纯化病毒的方法与流程

文档序号:18743568发布日期:2019-09-21 02:04阅读:来源:国知局

技术特征:

1.从感染了病毒的宿主细胞中纯化病毒颗粒的方法,包括指示的顺序的步骤:

a)在将病毒颗粒释放到细胞培养基中的条件下培养所述宿主细胞,

b)通过离心从细胞碎片和细胞中分离出包含病毒颗粒的上清液,

c)用核酸酶孵育所述上清液,

d)用聚乙二醇(PEG)沉淀病毒颗粒,

e)离心病毒颗粒,

f)重悬沉淀的病毒颗粒。

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述核酸酶是内切核酸酶,具体地是Benzonase。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其中病毒是RNA病毒,具体地其是流感病毒,更具体地是甲型、乙型或丙型流感病毒。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中宿主细胞不进行先前的裂解处理。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中离心至少2,000g,具体地至少3,000g,具体地至少4000g,具体地至少4100g。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法,其中添加至少7.5%,具体地至少8%的PEG。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中所述PEG的平均分子量为约5,000(PEG5000)克/摩尔至约15,000(PEG15000)克/摩尔,具体地PEG的平均分子量约为6,000(PEG 6000)克/摩尔。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法,其中病毒在氯化钠条件中用PEG沉淀。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法,其中病毒感染的宿主细胞和病毒不是冻融的。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法,其中除去至少50%,具体地至少60%,具体地至少70%,具体地至少80%,具体地至少85%,具体地至少90%,具体地至少95%,更具体地至少99%的宿主细胞蛋白。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法,其中除去至少50%,具体地至少60%,具体地至少70%,具体地至少80%,具体地至少85%,具体地至少90%,具体地至少95%,更具体地至少99%的宿主细胞DNA。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法,其中将重悬的病毒无菌过滤。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法,其中宿主细胞是哺乳动物细胞,具体地是Vero细胞。

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