本发明属于生物催化技术领域，涉及一种酶催化合成氧杂蒽酮类化合物及其衍生物的方法。
背景技术：
氧杂蒽酮类化合物对亲核试剂和光能敏感，因此被广泛应用于很多方面。在药物化学方面，它具有抗癌，抗菌，抗病毒，抗艾滋病，抗疟原虫，降血糖的作用；在材料科学方面，它被用于构建具有催化作用的手性二齿配体，被用于制作生物分子可视化的荧光材料，被应用于激光技术，有机发光二极管，制作ph探针。这类化合物一般是由芳香醛与1，3-环己二酮或达米酮在牛磺酸，硫酸氢钠，席夫碱等酸碱催化剂作用下进行缩合和加成反应得到。但这些催化工艺往往需要大量难处理的有毒有机溶剂，造成环境污染，反应时间较长，产物收率也不高。但是近年来出现了超声法，微波法，无溶剂研磨法等新方法，并且出现了多种催化剂，包括相转移催化剂teba，离子液体，磁性纳米粒子，超临界二乙醚等。但以上很大一部分催化反应体系存在着反应条件苛刻，成本高和催化剂难以获得等缺点。
近年来，酶在有机合成中发挥了越来越重要的作用，多功能性酶已成功应用于多种c-c键形成反应中。2012年，木瓜蛋白酶被用于含水25％的dmso溶液中催化多种醛与乙酰丙酮和乙酸乙酯的缩合反应。2017年，novozym435被用于无水有机溶剂中催化乙醛与酸性亚甲基化合物的缩合反应。来自灰色链霉菌(sgp)的蛋白酶被用于双甲酮和芳基或烷基取代的α,β-不饱和酮或酯的环化反应中。ppl被用于在含水有机溶剂中催化4-羟基香豆素与α,β-不饱和酮的加成反应，合成华法林及其衍生物。
技术实现要素：
针对上述现有技术中的问题，本发明提出一种酶催化合成氧杂蒽酮类化合物的方法，该方法以酶为催化剂，以芳香醛与1,3-环己二酮或达米酮为底物反应制得了氧杂蒽酮类化合物或其衍生物，提供了酶催化反应的新用途。
为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：
一种酶催化合成氧杂蒽酮类化合物及其衍生物的方法，其是以芳香醛与1,3-环己二酮或达米酮为底物，以酶为催化剂，在溶剂中一步反应得到氧杂蒽酮类化合物或氧杂蒽酮类化合物的衍生物，所述氧杂蒽酮类化合物的衍生物结构为式i或式ii，所述氧杂蒽酮类化合物的结构为式iii或式iv，反应的方程式为：
其中，x1为4-cl，4-br，3-no2，4-no2，3-cl，4-f，2,4-cl2，4-cn，h，4-och3，4-ch3，4-oh，4-c4h9，4-cf3，4-oh-3-och3，2-f，2-no2或2-噻吩基中的一种；x2为4-no2，4-cl，2-f，2-no2，h或4-ch3中的一种；x3为2,6-cl2或2-吡啶基；x4为2-oh或2-oh-3-och3，
所述的酶为脂肪酶、猪胰腺胰酶或木瓜蛋白酶。
所述的酶，来源于动植物或者微生物。
所述的脂肪酶为南极假丝酵母脂肪酶b(amanolipasepsfromburkholderiacepacia)，xhlip-f脂肪酶，novozym435脂肪酶(lipasebfromcandidaantarctica,immobilizedonamacroporousacrylicresin)，来自疏棉状嗜热丝孢菌的脂肪酶(lipasefromthermomyceslanuginosus)，酶褶皱假丝酵母脂肪酶(candidarugosalipase)，黑曲霉脂肪酶(lipaselipoproteinfromaspergillusniger)，猪胰脂肪酶(porcinepancreaslipase)中的一种。
优选的脂肪酶为来自疏棉状嗜热丝孢菌的脂肪酶(lipasefromthermomyceslanuginosus)。来自疏棉状嗜热丝孢菌的脂肪酶简写为脂肪酶tlim。
所述溶剂为含水体积分数为0～70％的有机溶剂，优选所述溶剂为含水量为0的有机溶剂。
所述有机溶剂为异丙醇，甲苯，二氯甲烷，四氢呋喃，乙腈，甲基叔丁基醚，乙醚，正己烷中的一种或几种，优选所述有机溶剂为正己烷。
所述芳香醛与1,3-环己二酮或达米酮的摩尔比为1:2。
所述酶的用量为0<c≤10mg/ml，其中c为所述酶在反应体系中的浓度。优选的酶在反应体系中的浓度为10mg/ml。所述反应的温度为25～65℃，优选35℃。
所述反应的时间为2～32h。
所述的反应还包括：反应完毕后回收溶剂。
所述的反应还包括：反应完毕后回收酶。
所述的反应还包括：反应完毕后，粗产品用热水洗涤。
所述的反应还包括：反应完毕后，粗产品用乙醇重结晶。
本发明的有益效果在于：
1.提供了氧杂蒽酮类化合物及其衍生物的新的合成方法。以酶为催化剂，提供了反应条件温和，操作简单，生产成本低，产率高，副产物少，底物适用范围广，对环境污染小的氧杂蒽酮类化合物及其衍生物的合成方法。
2.发掘了酶的新用途，特别是以1,3-环己二酮或达米酮为底物的c-c键形成反应。
3.本发明所用的酶浓度低且易于回收，回收效率高，且回收后酶的催化活性基本不变。
4.本发明所述的方法，产物收率高，相对于其他合成方法，具备较强的竞争优势。
5.本发明所述的方法，采用后处理简单且易回收的溶剂，后处理难度小，经济环保。
附图说明
图1是实施例1所制备的2,2'-((4-氯苯基)亚甲基)双(3-羟基环己-2-烯-1-酮)的核磁共振氢谱图。
图2是实施例11所制备的9-(2,6-二氯苯基)-3,4,5,6,7,9-六氢-1h-x吨-1,8(2h)-二酮的核磁共振氢谱图。
图3是实施例12所制备的9-(2-羟基-6-氧代环己-1-烯-1-基)-2,3,4,9-四氢-1h-x吨-1-酮的核磁共振氢谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。所列的实施例仅作阐示之用，并表明本发明的精神和范围并非限于此中的细节及其修改案。
本发明所涉及的生物酶及其他试剂均为市场购买，其中试剂均未进一步纯化；核磁共振氢谱(1hnmr)用brukeradvance2b400核磁共振波谱仪进行测定，频率为400mhz，溶剂为氘代氯仿，内标为四甲基硅(tms)。
实施例1
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为97％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。
实施例2
将1mmol苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为93％，m.p.:208-209℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.30(s,1h),11.96(s,1h),7.21(t,j＝7.5hz,2h),7.14–7.09(m,1h),7.07–7.03(m,1h),5.42(s,1h),2.65–2.48(m,4h),2.37(ddt,j＝26.7,17.7,8.6hz,4h),1.99(dq,j＝9.7,4.7hz,4h)。
实施例3
将1mmol对甲氧基苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。16h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为88％，m.p.:186-187℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.37(s,1h),12.08(s,1h),7.03–6.98(m,2h),6.83–6.77(m,2h),5.41(s,1h),3.78(s,3h),2.60(tt,j＝21.6,3.6hz,4h),2.41(ddt,j＝24.8,17.6,8.2hz,4h),2.02(tt,j＝10.6,5.1hz,4h)。
实施例4
将1mmol对叔丁基苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。24h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为82％，m.p.:202-203℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.34(s,1h),12.03(s,1h),7.27(d,j＝8.2hz,2h),7.05–6.99(m,2h),5.43(s,1h),2.67–2.53(m,4h),2.51–2.33(m,4h),2.08–1.97(m,4h),1.29(s,9h)。
实施例5
将1mmol邻硝基苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为黄色固体，收率为85％，m.p.:198-199℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.20(s,2h),7.53–7.42(m,2h),7.32(t,j＝7.7hz,1h),7.24(d,j＝8.0hz,1h),5.96(s,1h),2.58(ddt,j＝33.2,17.9,3.8hz,4h),2.36(ddt,j＝26.8,17.6,8.6hz,4h),1.97(tt,j＝10.2,4.5hz,4h)。
实施例6
将1mmol2-噻吩苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。13h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为85％，m.p.:160-162℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.74(s,1h),12.11(s,1h),7.10(dt,j＝5.1,1.1hz,1h),6.86(dd,j＝5.1,3.5hz,1h),6.64(dt,j＝3.2,1.5hz,1h),5.57(s,1h),2.60(tt,j＝13.6,3.8hz,4h),2.47–2.31(m,4h),2.04–1.93(m,4h)。
实施例7
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol达米酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为93％，m.p.:153-154℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.88(s,1h),11.20(s,1h),7.23(d,j＝8.6hz,2h),7.01(d,j＝7.7hz,2h),5.47(s,1h),2.39(dq,j＝26.3,17.7hz,8h),1.22(s,6h),1.10(s,6h)。
实施例8
将1mmol苯甲醛和2mmol达米酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。24h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为90％，m.p.:194-196℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.92(s,1h),11.09(s,1h),7.30–7.22(m,2h),7.17(t,j＝6.8hz,1h),7.10(d,j＝8.2hz,2h),5.54(s,1h),2.37(dt,j＝26.5,16.6hz,8h),1.24(s,6h),1.10(s,6h)。
实施例9
将1mmol对甲基苯甲醛和2mmol达米酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。30h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为82％，m.p.:191-192℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.92(s,1h),11.04(s,1h),7.08(d,j＝8.0hz,2h),6.98(d,j＝7.6hz,2h),5.50(s,1h),2.52–2.31(m,8h),2.29(s,3h),1.23(s,6h),1.10(s,6h)。
实施例10
将1mmol邻硝基苯甲醛和2mmol达米酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。20h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为86％，m.p.:190-191℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.59(s,1h),7.55(d,j＝9.1hz,1h),7.47(t,j＝8.3hz,1h),7.33(t,j＝7.7hz,1h),7.24(s,1h),6.04(s,1h),2.57–2.15(m,8h),1.16(s,6h),1.02(s,6h)。
实施例11
将1mmol2，6-二氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。32h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为80％，mp:260-262℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35(d,j＝7.8hz,1h),7.09(d,j＝7.8hz,1h),6.99(t,j＝8.0hz,1h),5.52(s,1h),2.65–2.46(m,4h),2.36–2.28(m,4h),2.06–1.90(m,4h).hrms(esi-tof)m/z[m+na]+：385.0369,found:385.0383。
实施例12
将1mmol邻羟基苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。14h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为85％，mp:230-232℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.86(s,1h),7.15(dq,j＝7.9,3.9hz,1h),7.04–6.99(m,3h),4.64(s,1h),2.76(dt,j＝17.8,4.7hz,1h),2.65–2.48(m,3h),2.42(ddd,j＝17.0,11.4,5.5hz,2h),2.35–2.15(m,2h),δ2.11–1.87(m,4h)。
实施例13(对比实施例)
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶df，5mln,n-二甲基甲酰胺，35℃下搅拌反应，18h后，向反应液中加入10ml低温蒸馏水，并用二氯甲烷萃取(2×15ml)。萃取后合并有机相并浓缩，浓缩液通过硅胶色谱柱(石油醚/乙酸乙酯，2/1，v/v)纯化得的目标产物，目标产物为白色固体，收率为46％。
实施例14
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg猪胰脂肪酶，5ml二氯甲烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为83％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。
实施例15
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml二氯甲烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为53％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。
实施例16
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml乙腈，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收乙腈，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为56％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。
实施例17
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，2.5ml正己烷，2.5ml水，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤除水和正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为74％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。
实施例18
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，25℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为78％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。
实施例19
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为84％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。
实施例20
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入25mg脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为70％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。
实施例21
将1mmol2,4-二氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入5mg猪胰腺胰酶，5ml的水-正己烷(水含量70％v/v)，45℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。10h后，过滤回收溶剂，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的产物，收率为82％。
实施例22
将1mmol对氰基苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入2.5mg猪胰腺胰酶，5ml的水-正己烷(水含量30％v/v)，55℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。6h后，过滤回收溶剂，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的产物，收率为91％。
实施例23
将1mmol3-甲氧基-4-羟基苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mgxhlip-f脂肪酶，5ml的甲苯，65℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。2h后，过滤回收溶剂，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的产物，收率为81％。
实施例24
将1mmol对三氟甲基苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mgnovozym435脂肪酶，5ml的四氢呋喃，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。24h后，过滤回收溶剂，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的产物，收率为93％。
实施例25
将1mmol对羟基苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg黑曲霉脂肪酶，5ml的甲基叔丁基醚，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。32h后，过滤回收溶剂，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的产物，收率为89％。
实施例26
将1mmol邻吡啶基苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg酶褶皱假丝酵母脂肪酶，5ml的乙醚，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。12h后，过滤回收溶剂，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的产物，收率为81％。
实施例27
将1mmol2-羟基-3-甲氧基苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg木瓜蛋白酶，5ml的水-正己烷(水含量10％v/v)，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。15h后，过滤回收溶剂，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的产物，收率为83％。
实施例28
将1mmol邻氟苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg脂肪酶tlim，5ml的异丙醇，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。12h后，过滤回收溶剂，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的产物，收率为84％。
实施例29
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg实例1中回收的脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为92％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。
实施例30
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg实例28中回收的脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为90％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。
实施例31
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg实例29中回收的脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为87％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。
实施例32
将1mmol对氯苯甲醛和2mmol1,3-环己二酮，加入10ml反应瓶中，然后加入50mg实例30中回收的脂肪酶tlim，5ml正己烷，35℃下搅拌反应，tlc(二氯甲烷/乙酸乙酯，2/1，v/v)监测反应进程。18h后，过滤回收正己烷，滤渣加二氯甲烷溶解并过滤回收酶，滤液减压旋蒸回收二氯甲烷，滤渣用热水洗涤获得粗产物，粗产物用95％乙醇重结晶获得纯化的目标产物，目标产物为白色固体，收率为85％，mp:203-205℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.33(s,1h),12.03(s,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),7.02(d,j＝8.0hz,2h),5.40(s,1h),2.68–2.52(m,4h),2.50–2.33(m,4h),2.02(dt,j＝13.6,7.6hz,4h)。