本发明涉及柠檬酸发酵领域，具体涉及一种黑曲霉麸曲培养基及其配制方法。
背景技术：
：目前在柠檬酸行业当中，黑曲霉麸曲的制备多采用小麦麸皮，水分含量在50-70％。因小麦麸皮的特征，在灭菌过程中，麸皮培养基容易结块，影响灭菌效果，同时对后期黑曲霉麸曲培养过程中热量的散失不及时，麸皮营养成分缺乏导致黑曲霉培养产孢子量少生长质量差，异常菌批较多，增大劳动量，浪费了生产成本和劳动成本，生产效率低下。技术实现要素：针对以上问题，本发明提供了一种黑曲霉麸曲培养基及其配制方法，该培养基采用小麦麦糠作为基质，添加营养液组成，解决了以往黑曲霉麸曲培养基在灭菌及培养过程易结块，灭菌效果不够理想，热量散失不及时，营养成分缺失，产孢子量少等问题。首先一种黑曲霉麸曲培养基，由小麦麦糠与营养液组成，小麦麦糠与营养液的质量比为8-12:1；以上营养液中包含葡萄糖，牛肉浸粉，硫酸铵，磷酸氢二钾，硫酸亚铁，硫酸锰，硫酸镁等营养成分，具体原料按重量份配比为：葡萄糖10-15份，牛肉浸粉5-10份，硫酸铵3-6份，磷酸二氢钾0.5-1份，硫酸亚铁0.5-1份，硫酸锰0.2-0.5份，硫酸镁0.2-0.5份，水75份；ph值为5.0-7.0。发明人进一步给出了以上黑曲霉麸曲培养基的配制方法，具体步骤如下：1)按照营养液各原料重量份组成准备原料，葡萄糖10-15份，牛肉浸粉5-10份，硫酸铵3-6份，磷酸二氢钾0.5-1份，硫酸亚铁0.5-1份，硫酸锰0.2-0.5份，硫酸镁0.2-0.5份，水75份；2)将步骤1)各组分混合，搅拌使各组分在水中充分溶解；3)调节营养液ph值为5.0-7.0；4)将小麦麦糠与营养液按照质量比例8-12:1混合均匀，调节ph值到5.0-7.0，进行灭菌，使用的灭菌条件一般为压力0.12-0.16mpa，温度105-126℃，时间30-60min。本发明中所用的ph调节剂可以是盐酸，硫酸，柠檬酸等的一种或多种。本发明中对于使用的小麦麦糠没有特别要求，小麦去除麦粒之后的外壳即可，优选的小麦麦糠粒径一般为5-10mm，含水量在60％左右。根据本发明所提供的黑曲霉麸曲培养基，使用时接入本领域常规接种量的黑曲霉菌种，进行麸曲培养的条件可以为本领域在培养黑曲霉麸曲时常用的条件，该培养条件包括：温度为31-37℃，湿度50-70％，培养时间为8-11天。本发明的有益效果主要体现在以下两大方面：1.本发明培养基采用小麦麦糠作为基质，主要根据小麦麦糠的形态特征，其表面积要比现有的麦麸表面积要大，能够提供更多的生长空间来生长以达到增大孢子量的目的，同时麦糠的不规则的形态特征使其内部有更多的空隙，更加有利于生长期间自身产生热量的快速散失，而且麦糠之间互相支撑也能更好地防止培养基在灭菌过程中的结块；本发明中对于使用的小麦麦糠没有特别要求，但粒径在5-10mm能够保证培养基具有更好的均一性、透气性以及灭菌效果。2.营养液提供了黑曲霉生长所需的各种营养物质，其中葡萄糖作为培养基的碳源，牛肉浸粉作为培养基的有机氮源，硫酸铵作为培养基中的无机氮源，磷酸氢二钾，硫酸亚铁，硫酸锰，硫酸镁作为补充菌体生长所需微量类无机营养物，与常规麸皮培养基相比，能够更好地为菌种所吸收利用；调节ph值5.0-7.0能够保证灭菌后的培养基的微酸性环境更适合黑曲霉生长。综上所述，经实验证明本发明所述的培养基与普通麸曲培养基(麸皮培养基)相比，灭菌后结块率明显降低，甚至本发明的培养基无结块，染菌率低，灭菌效果更好；相同培养模式下，产孢量明显增加。具体实施方式以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步的详细说明，但不以任何方式限制本发明。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围，除特殊说明外，下述实施例中均采用常规现有技术完成。以下实施例和对比例营养液没有特别明示的，均由以下重量份组成：葡萄糖12份，牛肉浸粉6份，硫酸铵4份，磷酸二氢钾0.5份，硫酸亚铁0.5份，硫酸锰0.3份，硫酸镁0.2份，水75份；将上述组分按照份数要求混合，搅拌使组分在水中充分溶解；调节营养液ph值为6.0。以下实施例及对比例的无菌检测方式为：将消毒灭菌后的培养基在无菌环境下将50ml无菌水添加到培养基内，充分摇匀后，添加到lb培养基内，35℃恒温培养2天，然后通过显微镜镜检的方式检测无菌情况。计算公式：染菌率(％)＝染菌瓶数/检测总瓶数*100。以下实施例及对比例的孢子计数检测方式:每瓶做3组，取培养好的黑曲霉麸曲0.5g，加入到含0.1％吐温的无菌水中，用磁力搅拌器将孢子完全打散，在显微镜下用血球计数板进行计数，取三组平均值作为参考数值。实施例1将小麦麦糠(颗粒大小5-10mm，水分含量60％)按照小麦麦糠与营养液重量比10:1进行混合，将其搅拌均匀后，加入盐酸调节ph值到6.0.将上述混合好的培养基分装为13瓶(每瓶含量培养基100g)，然后在压力0.14mpa，温度121℃，恒温60min灭菌，即得到灭菌后的培养基。取其中10瓶观察结块情况，并检测无菌情况；然后剩余3瓶以每克培养基为标准，接入黑曲霉孢子数量为2×105个/克。在本领域通用的培养环境下(环境温度30-38℃，湿度50-70％，每间隔8小时一次翻拍，培养10天)进行培养后，进行孢子计数，详细检测情况见表1。实施例2将小麦麦糠按照小麦麦糠与营养液重量比12:1进行混合，将其搅拌均匀后，加入盐酸调节ph值到6.0.将上述混合好的培养基分装为13瓶(每瓶含量培养基100g)，然后在压力0.14mpa，温度121℃，恒温60min灭菌，即得到灭菌后的培养基。取其中10瓶观察结块情况，并检测无菌情况；然后剩余3瓶以每克培养基为标准，接入黑曲霉孢子数量为2×105个/克。在本领域通用的培养环境下(环境温度30-38℃，湿度50-70％，每间隔8小时一次翻拍，培养10天)进行培养后，进行孢子计数，详细检测情况见表1。实施例3将小麦麦糠(颗粒大小5-10mm，水分含量60％)按照小麦麦糠与营养液(本营养液中未添加磷酸二氢钾0.5份，硫酸亚铁0.5份，硫酸锰0.3份，硫酸镁0.2份)重量比重10:1进行混合，将其搅拌均匀后，加入盐酸调节ph值到6.0.将上述混合好的培养基分装为13瓶(每瓶含量培养基100g)，然后在压力0.14mpa，温度121℃，恒温60min灭菌，即得到灭菌后的培养基。取其中10瓶观察结块情况，并检测无菌情况；然后剩余3瓶以每克培养基为标准，接入黑曲霉孢子数量为2×105个/克。在本领域通用的培养环境下(环境温度30-38℃，湿度50-70％，每间隔8小时一次翻拍，培养10天)进行培养后，进行孢子计数，详细检测情况见表1。实施例4将小麦麦糠(颗粒大小5-10mm，水分含量60％)按照小麦麦糠与营养液(本营养液中未添加磷酸二氢钾0.5份，硫酸亚铁0.5份，硫酸锰0.3份，硫酸镁0.2份)重量比12:1进行混合，将其搅拌均匀后，加入盐酸调节ph值到6.0.将上述混合好的培养基分装为13瓶(每瓶含量培养基100g)，然后在压力0.14mpa，温度121℃，恒温60min灭菌，即得到灭菌后的培养基。取其中10瓶观察结块情况，并检测无菌情况；然后剩余3瓶以每克培养基为标准，接入黑曲霉孢子数量为2×105个/克。在本领域通用的培养环境下(环境温度30-38℃，湿度50-70％，每间隔8小时一次翻拍，培养10天)进行培养后，进行孢子计数，详细检测情况见表1。对比例1将小麦麦糠(颗粒大小5-10mm，水分含量60％)按照小麦麦糠与水重量比10:1进行混合，将其搅拌均匀后，并且不调节ph值(ph值为7.2).将上述混合好的培养基分装为13瓶(每瓶含量培养基100g)，然后在压力0.14mpa，温度121℃，恒温60min灭菌，即得到灭菌后的培养基。取其中10瓶观察结块情况，并检测无菌情况；然后剩余3瓶以每克培养基为标准，接入黑曲霉孢子数量为2×105个/克。在本领域通用的培养环境下(环境温度30-38℃，湿度50-70％，每间隔8小时一次翻拍，培养10天)进行培养后，进行孢子计数，详细检测情况见表1。对比例2将小麦麦糠(颗粒大小5-10mm，水分含量60％)搅拌均匀后.加入盐酸调节ph值到6.0，然后分装为13瓶(每瓶培养基含量100g)，然后在压力0.14mpa，温度121℃，恒温60min灭菌，即得到灭菌后的培养基。取其中10瓶观察结块情况，并检测无菌情况，然后剩余3瓶以每克培养基为标准，接入黑曲霉孢子数量为2×105个/克。在本领域通用的培养环境下(环境温度30-38℃，湿度50-70％，每间隔8小时一次翻拍，培养10天)进行孢子计数，详细检测情况见表1。对比例3将麸皮(颗粒大小0.3-6mm，水分含量60％)搅拌均匀后，然后分装为13瓶(每瓶培养基含量100g)，然后在压力0.14mpa，温度121℃，恒温60min灭菌，即得到灭菌后的培养基。取其中10瓶观察结块情况，并检测无菌情况，然后剩余3瓶以每克培养基为标准，接入黑曲霉孢子数量为2×105个/克。在本领域通用的培养环境下(环境温度30-38℃，湿度50-70％，每间隔8小时一次翻拍，培养10天)进行孢子计数，详细检测情况见表1。表1结块率(％)染菌率(％)孢子计数(109个)实施例1002.14实施例2001.72实施例3001.61实施例4001.55对比例10101.39对比例2001.42对比例320201.38以上实施例及对比例详细描述了本培养基的实施方法。通过表1可以看出本发明所述的培养基在灭菌过程结束后，没有出现结块的现象，且灭菌效果要好。同时数据显示本培养基培养结束后，总的孢子量产量较对比例的培养基有所明显增加。当前第1页12