本发明涉及SNP基因分型技术领域，特别涉及一种KASP结合口腔拭子无提取在QPCR平台进行人SNP基因分型的方法。
背景技术：
随着生命科学技术的发展，市场上出现了越来越多的关于SNP基因分型的技术，包括一代Sanger测序、SNP芯片、Taqman探针等技术，这些技术都有各自的优缺点，比如一代Sanger测序准确度高，但是价格高，不适合大批量样本检测，而Taqman探针虽然适合做大量样本，但是价格也高，因此，发明一种KASP结合口腔拭子无提取在QPCR平台进行人SNP基因分型的方法来解决上述问题很有必要。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种KASP结合口腔拭子无提取在QPCR平台进行人SNP基因分型的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种KASP结合口腔拭子无提取在QPCR平台进行人SNP基因分型的方法，包括以下步骤：
步骤一，收集样本：
a:被检测人员用生理盐水漱口，半小时后用棉棒沿口腔外壁刮取口腔侧壁细胞，置于2mL保存管中；
b：对保存管使用600ul无核水重悬，制备重悬口腔细胞；
步骤二，配制KASP反应体系：反应体系的成分包括Master Mix、引物、样本，取总体积五分之一的重悬口腔细胞加入到反应体系中，然后混匀；
步骤三，将混匀后的溶液放入QPCR仪中，输入实验信息，选择genotyping目录下的程序设置：
a:选择94℃工作2-4min；
b:选择94℃工作10-30s；
c:选择65℃工作30-90s；
d:b-c步骤为降落PCR，每个循环降低0.8℃，共10个循环工作；
e:选择94℃工作10-30s；
f:选择57℃工作30-90s；
g:e-f步骤进行30个循环工作；
h:选择60℃工作1min后收集荧光；
步骤四：反应完成后下机进行数据分析并收集基因分型数据。
优选的，步骤一中被检测人员刮取的口腔细胞样本干棒一周内进行检测则可以放置于4℃冰箱或常温保存，超过一周才能检测的样本需-20℃保存，以防止细胞中DNA降解。
优选的，步骤三中QPCR仪工作过程中KASP反应程序同LGC官网。
优选的，步骤四中下机数据会由仪器自动分型，部分样品由于拷贝数过低或质量问题，可能会导致无法分型。
优选的，步骤四中首先将实验结果从仪器Download至电脑文件夹；再打开实验结果文件，一起能够将各个基因型自动分型，该方法也使用于其他平台的QPCR仪。
本发明的技术效果和优点：本发明改进了DNA模板在无提取的条件下直接进行分型实验，能够降低实验成本，节省时间，能够用于大量样本的基因检测，使人SNP基因分型成本降低，并且具有灵活性。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：
本发明提供了一种KASP结合口腔拭子无提取在QPCR平台进行人SNP基因分型的方法，包括以下步骤：
步骤一，收集样本：
a:被检测人员用生理盐水漱口，半小时后用棉棒沿口腔外壁刮取口腔侧壁细胞，置于2mL保存管中；
b：对保存管使用600ul无核水重悬，制备重悬口腔细胞，被检测人员刮取的口腔细胞样本干棒一周内进行检测则可以放置于4℃冰箱或常温保存，超过一周才能检测的样本需-20℃保存，以防止细胞中DNA降解；
步骤二，配制KASP反应体系：反应体系的成分包括Master Mix、引物、样本，取总体积五分之一的重悬口腔细胞加入到反应体系中，然后混匀；
步骤三，将混匀后的溶液放入QPCR仪中，QPCR仪工作过程中KASP反应程序同LGC官网，输入实验信息，选择genotyping目录下的程序设置：
a:选择94℃工作2min；
b:选择94℃工作10s；
c:选择65℃工作30s；
d:b-c步骤为降落PCR，每个循环降低0.8℃，共10个循环工作；
e:选择94℃工作10s；
f:选择57℃工作30s；
g:e-f步骤进行30个循环工作；
h:选择60℃工作1min后收集荧光；
步骤四：反应完成后下机进行数据分析并收集基因分型数据，首先将实验结果从仪器Download至电脑文件夹；再打开实验结果文件，一起能够将各个基因型自动分型，该方法也使用于其他平台的QPCR仪，下机数据会由仪器自动分型，部分样品由于拷贝数过低或质量问题，可能会导致无法分型。
实施例二：
本发明提供了一种KASP结合口腔拭子无提取在QPCR平台进行人SNP基因分型的方法，包括以下步骤：
步骤一，收集样本：
a:被检测人员用生理盐水漱口，半小时后用棉棒沿口腔外壁刮取口腔侧壁细胞，置于2mL保存管中；
b：对保存管使用600ul无核水重悬，制备重悬口腔细胞，被检测人员刮取的口腔细胞样本干棒一周内进行检测则可以放置于4℃冰箱或常温保存，超过一周才能检测的样本需-20℃保存，以防止细胞中DNA降解；
步骤二，配制KASP反应体系：反应体系的成分包括Master Mix、引物、样本，取总体积五分之一的重悬口腔细胞加入到反应体系中，然后混匀；
步骤三，将混匀后的溶液放入QPCR仪中，QPCR仪工作过程中KASP反应程序同LGC官网，输入实验信息，选择genotyping目录下的程序设置：
a:选择94℃工作4min；
b:选择94℃工作30s；
c:选择65℃工作90s；
d:b-c步骤为降落PCR，每个循环降低0.8℃，共10个循环工作；
e:选择94℃工作30s；
f:选择57℃工作90s；
g:e-f步骤进行30个循环工作；
h:选择60℃工作1min后收集荧光；
步骤四：反应完成后下机进行数据分析并收集基因分型数据，首先将实验结果从仪器Download至电脑文件夹；再打开实验结果文件，一起能够将各个基因型自动分型，该方法也使用于其他平台的QPCR仪，下机数据会由仪器自动分型，部分样品由于拷贝数过低或质量问题，可能会导致无法分型。
实施例三：
本发明提供了一种KASP结合口腔拭子无提取在QPCR平台进行人SNP基因分型的方法，包括以下步骤：
步骤一，收集样本：
a:被检测人员用生理盐水漱口，半小时后用棉棒沿口腔外壁刮取口腔侧壁细胞，置于2mL保存管中；
b：对保存管使用600ul无核水重悬，制备重悬口腔细胞，被检测人员刮取的口腔细胞样本干棒一周内进行检测则可以放置于4℃冰箱或常温保存，超过一周才能检测的样本需-20℃保存，以防止细胞中DNA降解；
步骤二，配制KASP反应体系：反应体系的成分包括Master Mix、引物、样本，取总体积五分之一的重悬口腔细胞加入到反应体系中，然后混匀；
步骤三，将混匀后的溶液放入QPCR仪中，QPCR仪工作过程中KASP反应程序同LGC官网，输入实验信息，选择genotyping目录下的程序设置：
a:选择94℃工作3min；
b:选择94℃工作20s；
c:选择65℃工作60s；
d:b-c步骤为降落PCR，每个循环降低0.8℃，共10个循环工作；
e:选择94℃工作20s；
f:选择57℃工作60s；
g:e-f步骤进行30个循环工作；
h:选择60℃工作1min后收集荧光；
步骤四：反应完成后下机进行数据分析并收集基因分型数据，首先将实验结果从仪器Download至电脑文件夹；再打开实验结果文件，一起能够将各个基因型自动分型，该方法也使用于其他平台的QPCR仪，下机数据会由仪器自动分型，部分样品由于拷贝数过低或质量问题，可能会导致无法分型。
根据上述实施例所得出的数据结构比对后，实施例三所提供的一种KASP结合口腔拭子无提取在QPCR平台进行人SNP基因分型的方法分型成功率高，数据更加准确，且DNA模板在无提取的条件下直接进行分型实验，能够降低实验成本，节省时间，能够用于大量样本的基因检测，使人SNP基因分型成本降低，并且具有灵活性。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。