。在某些实施方案中，1型间充质干细胞群以比未刺激的间充质干细胞群高的水平表达tnfsf10mrna。在某些实施方案中，被刺激的多能细胞群为2型间充质干细胞群。在某些实施方案中，2型间充质干细胞群以比未刺激的间充质干细胞群高的水平表达cxcl9。在某些实施方案中，该因子用于在治疗卵巢癌中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗乳腺癌中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗类风湿性关节炎中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗糖尿病性神经病中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗克罗恩病中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗急性肺损伤中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗多发性硬化中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗急性视神经炎中使用。在某些实施方案中，该因子用于在治疗克拉伯病中使用。

在某些实施方案中，本文描述了一种用于产生从间充质干细胞群分泌的细胞外囊泡的方法，包括：使未刺激的间充质干细胞群与包含tlr4配体的培养基接触；将培养基与未刺激的间充质干细胞群一起孵育；以及收获培养基；其中与培养基一起孵育从未刺激的间充质干细胞群产生被刺激的间充质干细胞群，并且引起从被刺激的间充质干细胞群分泌至少一种细胞外囊泡。在某些实施方案中，培养基包含促红细胞生成素和低氧条件或低氧模拟物。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗卵巢癌中使用。

在某些实施方案中，本文描述了一种用于产生从间充质干细胞群分泌的细胞外囊泡的方法，包括：使未刺激的间充质干细胞群与包含tlr3配体的培养基接触；将培养基与未刺激的间充质干细胞群一起孵育；以及收获培养基；其中与培养基一起孵育从未刺激的间充质干细胞群产生被刺激的间充质干细胞群，并且引起从被刺激的间充质干细胞群分泌至少一种细胞外囊泡。在某些实施方案中，培养基包含促红细胞生成素和低氧条件或低氧模拟物。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗乳腺癌中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗类风湿性关节炎中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗糖尿病性神经病中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗克罗恩病中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗急性肺损伤中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗多发性硬化中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗急性视神经炎中使用。在某些实施方案中，细胞外囊泡用于在治疗克拉伯病中使用。

附图简述

图1示出了myd88-依赖性toll-样受体途径。

图2示出了本文描述的使用细胞外囊泡和分泌因子的治疗方法的示意性流程图。

图3a和图3b示出了间充质干细胞响应于用诱导剂与tlr3的组合的刺激而诱导cxcl9mrna表达。

图4a和图4b示出了间充质干细胞响应于用诱导剂与tlr4的组合的刺激而诱导tnfsf10(也称为trail)mrna表达。

图5a和图5b示出了由tlr4(图5a)或tlr3(图5b)诱导的间充质干细胞中mirna的诱导或降低。

发明详述

本文描述的方法可用于诱导多能干细胞以具备促炎性特性或抗炎性特性。toll-样受体(tlr)参与(engagement)(tlr4用于促炎性特性；tlr3用于抗炎性特性)和第二种剂的组合产生比单独使用tlr参与更强的表型。这些更强的表型(促炎性或抗炎性)在治疗上是有用的。例如，促炎性多能干细胞在对抗赘生物(诸如，肿瘤或癌症)中具有效用；抗炎性多能干细胞在对抗炎性紊乱或自身免疫性紊乱中具有效用。

在某些实施方案中，本文描述了一种用于从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的培养基，该培养基包含第一诱导剂和第二诱导剂，其中第一诱导剂为toll-样受体3(tlr3)配体，其中第二诱导剂为与第一诱导剂的不同toll-样受体配体、神经递质、神经递质样分子、不是促红细胞生成素的多肽或脂质。在某些实施方案中，本文描述了一种用于从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的培养基，该培养基包含第一诱导剂和第二诱导剂，其中第一诱导剂为toll-样受体4(tlr4)配体，其中第二诱导剂为与第一诱导剂的不同toll-样受体配体、神经递质、神经递质样分子、不是促红细胞生成素的多肽或脂质。在某些实施方案中，本文描述了一种从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的方法，包括：使未刺激的多能干细胞群与包含第一诱导剂和第二诱导剂的培养基接触，其中第一诱导剂为toll-样受体3(tlr3)配体，其中第二诱导剂为神经递质、不是促红细胞生成素的多肽或脂质。在某些实施方案中，本文描述了一种从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的方法，包括：使未刺激的多能干细胞群与包含第一诱导剂和第二诱导剂的培养基接触，其中第一诱导剂为toll-样受体4(tlr4)配体，其中第二诱导剂为神经递质、不是促红细胞生成素的多肽或脂质。在某些实施方案中，本文描述了一种已从被刺激的多能干细胞群分泌的因子。在某些实施方案中，本文描述了一种从已用包含tlr4配体的培养基刺激的间充质干细胞群分泌的细胞外囊泡。在某些实施方案中，本文描述了一种从已用包含tlr3配体的培养基刺激的间充质干细胞群分泌的细胞外囊泡。在某些实施方案中，培养基包含促红细胞生成素和低氧条件或低氧模拟物。在某些实施方案中，本文描述了一种用于产生从被刺激的多能干细胞群分泌的因子的方法，包括：使未刺激的多能干细胞群与包含诱导剂的培养基接触；将培养基与未刺激的多能干细胞群一起孵育；以及收获培养基；其中与培养基一起孵育从未刺激的多能干细胞群产生被刺激的多能干细胞群，并且引起从被刺激的多能干细胞群分泌至少一种因子。在某些实施方案中，本文描述了一种用于产生从间充质干细胞群分泌的细胞外囊泡的方法，包括：使未刺激的间充质干细胞群与包含tlr4配体的培养基接触；将培养基与未刺激的间充质干细胞群一起孵育；以及收获培养基；其中与培养基一起孵育从未刺激的间充质干细胞群产生被刺激的间充质干细胞群，并且引起从被刺激的间充质干细胞群分泌至少一种细胞外囊泡。在某些实施方案中，本文描述了一种用于产生从间充质干细胞群分泌的细胞外囊泡的方法，包括：使未刺激的间充质干细胞群与包含tlr3配体的培养基接触；将培养基与未刺激的间充质干细胞群一起孵育；以及收获培养基；其中与培养基一起孵育从未刺激的间充质干细胞群产生被刺激的间充质干细胞群，并且引起从刺激的间充质干细胞群分泌至少一种细胞外囊泡。在某些实施方案中，培养基包含促红细胞生成素和低氧条件或低氧模拟物。

某些定义

除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。如在本说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一(a)”、“一个(an)”和“所述(the)”包括复数引用，除非上下文另有明确说明。除非另有说明，否则本文对“或”的任何引用旨在涵盖“和/或”。

如本文所用，除非另有说明，术语“约”是指接近所述量的量，例如变化10％、5％或1％。

术语“多能干细胞”是指能够产生多种不同类型细胞的细胞。术语“间充质干细胞”是指最初源自间充质的干细胞。该术语是指能够分化成成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞或肌细胞中的至少两种或更多种的细胞。间充质干细胞(msc)分离自任何类型的成体组织。通常，间充质干细胞分离自骨髓、脂肪组织、脐带或外周血。在一个优选的方面，msc从骨髓或从获自脂肪组织的脂肪抽吸物(lipoaspirate)中获得。术语“多能(multipotent)”或“多能性(pluripotent)”还涵盖诱导的多能干细胞或诱导的多能性干细胞，或已经使用任何化学或遗传手段诱导至多能性阶段的细胞。在某些实施方案中，本公开内容的多能干细胞或多能性干细胞为间充质干细胞。

术语“生物活性”是指转录；翻译；翻译后蛋白修饰，诸如磷酸化、乙酰化或降解；分泌；细胞分裂；细胞凋亡；或细胞运动中的一种或更多种。诱导生物活性的物质将增加或减少这些生物活性中的任一种。

关于本文描述的多能干细胞和间充质干细胞的术语“群”是指分子上相同或高度相似的多个细胞。群可从人类组织中分离或者在培养物中培养和扩大。本文提供的任何群可“主要由”所述细胞，诸如多能干细胞或间充质干细胞组成。如本文所用，“主要由......组成”是指从细胞成分的角度来看细胞群基本上为纯的。例如，细胞可大于约80％、90％、95％、97％、98％或99％纯。

术语“细胞治疗”或“基于细胞的治疗”意指移植人或动物细胞以预防、治疗或改善与疾病或紊乱相关的一种或更多种症状，例如但不限于替换或修复受损组织或器官、调节免疫反应以及减少炎性症状和癌症。细胞治疗可通过施用治疗有效量的从诱导培养基中收获的干细胞-多能干细胞或间充质来实现。

术语“受试者”是指动物，优选包括非灵长类动物(例如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠或小鼠)或灵长类动物(例如，猴子或人)的哺乳动物。在某些实施方案中，受试者为人。

术语“低氧条件”或“低氧”是指在与约11％的正常生理氧水平相比氧被耗尽的条件下培养细胞或培养基。

当用于直接提及患者或受试者时，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”和“治疗(treating)”意指改善与紊乱相关的一种或更多种症状，该紊乱包括但不限于任何癌症、任何肿瘤或赘生物、炎性紊乱、自身免疫性疾病或免疫介导的疾病，包括移植器官和组织的排斥，其中改善起因于将本发明产生的免疫调节细胞或包含本发明产生的免疫调节细胞的药物组合物施用于需要此类治疗的受试者。

术语“未刺激的”或“幼稚的”是指通过本公开内容的方法未经处理、未经极化或未经诱导的细胞群。新鲜或冷冻的原代分离的间充质干细胞被认为是未刺激的或幼稚的。先前用缺乏toll-样受体配体、促红细胞生成素、低氧或低氧模拟物中的至少一种的化合物或组合物处理的细胞被认为是未刺激的。

术语“自身免疫性紊乱”是指受试者中的状况，所述状况的特征在于受试者对其自身细胞、组织和/或器官的免疫反应引起的细胞、组织和/或器官损伤。

术语“炎性疾病”是指以免疫细胞活化、细胞因子、趋化因子或引起免疫细胞活化或募集的其他因子的分泌的增加为特征的状况。

术语“细胞外囊泡”是指存在于真核生物流体(eukaryoticfluid)中的细胞衍生的囊泡，所述真核生物流体包括血液、淋巴、尿液、唾液和细胞培养物的条件培养基。这些细胞外囊泡源自于细胞内体和质膜，并且可包含dna、rna(包括mirna)、蛋白、多肽、脂质和小分子。细胞外囊泡为细胞衍生的小囊泡，包括外来体、微泡和凋亡小体。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含外来体、由外来体组成或基本上由外来体组成。

在某些实施方案中，本文公开的主题的方法和组合物用于治疗疾病。在某些实施方案中，本文公开的主题的方法和组合物用于治疗人类疾病。在某些实施方案中，本文公开的主题的方法和组合物用于治疗兽医疾病。在某些实施方案中，本文公开的主题的方法和组合物用于治疗非人动物。在某些实施方案中，非人动物为狗、猫、马、牛、猪、绵羊或山羊。

培养基

在某些实施方案中，本文描述的培养基用于培养人或其他动物来源的细胞、干细胞、多能干细胞和间充质干细胞。在某些实施方案中，本文描述的培养基用于在人或其他动物来源的细胞、干细胞、多能干细胞或间充质干细胞中产生不同的表型。在某些实施方案中，除了本文具体描述的组分之外，本文描述的培养基还包含用于细胞培养的标准培养基组分。例如，在某些非限制性实施方案中，培养基包含维生素、矿物质、盐、糖、氨基酸、丙酮酸盐、激素、人血清、胎牛血清(fetalbovineserum)、小牛血清(fetalcalfserum)、脂质、蛋白、染料、ph缓冲剂及其组合。在某些实施方案中，培养基为浓缩培养补充物。在某些实施方案中，培养基浓缩至少2倍。在某些实施方案中，培养基浓缩至少10倍。在某些实施方案中，培养基浓缩至少100倍。通过非限制性举例的方式，在某些实施方案中，培养基为干粉制剂，通过添加任何合适的水性溶剂诸如水该干粉制剂被再水化。在某些实施方案中，培养基为无菌的。在某些实施方案中，将培养基预先包装在任何合适的容器中提供。在某些实施方案中，将培养基无菌过滤。通过非限制性举例的方式，在某些实施方案中，培养基可含有标准培养基的制剂，诸如mem、dmem或rpmi。在某些实施方案中，培养基不包含人或其他动物来源的血清。

tlr4配体

在某些实施方案中，本文公开了一种用于从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的培养基，该培养基包含第一诱导剂和第二诱导剂，其中第一诱导剂包含toll-样受体(tlr)配体，并且第二诱导剂包含具有生物活性的分子。在某些实施方案中，tlr配体包含toll-样受体4(tlr4)配体。在某些实施方案中，tlr4配体包含脂多糖。在某些实施方案中，tlr4配体包含4-磷酸氨基烷基氨基葡萄糖苷。在某些实施方案中，tlr4配体为从约10pg/ml至约10μg/ml、从约100pg/ml至约10μg/ml、从约1ng/ml至约1μg/ml、从约5ng/ml至约1μg/ml、从约10ng/ml至约1μg/ml、从约100ng/ml至约1μg/ml、从约5ng/ml至约50ng/ml或从约5ng/ml至约25ng/ml的浓度。在某些实施方案中，tlr4配体以至少10pg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以至少100pg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以至少1ng/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以至少10ng/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以至少100ng/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以至少1μg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以至少10μg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以小于1g/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以小于100mg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以小于10mg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以小于1mg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以小于500μg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以小于200μg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr4配体以小于100μg/ml的浓度存在。

tlr3配体

在某些实施方案中，本文公开了一种用于从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的培养基，该培养基包含第一诱导剂和第二诱导剂，其中第一诱导剂包含toll-样受体(tlr)配体，并且第二诱导剂包含具有生物活性的分子。在某些实施方案中，tlr配体包含toll-样受体3(tlr3)配体。在某些实施方案中，tlr3配体包含poly(i:c)。在某些实施方案中，tlr3配体包含poly(a:u)。在某些实施方案中，tlr3配体为从约10pg/ml至约100μg/ml、从约100pg/ml至约100μg/ml、从约1ng/ml至约100μg/ml、从约5ng/ml至约100μg/ml、从约10ng/ml至约100μg/ml、从约100ng/ml至约100μg/ml、从约0.1μg/ml至约50μg/ml、从约0.1μg/ml至约10μg/ml、从约0.25μg/ml至约7.5μg/ml、从约0.5μg/ml至约5μg/ml、从约1μg/ml至约2.5μg/ml或从约1μg/ml至约1.5μg/ml的浓度。在某些实施方案中，tlr3配体以至少10pg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体可以至少100pg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以至少1ng/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以至少10ng/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以至少100ng/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以至少1μg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以至少10μg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以小于1g/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以小于100mg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以小于10mg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以小于1mg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以小于500μg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以小于200μg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，tlr3配体以小于100μg/ml的浓度存在。

另外的剂

在某些实施方案中，本文描述了一种用于从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的培养基，该培养基包含第一诱导剂和第二诱导剂，其中第一诱导剂包含toll-样受体(tlr)配体，并且第二诱导剂包含具有生物活性的分子。在某些实施方案中，参照图1，第二诱导剂包含tlr信号途径的抑制剂或活化剂。在某些实施方案中，tlr配体包含toll-样受体3(tlr3)配体。在某些实施方案中，tlr配体包含toll-样受体4(tlr4)配体。在某些实施方案中，第二诱导剂包含具有生物活性的分子。在某些实施方案中，第二诱导剂为与第一诱导剂不同的toll-样受体配体、神经递质、神经递质样分子、小分子、多肽或脂质。在某些实施方案中，第二诱导剂选自：乙酰胆碱、α-黑素细胞刺激素、褪黑激素、血清素、谷氨酸、去甲肾上腺素、组胺、脂氧素a4、白三烯b4及其任何组合。在某些实施方案中，第二诱导剂为组胺。在某些实施方案中，第二诱导剂为乙酰胆碱。在某些实施方案中，第二诱导剂为α-黑素细胞刺激素。在某些实施方案中，第二诱导剂为谷氨酸。在某些实施方案中，第二诱导剂为去甲肾上腺素。在某些实施方案中，第二诱导剂为肾上腺素。在某些实施方案中，第二诱导剂为血清素。在某些实施方案中，第二诱导剂为褪黑激素。在某些实施方案中，第二诱导剂为脂氧素a4。在某些实施方案中，第二诱导剂为脂氧素b4。在某些实施方案中，第二诱导剂为白三烯b4。在某些实施方案中，第二诱导剂不是促红细胞生成素。在某些实施方案中，第二诱导剂不是低氧条件或低氧模拟物。在某些实施方案中，第二诱导剂不是氯化钴。在某些实施方案中，第二诱导剂不是去铁胺。在某些实施方案中，组胺、乙酰胆碱、谷氨酸、去甲肾上腺素、肾上腺素、血清素、褪黑激素、脂氧素a4、α-黑素细胞刺激素(α-msh)和白三烯b4均可用于增加或加强msc2诱导。在某些实施方案中，组胺、乙酰胆碱、谷氨酸、去甲肾上腺素、肾上腺素、血清素、褪黑激素、脂氧素a4、α-黑素细胞刺激素(α-msh)和白三烯b4均可用于增加或加强msc1诱导。在某些实施方案中，乙酰胆碱、谷氨酸和脂氧素a4可用于增加或加强msc2诱导。在某些实施方案中，血清素、褪黑激素、脂氧素a4和白三烯b4可用于增加或加强msc1诱导。

乙酰胆碱(ach)

在某些实施方案中，第二诱导剂包含乙酰胆碱。在某些实施方案中，ach的浓度为从约1纳摩尔至约100微摩尔。在某些实施方案中，ach的浓度为至少1纳摩尔。在某些实施方案中，ach的浓度为至少10纳摩尔。在某些实施方案中，ach的浓度为至少100纳摩尔。在某些实施方案中，ach的浓度为至少1微摩尔。在某些实施方案中，ach的浓度为至少10微摩尔。在某些实施方案中，ach的浓度小于100微摩尔。在某些实施方案中，ach的浓度小于10微摩尔。在某些实施方案中，ach的浓度小于1微摩尔。在某些实施方案中，ach的浓度小于100纳摩尔。在某些实施方案中，ach的浓度小于10纳摩尔。

α-黑素细胞刺激素(msh)

在某些实施方案中，第二诱导剂包含α-黑素细胞刺激素(msh)。在某些实施方案中，msh的浓度为从约100皮摩尔至约100纳摩尔。在某些实施方案中，msh的浓度为至少100皮摩尔。在某些实施方案中，msh的浓度为至少1纳摩尔。在某些实施方案中，msh的浓度为至少10纳摩尔。在某些实施方案中，msh的浓度小于100纳摩尔。在某些实施方案中，msh的浓度小于10纳摩尔。在某些实施方案中，msh的浓度小于1纳摩尔。

褪黑激素(mel)

在某些实施方案中，第二诱导剂包含褪黑激素(mel)。在某些实施方案中，mel的浓度为从约1纳摩尔至约100微摩尔。在某些实施方案中，mel的浓度为至少1纳摩尔。在某些实施方案中，mel的浓度为至少10纳摩尔。在某些实施方案中，mel的浓度为至少100纳摩尔。在某些实施方案中，mel的浓度为至少1微摩尔。在某些实施方案中，mel的浓度为至少10微摩尔。在某些实施方案中，mel的浓度小于100微摩尔。在某些实施方案中，mel的浓度小于10微摩尔。在某些实施方案中，mel的浓度小于1微摩尔。在某些实施方案中，mel的浓度小于100纳摩尔。在某些实施方案中，mel的浓度小于10纳摩尔。

血清素(5-ht)

在某些实施方案中，第二诱导剂包含血清素(5-ht)。在某些实施方案中，5-ht的浓度为从约100皮摩尔至约100微摩尔。在某些实施方案中，5-ht的浓度为至少100皮摩尔。在某些实施方案中，5-ht的浓度为至少1纳摩尔。在某些实施方案中，mel的浓度为至少10纳摩尔。在某些实施方案中，5-ht的浓度为至少100纳摩尔。在某些实施方案中，5-ht的浓度为至少1微摩尔。在某些实施方案中，5-ht的浓度为至少10微摩尔。在某些实施方案中，5-ht的浓度小于100微摩尔。在某些实施方案中，5-ht的浓度小于10微摩尔。在某些实施方案中，5-ht的浓度小于1微摩尔。在某些实施方案中，5-ht的浓度小于100纳摩尔。在某些实施方案中，5-ht的浓度小于10纳摩尔。在某些实施方案中，5-ht的浓度小于1纳摩尔。

谷氨酸(glu)

在某些实施方案中，第二诱导剂包含谷氨酸(glu)。在某些实施方案中，glu的浓度为从约10纳摩尔至约1毫摩尔。在某些实施方案中，glu的浓度为至少10纳摩尔。在某些实施方案中，glu的浓度为至少100纳摩尔。在某些实施方案中，glu的浓度为至少1微摩尔。在某些实施方案中，glu的浓度为至少10微摩尔。在某些实施方案中，glu的浓度小于100微摩尔。在某些实施方案中，glu的浓度小于1毫摩尔。在某些实施方案中，glu的浓度小于100微摩尔。在某些实施方案中，glu的浓度小于10微摩尔。在某些实施方案中，glu的浓度小于1微摩尔。在某些实施方案中，glu的浓度小于100纳摩尔。

去甲肾上腺素(nepi)

在某些实施方案中，第二诱导剂包含去甲肾上腺素(nepi)。在某些实施方案中，nepi的浓度为从约100皮摩尔至约100纳摩尔。在某些实施方案中，nepi的浓度为至少100皮摩尔。在某些实施方案中，nepi的浓度为至少1纳摩尔。在某些实施方案中，nepi的浓度为至少10纳摩尔。在某些实施方案中，nepi的浓度小于100纳摩尔。在某些实施方案中，nepi的浓度小于10纳摩尔。在某些实施方案中，nepi的浓度小于1纳摩尔。

组胺(his)

在某些实施方案中，第二诱导剂包含组胺(his)。在某些实施方案中，his的浓度为从约10纳摩尔至约1毫摩尔。在某些实施方案中，his的浓度为至少10纳摩尔。在某些实施方案中，his的浓度为至少100纳摩尔。在某些实施方案中，his的浓度为至少1微摩尔。在某些实施方案中，his的浓度为至少10微摩尔。在某些实施方案中，his的浓度为至少100微摩尔。在某些实施方案中，his的浓度小于100微摩尔。在某些实施方案中，his的浓度小于1毫摩尔。在某些实施方案中，his的浓度小于100微摩尔。在某些实施方案中，his的浓度小于10微摩尔。在某些实施方案中，his的浓度小于1微摩尔。在某些实施方案中，his的浓度小于100纳摩尔。

脂氧素a4(lxa4)

在某些实施方案中，第二诱导剂包含脂氧素a4(lxa4)。在某些实施方案中，lxa4的浓度为从约100皮摩尔至约1毫摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度为至少100皮摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度为至少1纳摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度为至少10纳摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度为至少100纳摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度为至少1微摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度为至少10微摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度小于100微摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度小于1毫摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度小于100微摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度小于10微摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度小于1微摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度小于100纳摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度小于10纳摩尔。在某些实施方案中，lxa4的浓度小于1纳摩尔。

白三烯b4(ltb4)

在某些实施方案中，第二诱导剂包含白三烯b4(ltb4)。在某些实施方案中，ltb4的浓度为从约100皮摩尔至约1毫摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度为至少100皮摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度为至少1纳摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度为至少10纳摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度为至少100纳摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度为至少1微摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度为至少10微摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度小于100微摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度小于1毫摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度小于100微摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度小于10微摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度小于1微摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度小于100纳摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度小于10纳摩尔。在某些实施方案中，ltb4的浓度小于1纳摩尔。

低氧

在某些实施方案中，本文公开了一种用于从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的培养基，该培养基包含第一诱导剂和第二诱导剂，其中第一诱导剂包含toll-样受体(tlr)配体，并且第二诱导剂包含具有生物活性的分子。在某些实施方案中，具有生物活性的分子包含不同的toll-样受体配体、神经递质、神经递质样分子、非促红细胞生成素多肽或脂质。在某些实施方案中，具有生物活性的分子选自由以下组成的列表：组胺、乙酰胆碱、谷氨酸、去甲肾上腺素、肾上腺素、血清素、褪黑激素、脂氧素a4、α-黑素细胞刺激素(α-msh)和白三烯b4。在某些实施方案中，tlr配体包含toll-样受体3(tlr3)配体。在某些实施方案中，tlr配体包含toll-样受体4(tlr4)配体。在某些实施方案中，第二诱导剂选自：乙酰胆碱、α-黑素细胞刺激素、褪黑激素、血清素、谷氨酸、去甲肾上腺素、组胺、脂氧素a4、白三烯b4及其任何组合。在某些实施方案中，第三诱导剂为低氧条件或低氧模拟物。在某些实施方案中，第三诱导剂包含促红细胞生成素。

在某些实施方案中，本文描述的培养基包含低氧条件。在某些实施方案中，低氧条件包括在低氧环境或氧耗尽的环境中孵育。在某些实施方案中，低氧环境具有小于10％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有小于8％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有小于6％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有小于5％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有小于4％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有小于3％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有小于2.5％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有小于2.0％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有小于1.5％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有小于1.0％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有小于0.5％的氧。在某些实施方案中，低氧环境实际上具有0％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有从0.5％至3.0％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有从0.5％至2.5％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有从0.5％至2.0％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有从0.5％至1.5％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有从0.5％至1.0％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有从1.0％至2.0％的氧。在某些实施方案中，低氧环境具有从1.5％至2.0％的氧。

在某些实施方案中，本文描述的培养基包含低氧模拟物。在某些实施方案中，低氧模拟物包含氯化钴。在某些实施方案中，氯化钴以约50μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以约100μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以约200μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以约300μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以约400μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以约500μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以约600μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以约700μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以约800μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以约900μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以约1mm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以从约10μm至约1mm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以从约10μm至约800μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以从约10μm至约500μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以从约10μm至约400μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以从约10μm至约300μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以从约50μm至约300μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以从约100μm至约300μm的浓度存在。在某些实施方案中，氯化钴以从约150μm至约300μm的浓度存在。

在某些实施方案中，本文描述的培养基包含低氧模拟物。在某些实施方案中，低氧模拟物包含去铁胺。在某些实施方案中，去铁胺以约50μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以约200μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以约300μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以约400μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以约500μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以约600μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以约700μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以约800μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以约900μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以约1mm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以从约10μm至约1mm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以从约10μm至约800μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以从约10μm至约500μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以从约10μm至约400μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以从约10μm至约300μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以从约50μm至约300μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以从约100μm至约300μm的浓度存在。在某些实施方案中，去铁胺以从约150μm至约300μm的浓度存在。

在某些实施方案中，本文描述的培养基包含促红细胞生成素。在某些实施方案中，本发明的培养基包含重组促红细胞生成素。在某些实施方案中，本发明的培养基包含人重组促红细胞生成素。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量为从约0.1ng/ml至约1.0mg/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量为从约0.1ng/ml至约100ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量为从约0.1ng/ml至约50ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量为从约0.1ng/ml至约10ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量为从约0.1ng/ml至约1.0ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量为从约0.2ng/ml至约0.8ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量为从约0.3ng/ml至约0.6ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于10mg/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于5mg/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于1mg/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于100ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于30ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于10ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于5ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于4ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于1ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于0.8ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于1ng/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于5u/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于1u/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于0.5u/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于0.1u/ml。在某些实施方案中，促红细胞生成素的量小于0.05u/ml。

在某些实施方案中，本文公开了一种用于从未刺激的多能干细胞群产生免疫极化多能干细胞群的培养基，该培养基包含第一诱导剂和第二诱导剂，其中第一诱导剂包含toll-样受体(tlr)配体，并且第二诱导剂包含具有生物活性的分子。在某些实施方案中，tlr配体包含toll-样受体3(tlr3)配体。在某些实施方案中，tlr配体包含toll-样受体4(tlr4)配体。在某些实施方案中，第二诱导剂选自：乙酰胆碱、α-黑素细胞刺激素、褪黑激素、血清素、谷氨酸、去甲肾上腺素、组胺、脂氧素a4、白三烯b4及其任何组合。在某些实施方案中，培养基包含第三诱导剂。在某些实施方案中，第三诱导剂包含低氧条件或低氧模拟物。在某些实施方案中，第三诱导剂包含促红细胞生成素。在某些实施方案中，培养基包含第四诱导剂。在某些实施方案中，第四诱导剂包含促红细胞生成素。在某些实施方案中，第四诱导剂包含低氧条件或低氧模拟物。

多能干细胞

在某些实施方案中，本文公开了与多能干细胞一起使用的方法和培养基。在某些实施方案中，本文公开了与多能干细胞群一起使用的方法和培养基。在某些实施方案中，培养基包含一种或更多种多能干细胞。在某些实施方案中，培养基包含一种或更多种幼稚多能干细胞。在某些实施方案中，培养基包含一种或更多种未刺激的多能干细胞。在某些实施方案中，培养基包含一种或更多种被刺激的多能干细胞。在某些实施方案中，多能干细胞是人类来源的。在某些实施方案中，多能干细胞为原代人细胞。在某些实施方案中，多能干细胞是从血液中分离的。在某些实施方案中，多能干细胞是从脐带血中分离的。在某些实施方案中，多能干细胞是从胎盘中分离的。在某些实施方案中，多能干细胞是从牙髓中分离的。在某些实施方案中，多能干细胞是从经血中分离的。在某些实施方案中，多能干细胞是从胎儿中分离的。在某些实施方案中，多能干细胞是从脂肪抽吸物中分离的。在某些实施方案中，多能干细胞是从活组织检查物中分离的。

间充质干细胞

在某些实施方案中，本文公开了与间充质干细胞一起使用的方法和培养基。在某些实施方案中，本文公开了与间充质干细胞群一起使用的方法和培养基。在某些实施方案中，培养基包含一种或更多种间充质干细胞。在某些实施方案中，培养基包含一种或更多种幼稚间充质干细胞。在某些实施方案中，培养基包含一种或更多种未刺激的间充质干细胞。在某些实施方案中，培养基包含一种或更多种被刺激的间充质干细胞。在某些实施方案中，间充质干细胞是人类来源的。在某些实施方案中，间充质干细胞为原代人细胞。在某些实施方案中，间充质干细胞是从血液中分离的。在某些实施方案中，间充质干细胞是从脐带血中分离的。在某些实施方案中，间充质干细胞是从胎盘中分离的。在某些实施方案中，间充质干细胞是从牙髓中分离的。在某些实施方案中，间充质干细胞是从经血中分离的。在某些实施方案中，间充质干细胞是从胎儿中分离的。在某些实施方案中，间充质干细胞是从脂肪抽吸物中分离的。在某些实施方案中，间充质干细胞是从活组织检查物中分离的。

1型极化多能干细胞

在某些实施方案中，本文公开了在多能干细胞或间充质干细胞中诱导免疫极化的方法。在某些实施方案中，本文公开了在多能干细胞中诱导免疫极化的培养基。在某些实施方案中，本文公开了极化多能干细胞。在某些实施方案中，细胞表现出1型极化。1型极化以促炎性媒介物的表达或释放为特征。用tlr4配体处理的细胞将表现出1型极化。1型极化以tnfsf10(trail)的表达为特征。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导tnfsf10的表达。在某些实施方案中，，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞2倍的tnfsf10的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞5倍的tnfsf10的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞10倍的tnfsf10的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞50倍的tnfsf10的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞100倍的tnfsf10的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞200倍的tnfsf10的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞500倍的tnfsf10的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞1,000倍的tnfsf10的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞10,000倍的tnfsf10的表达。

在某些实施方案中，本文公开了1型极化多能干细胞或间充质干细胞。在某些实施方案中，1型极化多能干细胞表达tnfsf10。在某些实施方案中，1型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞2倍以上的tnfsf10。在某些实施方案中，1型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞5倍以上的tnfsf10。在某些实施方案中，1型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞10倍以上的tnfsf10。在某些实施方案中，1型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞50倍以上的tnfsf10。在某些实施方案中，1型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞100倍以上的tnfsf10。在某些实施方案中，1型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞500倍以上的tnfsf10。在某些实施方案中，1型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞1,000倍以上的tnfsf10。在某些实施方案中，1型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞10,000倍以上的tnfsf10。

在某些实施方案中，本文公开了1型极化多能干细胞或间充质干细胞。在某些实施方案中，1型极化多能干细胞表达与未刺激的多能干细胞相比升高的水平的某些mirna。在某些实施方案中，升高的mirna包含mir-146、mir-155、mir-1305、mir-575和mir-1973中的任何一种或更多种。在某些实施方案中，升高的mirna包含mir-146、mir-155、mir-1305、mir-575和mir-1973中的任何一种、两种、三种、四种或所有五种。与未刺激的多能干细胞群相比，这些mirna中的任何一种的水平可升高至少约2倍、3倍、4倍、5倍或更多。在某些实施方案中，与未刺激的多能干细胞相比，1型极化多能干细胞表达降低水平的某些mirna。在某些实施方案中，降低的mirna包含mirna-24-3p。与未刺激的多能干细胞群相比，该mirna的水平可降低至少约2倍、3倍、4倍、5倍或更多。

2型极化多能干细胞

在某些实施方案中，本文公开了在多能干细胞或间充质干细胞中诱导免疫2型极化的方法。在某些实施方案中，本文公开了在多能干细胞中诱导2型极化的培养基。2型极化以抗炎媒介物的表达或释放为特征。用tlr3配体处理的细胞将表现出2型极化。2型极化以cxcl9的表达为特征。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导cxcl9的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞2倍的cxcl9的表达。在某些实施方案中，公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞5倍的cxcl9的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞10倍的cxcl9的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞50倍的cxcl9的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞100倍的cxcl9的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞200倍的cxcl9的表达。在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基诱导相比于未刺激的细胞500倍的cxcl9的表达。

在某些实施方案中，本文公开了2型极化多能干细胞或间充质干细胞。在某些实施方案中，2型极化多能干细胞表达cxcl9。在某些实施方案中，2型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞2倍以上的cxcl9。在某些实施方案中，2型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞5倍以上的cxcl9。在某些实施方案中，2型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞10倍以上的cxcl9。在某些实施方案中，2型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞50倍以上的cxcl9。在某些实施方案中，2型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞100倍以上的cxcl9。在某些实施方案中，2型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞200倍以上的cxcl9。在某些实施方案中，2型极化多能干细胞表达相比于未刺激的细胞500倍以上的cxcl9。

在本文公开的某些实施方案中，当与未刺激的细胞群相比时，2型极化多能干细胞或间充质干细胞表达至少2倍的以下基因中的任何一种：cxcl9；egfr；irf1；a2m；fas；il2rg；mmp3；gbp1；isg15；fcgr1；nfkb1；nos2a；usf1；yy1；jak2；sta2；stat4；stat5；socs1；或irf1。在某些实施方案中，当与未刺激的细胞群相比时，2型极化多能干细胞表达至少2倍的以下基因中的任何一种：epor；f2r；stam；pdgfra；pias2；myc；sh2b1；或csf2rb。在某些实施方案中，当与未刺激的细胞群相比时，2型极化多能干细胞表达至少10倍的以下基因中的任何一种：cxcl9；gbp1；isg15；socs1；mmp3；jak2或irf1。在某些实施方案中，当与未刺激的细胞群相比时，2型极化多能干细胞表达至少20倍的以下基因中的任何一种：cxcl9；gbp1；isg15；或socs1。

在某些实施方案中，本文公开了2型极化多能干细胞或间充质干细胞。在某些实施方案中，与未刺激的多能干细胞相比，2型极化多能干细胞表达升高的水平的某些mirna。在某些实施方案中，升高的mirna包含mir-let7a/d、mir-17_1、mir-222、mir-92a和mir-1260a中的任何一种或更多种。在某些实施方案中，升高的mirna包含mir-let7a/d、mir-17_1、mir-222、mir-92a或mir-1260a中的任何一种或更多种。在某些实施方案中，升高的mirna包含mir-let7a/d、mir-17_1、mir-222、mir-92a或mir-1260a中的任何一种、两种、三种、四种或所有五种。与未刺激的多能干细胞群相比，这些mirna中的任何一种的水平可升高至少约2倍、3倍、4倍、5倍或更多。在某些实施方案中，与未刺激的多能干细胞相比，1型极化多能干细胞表达降低水平的某些mirna。在某些实施方案中，降低的mirna包含mirna-222。与未刺激的多能干细胞群相比，该mirna的水平可降低至少约2倍、3倍、4倍、5倍或更多。

细胞一致性

在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基允许培养后极化多能细胞的一致性增加。在一些实施方案中，超过60％的细胞表达1型标记物。在一些实施方案中，超过70％的细胞表达1型标记物。在一些实施方案中，超过80％的细胞表达1型标记物。在一些实施方案中，超过90％的细胞表达1型标记物。在一些实施方案中，超过95％的细胞表达1型标记物。在一些实施方案中，超过98％的细胞表达1型标记物。在某些实施方案中，1型标记物为tnfsf10。标记物可通过任何合适的方法测量，例如，免疫组织化学、elisa、流式细胞术、免疫印迹、qrt-pcr、rna印迹或数字pcr。

在某些实施方案中，本公开内容的方法和培养基允许培养后极化多能细胞的一致性增加。在一些实施方案中，超过60％的细胞表达2型标记物。在一些实施方案中，超过70％的细胞表达2型标记物。在一些实施方案中，超过80％的细胞表达2型标记物。在一些实施方案中，超过90％的细胞表达2型标记物。在一些实施方案中，超过95％的细胞表达2型标记物。在一些实施方案中，超过98％的细胞表达2型标记物。在某些实施方案中，2型标记物为cxcl9。标记物可通过任何合适的方法测量，例如，免疫组织化学、elisa、流式细胞术、免疫印迹、qrt-pcr、rna印迹或数字pcr。

方法

在某些实施方案中，本文描述的方法提供了培养基与多能干细胞之间的一定量的接触。在某些实施方案中，多能细胞与本公开内容的培养基或诱导剂接触少于24小时。在某些实施方案中，多能细胞与本公开内容的培养基或诱导剂接触少于8小时。在某些实施方案中，多能细胞与本公开内容的培养基或诱导剂接触少于4小时。在某些实施方案中，多能细胞与本公开内容的培养基或诱导剂接触少于2小时。在某些实施方案中，多能细胞与本公开内容的培养基或诱导剂接触少于1小时。在某些实施方案中，多能细胞与本公开内容的培养基或诱导剂接触超过1分钟。在某些实施方案中，多能细胞与本公开内容的培养基或诱导剂接触超过1小时。在某些实施方案中，多能细胞与本公开内容的培养基或诱导剂接触超过2小时。在某些实施方案中，多能细胞与本公开内容的培养基或诱导剂接触超过4小时。在某些实施方案中，多能细胞与本公开内容的培养基或诱导剂接触超过8小时。

分泌的促炎性因子

在某些实施方案中，本文描述的方法和培养基使被刺激的多能干细胞分泌治疗上有用的因子。在某些实施方案中，该因子由间充质干细胞分泌。在某些实施方案中，该因子为促炎性的。在某些实施方案中，该因子响应于用tlr4配体的刺激而被分泌。在某些实施方案中，tlr4配体包含lps或氨基烷基氨基葡糖苷。在某些实施方案中，该因子响应于用tlr4配体和促红细胞生成素和低氧条件的刺激而被分泌。在某些实施方案中，该因子响应于用tlr4配体和促红细胞生成素和低氧条件以及另外的诱导剂的刺激而被分泌，该另外的诱导剂选自：乙酰胆碱、α-黑素细胞刺激素、褪黑激素、血清素、谷氨酸、去甲肾上腺素、组胺、脂氧素a4、白三烯b4及其任何组合。在某些实施方案中，分泌的因子为细胞因子。在某些实施方案中，该因子响应于用tlr4配体和另外的诱导剂的刺激而被分泌，该另外的诱导剂选自：乙酰胆碱、α-黑素细胞刺激素、褪黑激素、血清素、谷氨酸、去甲肾上腺素、组胺、脂氧素a4、白三烯b4及其任何组合。在某些实施方案中，细胞因子包含il-3。在某些实施方案中，细胞因子包含il-6。在某些实施方案中，细胞因子包含il-8。在某些实施方案中，细胞因子包含il-17。在某些实施方案中，细胞因子包含干扰素β。在某些实施方案中，分泌因子包括趋化因子。在某些实施方案中，趋化因子包含lif。在某些实施方案中，趋化因子包含gm-csf。在某些实施方案中，趋化因子包含mig。在某些实施方案中，趋化因子包含mcp-1。在某些实施方案中，趋化因子包含trail。在某些实施方案中，分泌的因子包含mirna。在某些实施方案中，mirna包含mir-146。在某些实施方案中，mirna包含mir-155。在某些实施方案中，分泌的因子包含细胞因子、趋化因子或mirna的组合。在某些实施方案中，分泌的因子不是从被刺激的细胞培养基中分离的，并且与所有其余因子一起存在于可用于治疗受试者或接触施用于受试者的细胞群的条件培养基中。

分泌的抗炎性因子

在某些实施方案中，本文描述的方法和培养基使被刺激的多能干细胞分泌治疗上有用的因子。在某些实施方案中，该因子由间充质干细胞分泌。在某些实施方案中，该因子为抗炎性的。在某些实施方案中，该因子响应于用tlr3配体刺激而被分泌。在某些实施方案中，tlr3配体包含poly(i:c)或poly(a:u)。在某些实施方案中，该因子响应于用tlr3配体、促红细胞生成素和低氧条件的刺激而被分泌。在某些实施方案中，该因子响应于用tlr3配体、促红细胞生成素、低氧条件和另外的诱导剂的刺激而被分泌，该另外的诱导剂选自：乙酰胆碱、α-黑素细胞刺激素、褪黑激素、血清素、谷氨酸、去甲肾上腺素、组胺、脂氧素a4、白三烯b4及其任何组合。在某些实施方案中，分泌的因子为细胞因子。在某些实施方案中，该因子响应于用tlr3配体和另外的诱导剂的刺激而被分泌，该另外的诱导剂选自：乙酰胆碱、α-黑素细胞刺激素、褪黑激素、血清素、谷氨酸、去甲肾上腺素、组胺、脂氧素a4、白三烯b4及其任何组合。在某些实施方案中，分泌的因子为细胞因子。在某些实施方案中，细胞因子包含il-4。在某些实施方案中，细胞因子包含il-10。在某些实施方案中，细胞因子包含il-13。在某些实施方案中，细胞因子包含tgfβ。在某些实施方案中，分泌的因子包含趋化因子。在某些实施方案中，趋化因子包含cxcl9。在某些实施方案中，趋化因子包含ccl5。在某些实施方案中，趋化因子包含cxcl10。在某些实施方案中，分泌的因子包含mirna。在某些实施方案中，mirna包含mirlet7a/d。在某些实施方案中，mirna包含mir-17/92a。在某些实施方案中，分泌的因子包含细胞因子、趋化因子或mirna的组合。在某些实施方案中，分泌的因子包含前列腺素e2。在某些实施方案中，分泌因子包含吲哚胺2,3-双加氧酶。在某些实施方案中，分泌的因子不是从被刺激的细胞培养基中分离的，并且与所有其余因子一起存在于可用于治疗受试者或接触施用于受试者的细胞群的条件培养基中。

分泌的因子的分离

在某些实施方案中，本文描述的分泌的因子是从已与本公开内容的被刺激的多能干细胞群接触的培养基中分离的。在某些实施方案中，本文描述的分泌的因子是从已与本公开内容的被刺激的间充质干细胞群接触的培养基中分离的。在某些实施方案中，干细胞群已与被刺激的细胞群接触超过1小时。在某些实施方案中，干细胞群已与被刺激的细胞群接触超过2小时。在某些实施方案中，干细胞群已与被刺激的细胞群接触超过4小时。在某些实施方案中，干细胞群已与被刺激的细胞群接触超过8小时。在某些实施方案中，干细胞群已与被刺激的细胞群接触超过24小时。在某些实施方案中，分泌的因子是通过任何合适的方法从培养基中分离的，所述方法包括但不限于过滤、离心、沉淀、层析和冷冻。在某些实施方案中，分泌的因子不是从培养基中分离的。

分泌的促炎性细胞外囊泡

细胞外囊泡为细胞衍生的囊泡，其存在于许多真核生物流体且可能是所有的真核生物流体中，包括血液、尿液和细胞培养物的培养基。这些细胞外囊泡源自于细胞内体和质膜，并且可含有dna、rna(包括mirna)、蛋白、多肽、脂质和小分子。细胞外囊泡为细胞衍生的小囊泡并且包括外来体、微泡和凋亡小体。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含外来体。在某些实施方案中，本文描述的方法和培养基使被刺激的多能干细胞分泌治疗上有用的细胞外囊泡。在某些实施方案中，细胞外囊泡由间充质干细胞分泌。在某些实施方案中，细胞外囊泡为促炎性的。在某些实施方案中，细胞外囊泡响应于tlr4配体的刺激而被分泌。在某些实施方案中，tlr4配体包含lps或氨基烷基氨基葡糖苷。在某些实施方案中，细胞外囊泡响应于用tlr4配体、促红细胞生成素和低氧条件的刺激而被分泌。在某些实施方案中，细胞外囊泡响应于用tlr4配体、促红细胞生成素、低氧条件和另外的诱导剂的刺激而被分泌，该另外的诱导剂选自：乙酰胆碱、α-黑素细胞刺激素、褪黑激素、血清素、谷氨酸、去甲肾上腺素、组胺、脂氧素a4、白三烯b4及其任何组合。在某些实施方案中，细胞外囊泡响应于用tlr4配体和另外的诱导剂的刺激而被分泌，该另外的诱导剂选自：乙酰胆碱、α-黑素细胞刺激素、褪黑激素、血清素、谷氨酸、去甲肾上腺素、组胺、脂氧素a4、白三烯b4及其任何组合。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含细胞因子。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含il-3。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含il-6。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含il-8。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含il-17。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含干扰素β。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含趋化因子。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含lif。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含gm-csf。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含mig。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含mcp-1。在某些实施方案中，趋化因子包含trail。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含mirna。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含mir-146。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含mir-155。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含细胞因子、趋化因子或mirna的组合。在某实施方案中，促炎性细胞外囊泡包含与从未刺激的幼稚多能细胞群分泌的细胞外囊泡相比升高的一种或更多种蛋白。在某实施方案中，促炎性细胞外囊泡包含与从未刺激的幼稚多能细胞群分泌的细胞外囊泡相比升高的一种或更多种蛋白。在某些实施方案中，与来自幼稚未刺激的多能干细胞的细胞外囊泡相比，该一种或更多种蛋白包含升高水平的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)、连接桥粒斑珠蛋白(jup)、桥粒斑蛋白(dsp)、膜突蛋白(msn)、波形蛋白(vim)、肌动蛋白(actb)或膜联蛋白a2(anxa2)中的任何一种或更多种。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含与来自幼稚未刺激的多能干细胞的细胞外囊泡相比升高水平的以下中的任何两种、三种、四种、五种、六种或所有七种：甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)、连接桥粒斑珠蛋白(jup)、桥粒斑蛋白(dsp)、膜突蛋白(msn)、波形蛋白(vim)、肌动蛋白(actb)或膜联蛋白a2(anxa2)。在某些实施方案中，与未刺激的多能细胞相比，这些蛋白中的任何一种都可升高2倍、3倍、5倍、10倍、15倍、20倍或更多。在某实施方案中，促炎性细胞外囊泡包含与从未刺激的幼稚多能细胞群分泌的细胞外囊泡相比降低的一种或更多种蛋白。在某些实施方案中，该一种或更多种蛋白包含降低水平的以下中的任何一种或更多种：血小板应答蛋白-1(thbs1)、胶原蛋白α-2(vi)链(col6a2)、饰胶蛋白聚糖(dcn)、胰岛素样生长因子结合蛋白7(igfbp7)、赖氨酰氧化酶同源物2(loxl2)、双糖链蛋白聚糖(bgn)或胶原蛋白α-3(vi)链(col6a3)。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含降低水平的以下中的任何两种、三种、四种、五种、六种或所有七种：血小板应答蛋白-1(thbs1)、胶原蛋白α-2(vi)链(col6a2)、饰胶蛋白聚糖(dcn)、胰岛素样生长因子结合蛋白质7(igfbp7)、赖氨酰氧化酶同源物2(loxl2)、双糖链蛋白聚糖(bgn)或胶原蛋白α-3(vi)链(col6a3)。在某些实施方案中，与未刺激的多能细胞相比，这些蛋白中的任何一种都可降低2倍、3倍、5倍、10倍或更多。

分泌的抗炎性细胞外囊泡

在某些实施方案中，本文描述的方法和培养基使被刺激的多能干细胞分泌治疗上有用的细胞外囊泡。在某些实施方案中，细胞外囊泡由间充质干细胞分泌。在某些实施方案中，细胞外囊泡为抗炎性的。在某些实施方案中，细胞外囊泡响应于tlr3配体的刺激而被分泌。在某些实施方案中，tlr3配体包含poly(i:c)或poly(a:u)。在某些实施方案中，细胞外囊泡响应于用tlr3配体、促红细胞生成素和低氧条件的刺激而被分泌。在某些实施方案中，细胞外囊泡响应于用tlr3配体、促红细胞生成素、低氧条件和另外的诱导剂的刺激而被分泌，该另外的诱导剂选自：乙酰胆碱、α-黑素细胞刺激素、褪黑激素、血清素、谷氨酸、去甲肾上腺素、组胺、脂氧素a4、白三烯b4及其任何组合。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含细胞因子。在某些实施方案中，细胞外囊泡响应于用tlr3配体和另外的诱导剂的刺激而被分泌，该另外的诱导剂选自：乙酰胆碱、α-黑素细胞刺激素、褪黑激素、血清素、谷氨酸、去甲肾上腺素、组胺、脂氧素a4、白三烯b4及其任何组合。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含细胞因子。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含il-4。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含il-10。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含il-13。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含tgfβ。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含趋化因子。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含cxcl9。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含ccl5。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含cxcl10。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含mirna。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含mirlet7a/d。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含mir-17/92a。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含细胞因子、趋化因子或mirna的组合。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含前列腺素e2。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含吲哚胺2,3-双加氧酶。在某些实施方案中，抗炎细胞外囊泡包含与从非刺激的多能细胞群分泌的细胞外囊泡相比升高一种或更多种蛋白。在某些实施方案中，该一种或更多种蛋白包含与来自幼稚未刺激的多能干细胞的细胞外囊泡相比升高水平的以下中的任何一种或更多种：肌球蛋白-1(myh1)、肌球蛋白-2(mth2)、肌球蛋白-7(myh-7)或组织因子途径抑制剂2(tfpi2)。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含与来自幼稚未刺激的多能干细胞的细胞外囊泡相比升高水平的以下中的任何两种、三种或所有四种：肌球蛋白-1(myh1)、肌球蛋白-2(mth2)、肌球蛋白-7(myh-7)或组织因子途径抑制剂2(tfpi2)。在某些实施方案中，与未刺激的多能细胞相比，这些蛋白中的任何一种都可升高2倍、3倍、5倍、10倍、15倍、20倍或更多。在某些实施方案中，抗炎性细胞外囊泡包含与从幼稚的非刺激的多能细胞群分泌的细胞外囊泡相比降低的一种或更多种蛋白。在某些实施方案中，与来自幼稚未刺激的多能干细胞的细胞外囊泡相比，该一种或更多种蛋白包含降低水平的以下中的任何一种或更多种：胶原蛋白α-1(i)链(col6a3)、巯基氧化酶1(qsox1)、饰胶蛋白聚糖-7(dcn)、胶原蛋白α-2(vi)链(col6a2)、血小板应答蛋白-1(thbs1)或胶原蛋白α-1(i)链(col1a1)。在某些实施方案中，细胞外囊泡包含与来自幼稚未刺激的多能干细胞的细胞外囊泡相比降低水平的以下中的任何两种、三种、四种，五种或所有六种：胶原蛋白α-1(i)链(col6a3)、巯基氧化酶1(qsox1)、饰胶蛋白聚糖-7(dcn)、胶原蛋白α-2(vi)链(col6a2)、血小板应答蛋白-1(thbs1)或胶原蛋白α-1(i)链(col1a1)。在某些实施方案中，与未刺激的多能细胞相比，这些蛋白中的任何一种都可降低2倍、3倍、5倍、10倍或更多。

细胞外囊泡的分离

在某些实施方案中，本文描述的细胞外囊泡是从已与本公开内容的被刺激的多能干细胞群接触的培养基中分离的。在某些实施方案中，本文描述的细胞外囊泡是从已与本公开内容的被刺激的多能干细胞群接触的培养基中分离的。在某些实施方案中，干细胞群已与被刺激的细胞群接触超过1小时。在某些实施方案中，干细胞群已与被刺激的细胞群接触超过2小时。在某些实施方案中，干细胞群已与被刺激的细胞群接触超过4小时。在某些实施方案中，干细胞群已与被刺激的细胞群接触超过8小时。在某些实施方案中，干细胞群已与被刺激的细胞群接触超过24小时。细胞外囊泡可从培养基中分离和/或纯化。用于从培养基中分离细胞外囊泡的合适方法为本领域已知的。在某些实施方案中，细胞外囊泡是通过任何合适的方法从培养基中分离，所述方法包括但不限于过滤、离心、超速离心、密度梯度分离、沉淀、免疫亲和分离、层析和冷冻。在某些实施方案中，细胞外囊泡不是从培养基中分离的。

治疗方法

在某些实施方案中，本文描述的方法、培养基、细胞、分泌的因子和细胞外囊泡是治疗上有用的。例如，图2描绘了本文描述的方法、培养基、细胞、分泌的因子和细胞外囊泡的非限制性治疗方案的流程图。在某些实施方案中，本文描述的方法、培养基、细胞、分泌的因子和细胞外囊泡可用于治疗癌症。在某些实施方案中，本文描述的方法、培养基、细胞、分泌的因子和细胞外囊泡可用于治疗自身免疫性疾病。在某些实施方案中，本文描述的方法、培养基、细胞、分泌的因子和细胞外囊泡可用于治疗炎性疾病。在某些实施方案中，用包含tlr4配体的培养基处理的多能干细胞可用于治疗癌症。在某些实施方案中，用包含tlr3配体的培养基处理的多能干细胞可用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病。在某些实施方案中，用包含tlr4配体的培养基处理的间充质干细胞可用于治疗癌症。在某些实施方案中，用包含tlr3配体的培养基处理的间充质干细胞可用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病。

在某些实施方案中，用包括使多能干细胞与tlr4配体接触的方法处理的多能干细胞可用于治疗癌症。在某些实施方案中，用包括使多能干细胞与tlr3配体接触的方法处理的多能干细胞可用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病。在某些实施方案中，用包括使间充质干细胞与tlr4配体接触的方法处理的间充质干细胞可用于治疗癌症。在某些实施方案中，用包括使间充质干细胞与tlr3配体接触的方法处理的间充质干细胞可用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病。

在某些实施方案中，用包含tlr4配体的培养基处理的多能干细胞可用于治疗癌症。在某些实施方案中，用包含tlr3配体的培养基处理的多能干细胞分泌的因子或细胞外囊泡可用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病。在某些实施方案中，用包含tlr4配体的培养基处理的间充质干细胞可用于治疗癌症。在某些实施方案中，用包含tlr3配体的培养基处理的间充质干细胞分泌的因子或细胞外囊泡可用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病。

在某些实施方案中，用包括使多能干细胞与tlr4配体接触的方法处理的多能干细胞分泌的细胞外囊泡或因子可用于治疗癌症。在某些实施方案中，用包括使多能干细胞与tlr3配体接触的方法处理的多能干细胞分泌的细胞外囊泡或因子可用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病。在某些实施方案中，用包括使间充质干细胞与tlr4配体接触的方法处理的间充质干细胞分泌的细胞外囊泡或因子可用于治疗癌症。在某些实施方案中，用包括使间充质干细胞与tlr3配体接触的方法处理的间充质干细胞分泌的细胞外囊泡或因子可用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病。

本公开内容提供了一种细胞治疗的方法，包括：(a)提供多能干细胞群或间充质干细胞群；(b)使干细胞群与本文描述的培养基中的任何一种接触；(c)在适当条件下培养细胞；和(d)将被刺激的细胞施用于受试者。在某些实施方案中，本公开内容提供了一种细胞治疗的方法，包括：(a)提供间充质干细胞群；(b)使干细胞群与本文描述的培养基中的任何一种接触；(c)在适当条件下培养细胞；和(d)将被刺激的细胞施用于受试者。在某实施方案中，通过包括从器皿中移出、离心、超速离心、过滤、透析、洗涤和悬浮在适当的稀释液，诸如无菌中性缓冲盐水中的步骤，从包含细胞和培养基两者的器皿中收获细胞群。

自身免疫性疾病和炎性疾病

在某些实施方案中，本公开内容的方法、细胞、培养基、细胞外囊泡和分泌的因子用于治疗自身免疫性疾病。在某些实施方案中，本公开内容的方法、细胞、培养基、细胞外囊泡和分泌的因子用于治疗急性视神经炎、斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性阿狄森氏病(autoimmuneaddison’sdisease)、肾上腺自身免疫性疾病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性卵巢炎和睾丸炎、自身免疫性血小板减少症、白塞氏病(behcet’sdisease)、大疱性类天疱疮、闭塞性细支气管炎、心肌病、乳糜泻性皮炎(celiacsprue-dermatitis)、慢性疲劳免疫功能紊乱综合征(cf1ds)、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、churg-strauss综合征、瘢痕性类天疱疮、crest综合征、冷凝集素疾病、盘状狼疮、原发性混合型冷球蛋白血症(essentialmixedcryoglobulinemia)、纤维肌痛-纤维肌炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病(graves’disease)、格林-巴利综合征(guillain-barre)、桥本氏甲状腺炎(hashimoto’sthyroiditis)、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(itp)、iga神经病、幼年关节炎、扁平苔藓、梅尼埃病(meniere’sdisease)、混合性结缔组织病、多发性硬化、1型或免疫介导的糖尿病、重症肌无力、寻常性天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺性综合征、风湿性多肌痛、多发性肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症缺乏症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、牛皮癣关节炎、雷诺现象、莱特尔氏综合征(reiter’ssyndrome)、结节病、硬皮病、进行性系统性硬化症、干燥综合征、goodpasture综合征、僵人综合征、系统性红斑狼疮、红斑狼疮、大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎诸如疱疹样皮炎血管炎(dermatitisherpetiformisvasculitis)、白癜风、韦格纳肉芽肿病(wegener’sgranulomatosis)、抗肾小球基底膜疾病、抗磷脂综合征、神经系统的自身免疫性疾病、家族性地中海热、兰伯特-伊顿肌无力综合征(lambert-eatonmyasthenicsyndrome)、交感性眼炎或多内分泌腺病、牛皮癣。

在某些实施方案中，本公开内容的方法、细胞、培养基、细胞外囊泡和分泌的因子用于治疗自身免疫性疾病。在某些实施方案中，本公开内容的方法、细胞、培养基、细胞外囊泡和分泌的因子用于治疗炎性紊乱。在某些实施方案中，炎性紊乱为克罗恩病、1型糖尿病、类风湿性关节炎、炎性肠病、牛皮癣、牛皮癣关节炎、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、桥本氏病、移植物抗宿主病、干燥综合征、恶性贫血、阿狄森氏病、硬皮病、goodpasture综合征、溃疡性结肠炎、自身免疫性溶血性贫血、不孕不育(sterility)、重症肌无力、多发性硬化、巴塞多氏病(basedow’sdisease)、血小板减少性紫癜、格林-巴利综合征、过敏、哮喘、特应性疾病、动脉硬化、心肌炎、心肌病、肾小球肾炎、低增生性贫血(hypoplasticanemia)和器官移植后排斥。在某些实施方案中，炎性紊乱为急性视神经炎、糖尿病性神经病、克拉伯病、急性肺损伤、克罗恩病、乳糜泻病、类风湿性关节炎(ra)、炎性肠病(ibd)、哮喘、脑炎、慢性阻塞性肺病(copd)、炎性骨溶解、过敏性紊乱、败血性休克(septicshock)、肺纤维化(例如，特发性肺纤维化)、炎性血管炎(例如，结节性多动脉炎、韦格纳肉芽肿病、大动脉炎、颞动脉炎和淋巴瘤样肉芽肿病)、创伤后血管的血管成形术(例如，血管成形术后的再狭窄)、未分化脊柱关节病、未分化关节病、关节炎、炎性骨溶解、慢性肝炎或者慢性病毒或细菌感染引起的慢性炎症。

癌症

在某些实施方案中，本公开内容的方法、细胞、培养基、细胞外囊泡和分泌的因子用于治疗癌症。在某些实施方案中，本公开内容的方法、细胞、培养基、细胞外囊泡和分泌的因子用于治疗肿瘤。在某些实施方案中，本公开内容的方法、细胞、培养基、细胞外囊泡和分泌的因子用于增强癌症的治疗。在某些实施方案中，癌症为成人急性淋巴母细胞白血病；儿童急性淋巴母细胞白血病；成人急性髓性白血病；儿童急性髓性白血病；肾上腺皮质癌；艾滋病相关的癌症；艾滋病相关的淋巴瘤；肛门癌；阑尾癌；星形细胞瘤；非典型畸胎样瘤/横纹肌样瘤；基底细胞癌；肝外胆管癌；膀胱癌；骨癌、骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤；脑干胶质瘤；脑肿瘤；中枢神经系统胚胎性瘤；星形细胞瘤；颅咽管瘤；室管膜母细胞瘤；脑肿瘤、室管膜细胞瘤；髓母细胞瘤；髓上皮瘤；中分化松果体细胞瘤；幕上原始神经外胚层肿瘤和成松果体细胞瘤；脑和脊髓肿瘤；乳腺癌；男性乳腺癌；支气管肿瘤；伯基特淋巴瘤(burkittlymphoma)；类癌肿瘤；中枢神经系统非典型畸胎样瘤/横纹肌样瘤；中枢神经系统胚胎性瘤；中枢神经系统(cns)淋巴瘤、宫颈癌；原发性宫颈癌；儿童癌症；脊索瘤；慢性淋巴细胞白血病；慢性髓性白血病；慢性骨髓增生性紊乱；结肠癌；结肠直肠癌；颅咽管瘤；皮肤t细胞淋巴瘤；中枢神经系统胚胎性瘤；子宫内膜癌；室管膜母细胞瘤；室管膜瘤；食道癌；成感觉神经细胞瘤；尤文肉瘤家族肿瘤；颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；眼癌、眼内黑素瘤；眼癌、视网膜母细胞瘤；胆囊癌；胃(gastric)(胃(stomach))癌；胃肠道类癌肿瘤；胃肠道间质瘤(gist)；颅外生殖细胞肿瘤；性腺外生殖细胞肿瘤；卵巢生殖细胞肿瘤；妊娠滋养细胞肿瘤(gestationaltrophoblastictumor)；胶质瘤；毛细胞白血病；头颈癌；心脏癌(heartcancer)；成人(原发性)肝细胞癌(肝癌)；肝细胞癌(肝癌)；朗格汉斯细胞(langerhanscell)组织细胞增生症；成人霍奇金淋巴瘤；儿童霍奇金淋巴瘤；下咽癌；眼内黑素瘤；胰岛细胞瘤(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤(kaposisarcoma)；肾(kidney)(肾细胞)癌；肾癌；朗格汉斯细胞组织细胞增生症；喉癌；儿童喉癌；成人急性淋巴细胞白血病；儿童急性淋巴细胞白血病；成人急性髓细胞白血病；儿童急性髓细胞白血病；慢性淋巴细胞白血病；慢性髓细胞性白血病；毛细胞白血病；唇和口腔癌；成人(原发性)肝癌；肝癌；非小细胞肺癌；小细胞肺癌；艾滋病相关的淋巴瘤；伯基特淋巴瘤；皮肤t细胞淋巴瘤；成人霍奇金淋巴瘤；儿童霍奇金淋巴瘤；成人非霍奇金淋巴瘤；儿童非霍奇金淋巴瘤；原发性中枢神经系统(cns)淋巴瘤；巨球蛋白血症；骨和骨肉瘤的恶性纤维组织细胞瘤；髓母细胞瘤；髓上皮瘤；黑素瘤；眼内(眼)黑素瘤；梅克尔细胞癌；成人恶性间皮瘤；间皮瘤；隐性原发性转移性鳞状颈癌(metastaticsquamousneckcancerwithoccultprimary)；口腔癌；多发性内分泌肿瘤综合征；多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤；蕈样肉芽肿病；骨髓增生异常综合征；骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤；慢性髓性白血病；成人急性髓细胞性白血病；儿童急性髓细胞性白血病；多发性骨髓瘤；慢性骨髓增生性紊乱；鼻腔癌和鼻旁窦癌；鼻咽癌；神经母细胞瘤；成人非霍奇金淋巴瘤；儿童非霍奇金淋巴瘤；非小细胞肺癌；口腔癌(oralcancer)；唇癌和口腔癌(oralcavitycancer)；口咽癌；骨肉瘤和骨的恶性纤维组织细胞瘤；卵巢癌；卵巢上皮癌；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低恶性潜在肿瘤(ovarianlowmalignantpotentialtumor)；胰腺癌；胰腺癌、胰岛细胞瘤；乳头状瘤病；鼻旁窦癌和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；咽癌；中分化的松果体细胞瘤；垂体瘤；浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺母细胞瘤；妊娠期癌症和乳腺癌；原发性中枢神经系统(cns)淋巴瘤；前列腺癌；直肠癌；肾细胞(肾)癌；肾盂和输尿管移行细胞癌；具有染色体15改变的呼吸道癌症；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；唾液腺癌；唾液腺癌；尤文肉瘤家族的肿瘤，肉瘤；卡波西肉瘤；成人软组织肉瘤；儿童软组织肉瘤；子宫肉瘤；sézary综合症；皮肤癌(非黑素瘤)；皮肤癌；皮肤癌(黑素瘤)；梅克尔细胞皮肤癌；小细胞肺癌；小肠癌；成人软组织肉瘤；儿童软组织肉瘤；鳞状细胞癌；隐性原发性转移性鳞状颈癌；胃(stomach)(胃(gastric))癌；幕上原始神经外胚层肿瘤；皮肤t细胞淋巴瘤；睾丸癌；喉癌(throatcancer)；胸腺瘤和胸腺癌；甲状腺癌；肾盂和输尿管移行细胞癌；妊娠滋养细胞肿瘤；未知原发性部位的癌症；输尿管和肾盂移行细胞癌；尿道癌；子宫内膜子宫癌；子宫肉瘤；葡萄膜黑素瘤；阴道癌；外阴癌；waldenstrom巨球蛋白血症；或肾母细胞瘤(wilmstumor)。

施用方案

在某些实施方案中，本公开内容的方法、细胞、培养基、细胞外囊泡和分泌的因子用于施用于需要治疗癌症、自身免疫性紊乱或炎性紊乱的受试者。在某些实施方案中，本公开内容的方法、细胞和诱导培养基包括不同的施用途径。在某些实施方案中，施用途径为皮下、顶区内(intraparietal)、肌肉内、静脉内、肿瘤内、眼内、视网膜内、玻璃体内或颅内。在某些实施方案中，细胞可直接施用于肿瘤部位或炎症部位。

在某些实施方案中，本公开内容的方法、细胞、培养基、细胞外囊泡和分泌的因子用于施用于需要治疗癌症、自身免疫性紊乱或免疫介导的炎性疾病的受试者。在某些实施方案中，本公开内容的方法、细胞和诱导培养基包含不同的剂量频率。在某些实施方案中，本公开内容的细胞和方法每天施用一次、每周施用一次、每月施用一次或每年施用一次。在某些实施方案中，本公开内容的细胞和方法每天施用两次、每周施用两次、每月施用两次或每年施用两次。在某些实施方案中，本公开内容的细胞和方法每天施用三次、每周施用三次、每月施用三次或每年施用三次。在某些实施方案中，本公开内容的细胞和方法用于每天施用四次、每周施用四次、每月施用四次或每年施用四次。在某些实施方案中，首次治疗(primarytreatment)之后为每年1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次或12次的维持剂量。在某些实施方案中，维持剂量持续至少1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年或更多年。在某些实施方案中，每剂量施用至少1x10⁶个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少2x10⁶个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少3x10⁶个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少4x10⁶个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少5x10⁶个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少6x10⁶个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少7x10⁶个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少8x10⁶个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少9x10⁶个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少1x10⁷个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少2x10⁷个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少3x10⁷个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少4x10⁷个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少5x10⁷个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少6x10⁷个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少7x10⁷个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少8x10⁷个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少9x10⁷个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少1x10⁸个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少2x10⁸个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少3x10⁸个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少4x10⁸个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少5x10⁸个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少6x10⁸个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少7x10⁸个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少8x10⁸个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少9x10⁸个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少1x10⁹个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少2x10⁹个细胞。在某些实施方案中，每剂量施用至少3x10⁹个细胞。

药学上可接受的赋形剂、稀释剂和载体

本公开内容的细胞、培养基和细胞外囊泡可与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体组合，以便改进和增强施用、稳定性、均匀性、生物利用度或其任何组合。在某些实施方案中，将本公开内容的细胞外囊泡或细胞悬浮在无菌溶液中施用。在某些实施方案中，溶液包含0.9％nacl。在某些实施方案中，溶液还包含以下中的一种或更多种：缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐、组氨酸、琥珀酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐或羟甲基氨基甲烷(tris)；表面活性剂，例如聚山梨醇酯80(吐温80)、聚山梨醇酯20(吐温20)或泊洛沙姆188；多元醇/二糖/多糖，例如葡萄糖、右旋糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇、蔗糖、海藻糖或葡聚糖40；氨基酸，例如甘氨酸或精氨酸；抗氧化剂，例如抗坏血酸或甲硫氨酸；以及螯合剂，例如egta或edta。在某些实施方案中，本公开内容的细胞外囊泡被冻干运输/储存并在施用前被重构。在某些实施方案中，冻干的细胞外囊泡制剂包含填充剂，诸如甘露醇、山梨糖醇、蔗糖、海藻糖和葡聚糖40。

实施例

以下实施例旨在说明性的，并不用于限制本文描述的发明。

实施例-1toll-样受体和某些诱导剂的组合增强间充质干细胞引发

参考图3a和图3b，tlr3的2型间充质干细胞引发被乙酰胆碱(ach)、谷氨酸(glu)和脂氧素a4(lax4)进一步增强。使用poly(i:c)和0.5ng/ml人重组促红细胞生成素将人骨髓来源的间充质干细胞诱导为2型间充质细胞。将总rna分离、纯化并逆转录成cdna。使用sybrgreenmastermix进行定量实时pcr。使用定量比较ct方法分析数据，将目标基因表达相对于18srrna管家基因归一化，并且显示为相对于未处理的对照的倍数增加。cxcl9基因表达在诱导后显著增加。误差条表示平均值的+/-标准误差(sem)。如图3a和图3b中的两个独立实验所示，用tlr3与ach(大约24倍图3a；大约37倍图3b)、glu(大约317.4倍图3a；大约59倍图3b)、lax4(大约32倍图3a；大约47倍图3b)任一者的组合或与所有三种的组合(大约108倍图3b)刺激间充质干细胞，引起比单独的tlr3(大约8.8倍图3a；大约22倍图3b)、ach(大约3.7倍图3a；大约20倍图3b)、glu(大约1.4倍图3a；大约16倍图3b)或lax4(大约-2倍图3a；大约13倍图3b)中的任何一种更高的cxcl9表达。

参考图4a和图4b，tlr4的1型间充质干细胞引发被白三烯b4(ltb4)、血清素(5-ht)、褪黑激素(mel)进一步增强。使用脂多糖(lps)和0.5ng/ml人重组促红细胞生成素将人骨髓来源的间充质干细胞诱导为1型间充质干细胞。将总rna分离、纯化并逆转录成cdna。使用sybrgreenmastermix进行定量实时pcr。使用定量比较ct方法分析数据，将目标基因表达相对于18srrna管家基因归一化，并且显示为相对于未处理对照的倍数增加。tnfsf10(也称为trail)基因表达在诱导后显著增加。误差条表示平均值的+/-标准误差(sem)。如图4a和图4b中的两个独立实验所示，用tlr4和ltb4(大约875,457倍图4a；大约15,437倍图4b)、5-ht(大约12,323倍图4b)、mel(大约5,555倍图4b)任一者的组合或与所有三种的组合(大约22,238倍图4b)刺激间充质干细胞，引起比任何一种单独的tlr4(大约425,854倍图4a；大约7,567倍图4b)、ltb4(大约49倍图4a；大约49倍图4b)、5-ht(大约333倍图4b)或mel(大约489倍图4b)更高的tnfsf10表达。

实施例2-由引发的间充质干细胞分泌的因子的分析

广泛范围的生物活性分子的分泌(即，分泌蛋白组)是msc实现其治疗效果并且可能最大程度地影响所靶向的患病组织的重要机制。我们包括外来体[也称为细胞外囊泡；ev或多囊体；meb]作为这些生物活性因子的已知贡献者。外来体是可影响邻近的细胞的分泌性囊泡。我们包括有丝分裂原、细胞外基质(ecm)蛋白、血管生成素、外来体和炎性/免疫调节生物活性因子作为可能由msc贡献的分子。

通过bio-plex生物活性因子测定(humangroupi&ii；bio-rad，hercules，ca)按照制造商的说明测试幼稚msc、msc1和msc2分泌蛋白组/外来体、通过sistemicinc(uk)、phalanxbiotechgroup(ca)进行mirna分析、通过lc-ms/mssystembiosciences(sbi,ca)进行下一代蛋白测序，并且随后通过免疫印迹分析、elisa、流式细胞术和rt-qpcr进行验证。

收集来自幼稚msc、msc1和msc2的条件培养基，并通过离心澄清，之后是生物活性因子分析。通过使用10ng/mllps处理人骨髓来源的间充质干细胞48小时来刺激msc1。通过使用1ug/mlpoly(i:c)处理人骨髓来源的间充质干细胞48小时来刺激msc2。所有水平均根据样品中的总蛋白浓度归一化，并进一步根据未处理的幼稚msc水平归一化。超过4倍的水平被认为是统计学上显著的。数据代表的是超过3个的独立实验，并通过elisa或免疫印迹分析被进一步验证。结果如下表1所示。

结果显示独特的不重叠的由msc1和msc2分泌的分泌的子的组。通常，促炎性因子由msc1分泌，而抗炎性因子由msc2分泌。

实施例3-由引发的间充质干细胞分泌的细胞外囊泡的蛋白内容物的分析

将来自幼稚msc、msc1和msc2的细胞外囊泡分离并使用exoquick-tc试剂盒(systembiosciences，inc)通过液相色谱[lc]-质谱[ms]/ms进行分析。简而言之，在无血清/无动物成分培养基中孵育48小时后收集来自幼稚msc1和msc2的条件培养基，并且通过离心澄清。在测定之前，使用10ng/ml的lps和5ng/ml的人重组促红细胞生成素处理人骨髓来源的间充质干细胞48小时来刺激msc1。在测定之前，使用1ug/ml的poly(i:c)和5ng/ml的人重组促红细胞生成素处理人骨髓来源的间充质干细胞48小时来刺激msc2。将细胞外囊泡沉淀物在200μl经调整的ripa缓冲液(2.0％sds、150mmnacl、50mmtris、ph8.5、1x完全蛋白酶抑制剂(roche))中于100℃裂解15分钟。裂解物通过离心澄清，并且通过qubit荧光测定法(invitrogen)确定蛋白浓度。将10μg提取的蛋白在mes缓冲体系中使用10％bistrisnupage微型凝胶(invitrogen)通过sds-page处理。切除迁移窗口(2cm泳道)并且使用progest机器人(digilab)进行凝胶内消化。每个被消化的样品的一半通过纳米lc-ms/ms用与thermofisherqexactive连接的watersnanoacquityhplc系统分析。将肽加载到捕集柱上，并且使用2小时反相梯度以350nl/min在75μm分析柱上洗脱；两个柱均装有lunac18树脂(phenomenex)。选择十五种最丰富的离子用于ms/ms。结果如下表2所示。

实施例3-由引发的间充质干细胞表达的mirna的分析

在大约20年前，在线虫中首次描述了microrna[mirna]，在线虫中它们在决定细胞命运方面起着重要作用。十年前首次描述了人类中mirna的存在。mirna谱研究已证明，mirna在不同器官和不同发育阶段选择性表达。msc的不同组织来源的mirna特征已明确了参与维持干细胞性质，诸如增殖、自我更新和分化能力的mirna图案。从引发的细胞分析msc1和msc2的mirna谱，并且与未处理的幼稚msc进行比较，以揭示独特的表达模式。数据代表了来自超过3个不同供体的至少3个独立实验。数据表示为与幼稚msc＝1相比的相对表达。例如，msc1中建立的促炎性mirna155的升高的表达与其被预测的炎性表型一致。

在测定之前，通过用10ng/ml的lps和5ng/ml的人重组促红细胞生成素处理人骨髓来源的间充质干细胞4小时来刺激msc1。在测定之前，通过用1ug/ml的poly(i:c)和5ng/ml的人重组促红细胞生成素处理人骨髓来源的间充质干细胞4小时来刺激msc2。

图5a(msc1)和图5b(msc2)显示这些实验的结果。对于msc1刺激的细胞外囊泡，mir-146(大约2.7倍)、mir-155(大约3.3倍)、mir-1305(大约2.3倍)、mir-575(大约2.1倍)和mir-1973(大约2.3倍)的水平与未刺激的msc相比均被诱导超过2倍，而mir-24-3p的水平降低约2倍。对于msc2刺激的细胞外囊泡，mir-let7a/d(大约3.4倍)、mir-17_1(大约6.5倍)、mir-92a(大约6.5倍)和mir-1260a(大约2.4倍)的水平与未刺激的msc相比均被诱导超过2倍，而mir-222的水平降低约2倍。

虽然本文已示出和描述本发明的优选实施方案，但是对于本领域技术人员明显的是，这些实施方案仅作为示例提供。本领域技术人员现在将想到不偏离本发明的许多变化、改变和替换。应该理解，本文描述的本发明实施方案的各种替代方案可用于实践本发明。