本发明涉及不饱和脂肪酸的提取领域，具体是一种从蚕蛹中提取不饱和脂肪酸的方法。
背景技术：
在《中药大辞典》中有如下记载：蚕蛹油可治小儿疳热、消瘦、消渴；蚕蛹油富含多种氨基酸、微量元素及n-3和n-6系列多不饱和脂肪酸，尤其含有人体所必需的多不饱和脂肪酸。目前，对蚕蛹油的开发研究，更多的是侧重降低血浆，胆固醇，改善肝脏功能的作用，增加体内二十碳五烯酸(epa)、二十二碳六烯酸(dha)的生成，并且具有调整血脂、抗氧化作用；同时，蚕蛹当中含有大量的氨基酸，即关注点放在了降脂方面和营养保健当中。
目前蚕蛹油提取的方法主要有溶剂浸出法和溶剂压榨法，然而这些方法都存在有一定的缺陷。蚕蛹是高蛋白、高油脂物质，粗纤维含量低，质地比较软，所以溶剂压榨提取油脂困难较大，同时蚕蛹油得率也很低。溶剂浸出法提取油脂，虽然不受油料质地软硬的影响，油料经适当的预处理后，选用合适的溶剂.，即可浸出油脂，但现在的溶剂浸出法普遍采用二氯甲烷、丙酮等毒性较大的单一溶剂提取蚕蛹油.，这样不仅污染大.，而且产率低，不利于工业化的生产；即使经过改进后的方法，(例鄂旭等利用环己烷-石油醚混合溶剂提取蚕蛹毛油)但对溶剂的需求量大，消耗时间长。
在现有技术中，不饱和脂肪酸在原料中含量一般不是很高，例如dha，epa在鱼油中的含量在15％-30％。不饱和脂肪酸在分离以及纯化过程中，容易受氧、热等作用而发生氧化、聚合、降解、异构化等反应，产生一些对人体有害的物质。同时，作为医药工业和保健食品原料时，必须除去原料中含有的色素和产生臭味的化合物如醛、酮类，产品内也不能残留分离过程中引入的有毒溶剂。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种生产工艺简单，可快速从蚕蛹中提取高纯度不饱和脂肪酸的方法。提取得到的不饱和脂肪酸清香自然、无有机溶剂残留、α－亚麻酸含量高，可有效预防及治疗高血脂症和促进肝细胞再生，预防和治疗非酒精性脂肪肝。
本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：从蚕蛹中提取不饱和脂肪酸的方法，从粗制油中提取不饱和脂肪酸的步骤为：将粗制油置于超临界co2装置中，进行超临界萃取，采用的夹带剂为含有5~10%乙酸乙酯和0.01~0.02%氧氟沙星的乙醇溶液，收集萃余液，得到成品油。超临界co2萃取法是一种新型的无毒溶剂萃取技术，利用超临界co2流体在不同温度和压力下利用对不同物质的溶解度差别将其分离，工艺简单，生产成本低，特别适用于脂溶性、高沸点、热敏性物质的提取。采用超临界co2萃取法从蚕蛹中提取得到的不饱和脂肪酸，无腥味臭味、色泽透明亮黄、无有机溶剂残留，α－亚麻酸含量高，对血脂有较好的调节作用，降低大鼠血清中tc及mda含量、升高hdlc/tc比值、降低肝组织中mda含量，并增加人体体内epa和dha合成，具有调整血脂、抗脂质过氧化作用，可有效预防及治疗高血脂症。具有促进肝细胞再生作用，降低血清谷丙转氨酶作用，通过调整脂质代谢，具有十分显著的预防和治疗非酒精性脂肪肝。
超临界萃取条件为：萃取温度为35~40℃，萃取压力为30~40mpa，萃取时间0.6~1.0h；分离釜ⅰ压力10~12mpa，温度40~45℃；分离釜ⅱ压力5~7mpa，温度15~20℃。上述萃取条件下游离脂肪酸、醛和酮类等杂质在超临界co2流体中的溶解度高，油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸，特别是α－亚麻酸在超临界co2流体中的溶解度极低，当超临界co2流体进入解压釜中，调节到上述解压条件时杂质析出，co2再经过冷凝器冷凝后进入co2储罐中循环使用。
采用的夹带剂为含有5~10%乙酸乙酯和0.01~0.02%氧氟沙星的乙醇溶液。其中，氧氟沙星的组成为80~90%左旋氧氟沙星和10~20%右旋氧氟沙星。上述夹带剂中各成分相互作用，通过化学谛合作用，大大提高游离脂肪酸、醛和酮类等杂质在超临界co2流体中的溶解度对的温度、压力的敏感程度，提高最终得到的不饱和脂肪酸的纯度。在夹带剂乙醇溶液中加入0.01~0.02%氧氟沙星，特别是氧氟沙星的组成为80~90%左旋氧氟沙星和10~20%右旋氧氟沙星，能把提高夹带剂的抑菌性，减缓提取过程中不饱和脂肪酸的腐败速度。上述特定配比的氧氟沙星可缠绕在不饱和脂肪酸的双键处，通过范德华力和氢键作用，将其与超临界co2流体分子隔离开，降低提取的不饱和脂肪酸对氧的敏感程度，提高超临界co2的萃取效率。
粗制油的制备步骤为：
1）液压冷榨：将蚕蛹置于液压榨油装置内，室温下加压至40~60kg/cm2，保压出油，得到初油和油渣；
2）螺旋冷榨：将油渣粉碎，然后将其置于螺旋榨油装置内，挤压得到第二道冷榨油。通过分步冷榨的方式提取蚕蛹油，不仅能保证油品不会轻易被氧化酸败，富含不饱和脂肪酸和微量元素等营养物质，还能避免蚕蛹中的胶质等杂质混入油品中。在简化提取蚕蛹油的加工工艺的同时，保证了提取出的蚕蛹油的品质；
3）粗制油的制备：合并初油和第二道冷榨油，过滤，然后将滤液置于真空条件下，充氮静置5~8天后得到粗制油。利用充氮工艺将蚕蛹油中的水分、氧气和一些易挥发物质排除，降低酸值增长率、过氧化值增长率和蚕蛹油的土腥味，保证得到的蚕蛹油清香自然，无苦涩的味道，可长期储存。
与现有技术相比，本发明的优点在于：生产工艺简单，自动化高，可快速从蚕蛹中提取高纯度不饱和脂肪酸。本发明超临界co2萃取采用的夹带剂不仅能大大提高游离脂肪酸、醛和酮类等杂质在超临界co2流体中的溶解度对的温度、压力的敏感程度，提高最终得到的不饱和脂肪酸的纯度，还能降低提取的不饱和脂肪酸对氧的敏感程度，提高超临界co2的萃取效率。提取得到的不饱和脂肪酸清香自然、无有机溶剂残留、α－亚麻酸含量高，可有效预防及治疗高血脂症和促进肝细胞再生，预防和治疗非酒精性脂肪肝。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
从蚕蛹中提取不饱和脂肪酸的方法，最优选步骤为：
1）液压冷榨：将蚕蛹置于液压榨油装置内，室温下加压至52kg/cm2，保压出油，得到初油和油渣；
2）螺旋冷榨：将油渣粉碎，然后将其置于螺旋榨油装置内，挤压得到第二道冷榨油；
3）粗制油的制备：合并初油和第二道冷榨油，过滤，然后将滤液置于真空条件下，充氮静置6天后得到粗制油；
4）从粗制油中提取不饱和脂肪酸：将粗制油置于超临界co2装置中，进行超临界萃取，采用的夹带剂为含有7%乙酸乙酯和0.01%氧氟沙星的乙醇溶液，收集萃余液，得到成品油。其中，氧氟沙星的组成为90%左旋氧氟沙星和10%右旋氧氟沙星。超临界萃取条件为：萃取温度为37℃，萃取压力为35mpa，萃取时间0.8h；分离釜ⅰ压力11mpa，温度42℃；分离釜ⅱ压力6mpa，温度16℃。上述萃取条件下游离脂肪酸、醛和酮类等杂质在超临界co2流体中的溶解度高，油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸，特别是α－亚麻酸在超临界co2流体中的溶解度极低，当超临界co2流体进入解压釜中，调节到上述解压条件时杂质析出，co2再经过冷凝器冷凝后进入co2储罐中循环使用。提取得到的不饱和脂肪酸，无腥味臭味、色泽透明亮黄、无有机溶剂残留，α－亚麻酸含量高，对血脂有较好的调节作用，降低大鼠血清中tc及mda含量、升高hdlc/tc比值、降低肝组织中mda含量，并增加人体体内epa和dha合成，具有调整血脂、抗脂质过氧化作用，可有效预防及治疗高血脂症。具有促进肝细胞再生作用，降低血清谷丙转氨酶作用，通过调整脂质代谢，具有十分显著的预防和治疗非酒精性脂肪肝。
实施例2：
从蚕蛹中提取不饱和脂肪酸的方法，具体步骤为：
1）液压冷榨：将蚕蛹置于液压榨油装置内，室温下加压至40kg/cm2，保压出油，得到初油和油渣；
2）螺旋冷榨：将油渣粉碎，然后将其置于螺旋榨油装置内，挤压得到第二道冷榨油；
3）粗制油的制备：合并初油和第二道冷榨油，过滤，然后将滤液置于真空条件下，充氮静置5天后得到粗制油；
4）从粗制油中提取不饱和脂肪酸：将粗制油置于超临界co2装置中，进行超临界萃取，采用的夹带剂为含有5%乙酸乙酯和0.02%氧氟沙星的乙醇溶液，收集萃余液，得到成品油。其中，氧氟沙星的组成为80%左旋氧氟沙星和20%右旋氧氟沙星。超临界萃取条件为：萃取温度为35℃，萃取压力为40mpa，萃取时间1.0h；分离釜ⅰ压力10mpa，温度40℃；分离釜ⅱ压力5mpa，温度15℃。上述萃取条件下游离脂肪酸、醛和酮类等杂质在超临界co2流体中的溶解度高，油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸，特别是α－亚麻酸在超临界co2流体中的溶解度极低，当超临界co2流体进入解压釜中，调节到上述解压条件时杂质析出，co2再经过冷凝器冷凝后进入co2储罐中循环使用。提取得到的不饱和脂肪酸，无腥味臭味、色泽透明亮黄、无有机溶剂残留，α－亚麻酸含量高，对血脂有较好的调节作用，降低大鼠血清中tc及mda含量、升高hdlc/tc比值、降低肝组织中mda含量，并增加人体体内epa和dha合成，具有调整血脂、抗脂质过氧化作用，可有效预防及治疗高血脂症。具有促进肝细胞再生作用，降低血清谷丙转氨酶作用，通过调整脂质代谢，具有十分显著的预防和治疗非酒精性脂肪肝。
实施例3：
从蚕蛹中提取不饱和脂肪酸的方法，具体步骤为：
1）液压冷榨：将蚕蛹置于液压榨油装置内，室温下加压至60kg/cm2，保压出油，得到初油和油渣；
2）螺旋冷榨：将油渣粉碎，然后将其置于螺旋榨油装置内，挤压得到第二道冷榨油；
3）粗制油的制备：合并初油和第二道冷榨油，过滤，然后将滤液置于真空条件下，充氮静置8天后得到粗制油；
4）从粗制油中提取不饱和脂肪酸：将粗制油置于超临界co2装置中，进行超临界萃取，采用的夹带剂为含有10%乙酸乙酯和0.01%氧氟沙星的乙醇溶液，收集萃余液，得到成品油。其中，氧氟沙星的组成为90%左旋氧氟沙星和10%右旋氧氟沙星。超临界萃取条件为：萃取温度为40℃，萃取压力为30mpa，萃取时间0.7h；分离釜ⅰ压力12mpa，温度43℃；分离釜ⅱ压力7mpa，温度18℃。上述萃取条件下游离脂肪酸、醛和酮类等杂质在超临界co2流体中的溶解度高，油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸，特别是α－亚麻酸在超临界co2流体中的溶解度极低，当超临界co2流体进入解压釜中，调节到上述解压条件时杂质析出，co2再经过冷凝器冷凝后进入co2储罐中循环使用。提取得到的不饱和脂肪酸，无腥味臭味、色泽透明亮黄、无有机溶剂残留，α－亚麻酸含量高，对血脂有较好的调节作用，降低大鼠血清中tc及mda含量、升高hdlc/tc比值、降低肝组织中mda含量，并增加人体体内epa和dha合成，具有调整血脂、抗脂质过氧化作用，可有效预防及治疗高血脂症。具有促进肝细胞再生作用，降低血清谷丙转氨酶作用，通过调整脂质代谢，具有十分显著的预防和治疗非酒精性脂肪肝。
实施例4：降血脂效果测试
wister雄性小鼠100只，体重18~24g，基础饲料饲养1周，以适应环境，然后按体重随机分成2个处理，灌喂号申请公布号为cn101892119a从蚕蛹油中提取的不饱和脂肪酸制品和本发明实施例1提取的不饱和脂肪酸制品。对照组:[高脂饲料+申请公布号为cn101892119a从蚕蛹油中提取的不饱和脂肪酸制品(1.5g/kg)]；试验组：[高脂饲料+本发明实施例1提取的不饱和脂肪酸制品(1.5g/kg)]；空白对照组：[高脂饲料+生理盐水]。各组试验小鼠均自由饮水，在自然光照、室温25℃条件下饲养，每日灌胃给药2次，0.6ml/次。高脂饲料:在基础饲料中加入1%胆固醇、0.3%胆酸、10%猪油、4%吐温80制成。
动物血样采集和检测：试验结束前1天所有小鼠禁食24h后摘眼球取血，血液样品5000r/min离心10min，取血清检测tc、tg、ldl-c、hdl-c。
统计方法：试验数据以x±s表示，采用spss10.0软件进行组间单因素方差分析，多重比较用lsd法和s-n-k法。
不饱和脂肪酸制品对小鼠血脂的影响（x±s）
由上表可知，本发明提取的不饱和脂肪酸制品在对甘油三酯、低密度脂蛋白的降低优于现有技术，但进步效果并不是很明显，但降低总胆固醇的效果要远优于现有技术，具有显著的进步。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。