一种具有抗衰老作用的新型查尔酮类化合物及其应用的制作方法

本发明属于药物化学领域，具体而言，本发明涉及具有抗衰老作用的新型查尔酮类化合物的化学结构。另外，本发明还涉及该种化合物的抗衰老作用、抗疲劳和免疫增强作用以及用途等。

背景技术：

衰老之谜是一个经久不衰的热门话题，一直以来，人们对人体衰老的原因进行了深入的研究，但迄今为止，衰老的真正机制仍是一个悬而未决的谜题。为探寻衰老的奥秘，产生众多学说，试图从不同的角度阐释衰老的原因，如自由基损伤学说、免疫衰退学说、端粒学说、分子交联学说、神经内分泌学说、线粒体dna损伤学说及近年提出的自噬与衰老的交互作用等等，学说间的取长补短逐渐成为衰老研究的主要趋势。人们将衰老的现代生物学理论可归纳为两类，即程序性学说和损伤性学说。程序性学说包括程序性衰老学说和免疫衰退学说等，认为老化遵循生物个体的“时刻表”，调控作用取决于基因的表达变化，从而影响机体的维护、修复和防御系统；损伤性学说以氧自由基损伤学说和dna损伤学说为代表，强调环境对生物体的影响，不同层次的损伤累积是导致衰老的原因。

1954年harman首次提出氧自由基损伤学说，认为构成细胞和组织的大分子物质，如核酸、脂类、糖及蛋白质等，受到超氧化物和其他自由基的氧化胁迫后，发生不同程度的氧化反应并引发交联、变性、断裂等氧化损伤，最终影响到器官的功能。此外，机体也具有一些天然的抗氧化系统，如dna和rna修复机制，以及过氧化物酶，包括过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物酶等。若抗氧化防御系统功能减退、自由基氧化损伤过度，最终会导致氧化应激，细胞死亡率大大增加，生物体的预期寿命也随之缩短。目前，大量的体内和体外实验结果支持了这一理论。体内实验包括给予啮齿类动物抗氧化药物，测定与年龄相关的氧化指标；体外实验包括抗氧剂对细胞寿命的影响等。过量的自由基不仅导致细胞的损伤甚至死亡，还引起动脉粥样硬化、心脑血管疾病、神经退行性疾病、白内障及肝脏化学毒性等严重疾病。

此外，机体免疫功能的减退是导致衰老和死亡的重要原因，调节和改善老人的免疫功能，是抗衰老的手段之一。现代研究指出，一些药物可以改善机体特异性免疫获得性免疫和非特异性防御机制天然免疫的状态，提高中枢与外周免疫器官的淋巴细胞和巨噬细胞数目，提高淋巴细胞转化率，增强巨噬细胞的吞噬功能，促进抗体的形成，延长抗体的生存时间，促进白细胞介素的产生及其基因表达，诱生干扰素，从而发挥防御、自稳和免疫监视作用，保障健康增寿。因此，鉴于现有的治疗抗衰老的药物均有各自的缺点，以及临床的迫切需要，进一步研发新型具有增强免疫作用的抗衰老药物具有重要意义。

查尔酮是指分子中含有1,3-二苯基丙烯酮结构的化合物。广泛分布于多种中药的根、茎和叶中。由于其分子结构具有较大柔性，能与多种受体结合，是一类重要的有机医药中间体，呈现出广泛的生物活性，如抗肿瘤、抑制和清除氧自由基、抗菌、抗寄生虫、抗病毒、抗溃疡等。迄今已有多种查尔酮类化合物作为药物用于临床，如利胆药甲氧查耳酮和抗溃疡病药索法酮，抗病毒化合物及其前药，以及用于治疗静脉舒张的橙皮苷甲基查尔酮和橙皮苷三甲基查尔酮。查尔酮类化合物表现出诱人的发展前景，近些年来对其生物活性方面的研究极为活跃。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是提供新的抗衰老化合物类型及其药物。

本发明的目的之一是提供一种具有免疫增强、抗衰老作用的新型查尔酮类化合物。

本发明的目的之二是提供一种新型查尔酮化合物的制备方法及免疫增强、抗氧化活性。

具体而言，本发明提供了式(b36)所示的化合物或者其药学上可接受的盐：

化合物(b36)为：

(e)-1-[3-(dimethylamino)phenyl]-3-[4-hydroxy-3-(3-methylbut-3-en-2-yl)phenyl]-prop-2-en-1-one

(e)-1-[3-(二乙胺基)苯基]-3-[4-羟基-3-(3-甲基-3-丁烯-2基)苯基]-2-丙烯基-1-酮

¹hnmr(cdcl3,300mhz):δ7.75(d,1h,j＝15.6hz,hβ),7.47(dd,1h,j1＝8.1hz,j2＝2.1hz,h2),7.41(s,1h,h2'),7.38(d,1h,j＝15.6hz,hα),7.29-7.33(m,2h,h5',h6'),6.95(t,1h,j＝2.4hz,h4'),6.93(t,1h,j＝2.1hz,h6),6.85(d,1h,j＝8.1hz,h3),5.93(s,1h,oh),5.13[s,1h,arch(ch3)c(ch3)ch2],5.08[d,1h,j＝0.6hz,arch(ch3)c(ch3)ch2],3.61(q,1h,j＝6.9hz,arch(ch3)c(ch3)ch2],3.02[s,6h,n(ch3)2],1.68[s,3h,arch(ch3)c(ch3)ch2],1.46[d,3h,j＝6.9hz,arch(ch3)c(ch3)ch2].

所述的化合物，其用于衰老及氧化损伤等相关疾病。

用于抗衰老或与氧化损伤相关的疾病的药物组合物，其包所述的化合物和药学上可接受的载体。所述的药物组合物，其被制成片剂、胶囊、口服液、注射剂、粉剂、膏剂或外用药液。

所述的化合物在制备用于抗衰老或与氧化损伤相关的疾病的药物中的应用。

有益效果

在本发明中，我们首先利用化学方法合成了一种新型的查尔酮类化合物b36。利用果蝇寿命相关行为学实验，证实b36显著延长果蝇寿命，及缓解亚急性氧化损伤实验中果蝇的氧化损伤(详情见实施例1)。利用正常小鼠和免疫低下小鼠碳粒廓清实验，在整体动物层次上的验证b36的免疫增强作用(详情见实施例2)。b36可以明显延长小鼠负重游泳时间(详情见实施例3)。

由于查尔酮类化合物具有特殊的分子结构和广泛的生物活性，通过各种结构修饰，改变化合物的理化性质和药理学活性，如对查尔酮结构中连接a、b环的烯酮链进行修饰等，特别是在降低毒副作用，提高选择性，改善水溶性等方面起到良好的作用。本发明人经过长期和艰苦的研究实验，设计、合成最终得了一系列新型查尔酮类化合物，并经药理活性检测发现它们具有良好的抗衰老、抗疲劳和免疫增强活性等活性。随着对查尔酮类化合物研究的不断深入，将开发出更多查尔酮类新药用于临床造福人类。

附图说明：

这里所列举的化合物只是为了更好地说明本发明的化合物类别和结构形式，并非限制本发明。

图1说明合成的化合物b36的化合物结构。

具体实施方式

具有下列化学结构的化合物及其可药用盐：

化合物(b36)为：

(e)-1-[3-(dimethylamino)phenyl]-3-[4-hydroxy-3-(3-methylbut-3-en-2-yl)phenyl]-prop-2-en-1-one

(e)-1-[3-(二乙胺基)苯基]-3-[4-羟基-3-(3-甲基-3-丁烯-2基)苯基]-2-丙烯基-1-酮所述的化合物，其用于衰老及氧化损伤等相关疾病。

用于抗衰老或与氧化损伤相关的疾病的药物组合物，其包所述的化合物和药学上可接受的载体。所述的药物组合物，其被制成片剂、胶囊、口服液、注射剂、粉剂、膏剂或外用药液。

所述的化合物在制备用于抗衰老或与氧化损伤相关的疾病的药物中的应用。

1b36对果蝇寿命相关行为学指标考察结果

1.1b36对果蝇寿命的影响

在培养基中添加不同剂量(高0.250％、中0.125％、低0.0625％)的b36，对照组则给予正常培养基饲养。参照文献方法加以改进对果蝇行为学考察如下：收集12h内羽化成虫的果蝇，随机分为对照组和给药组，每组雌雄各100只，在25±4℃、相对湿度为60±10％、光/暗时间为12/12h的恒温恒湿智能培养室中培样。每4天更换一次培养基并观察记录果蝇的情况。计算平均寿命，最高寿命。

表1b36对果蝇寿命的影响(n＝100)

注：与空白对照组比较^*p<0.05,^**p<0.01.下同.

与果蝇空白对照组相比，各给药组的果蝇平均寿命和最长寿命，均有不同程度的延长，与对照组相比，高中剂量给药组雌雄果蝇平均寿命均呈现极显著差异(p<0.01)，低剂量组平均寿命也呈现极显著性差异(p<0.01)。说明果蝇终身补充一定剂量的b36，可延长自身寿命。

1.2b36对果蝇亚急性氧化损伤实验

取30日龄果蝇，每组雌雄各100只，分别给予含20％的h2o2的6％的葡萄糖溶液，每5小时记录一次，直至果蝇全部死亡。

表2b36对果蝇亚急性氧化损伤的作用(n＝100)

在亚急性氧化损伤实验中，与空白对照组相比高剂量组雌雄平均存活时间呈现极显著性差异(p<0.01)；中剂量组呈现显著性差异(p<0.05)；低剂量组无显著性差异。

2b36抗疲劳作用实验

2.1实验方法

动物随机分组，分为小、中、大剂量组和生理盐水对照组，每组15只。b36小、中、大剂量浓度依次为5，10，20mg/kg，对照组给予生理盐水，按0.2ml/10g每天灌胃1次，连续10d。第11天时，进行小鼠负重游泳实验，以自身体重6％的铅皮捆绑于小鼠尾根，置25℃水中游泳，记录小鼠开始游泳至死亡时间。若剂量组小鼠游泳时间显著长于对照组，则可认为该样品可以增强小鼠负重游泳能力。实验数据以表示，采用spss17.0统计软件进行单因素方差分析。

2.2实验结果

tab.3b36对小鼠游泳时间的影响

与对照组相比，b36各给药组均可以明显延长小鼠负重游泳时间，且差异均有统计学意义(p<0.01，p<0.05和p<0.001)。结果表明，在本实验条件下，b36能够增强小鼠的负重游泳能力。

3.增强免疫作用

3.1对正常小鼠单核细胞吞噬作用及免疫器官的影响

3.1.1实验材料

样品：b36

实验动物：健康balb/c小鼠

统计学处理：采用spss17.0统计软件处理实验数据，结果以表示，用组间t检验进行统计比较，p<0.05有统计学意义。

3.1.2实验方法

取体重18～22g的雌雄各半健康balb/c小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，分别为空白组、b36高剂量组、b36中剂量组、b36低剂量组。空白对照组给予蒸馏水；各组给药体积均为0.2ml/10g。口服灌胃每天1次，连续给药10天，末次给药30min后小鼠尾静脉注射20％印度墨汁0.1ml/10g，注射后分别于2min、12min自眼静脉丛中取血20μl，并溶于2.0ml0.1％碳酸钠溶液中，摇匀并放置2h，以碳酸钠溶液作空白对照，于波长680nm处测定光密度值(od)。然后将小鼠颈椎脱臼处死，分别取肝脏、胸腺和脾脏并称重，根据动物体重和脾重计算吞噬指数。依照下列公式计算廓清指数k、脾指数与胸腺指数。

统计方法：所有数据以表示，组间比较用t检验。

3.1.3实验结果

对正常小鼠单核细胞吞噬作用和对免疫器官的影响实验结果见tab.4。

tab.4b36对正常小鼠单核细胞吞噬作用

^*p<0.05and^**p<0.01

由tab.4数据可知：与空白对照组比较，b36组高剂量组k值，有极显著性差异(p<0.01)，b36组中剂量组有显著性差异(p<0.05)，以上结果表明b36组分对单核细胞吞噬作用具有增强作用，且具有较明显的剂量依赖性，表明b36能促进小鼠网状内皮系统的增殖，提高机体的非特异性免疫功能。与空白对照组对比，b36组分组和阳性药物组小鼠的脾指数和胸腺指数升高明显，以上结果说明b36组分对小鼠免疫器官的生长具有促进作用。

3.2对免疫低下小鼠单核细胞吞噬作用及免疫器官的影响

3.2.1实验材料

样品：b36

实验动物：健康balb/c小鼠

3.2.2实验方法

取体重18～22g的雌雄各半健康balb/c小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，分别为空白组、b36高剂量组、b36中剂量组、b36低剂量组。空白对照组给予蒸馏水；各组给药体积均为0.2ml/10g。给药组每日口服灌胃1次，连续7天，同时于试验第1、3、5天，分别在模型组、各给药组小鼠皮下注射环磷酰胺(0.1ml/10g)80mg/kg，复制免疫功能低下模型。空白对照组则皮下注射等体积蒸馏水。于末次给药后24小时，小鼠尾静脉注射20％印度墨汁0.1ml/10g，注射后分别于2min、12min自眼静脉丛中取血20μl，并溶于2.0ml0.1％碳酸钠溶液中，摇匀并放置2h，以碳酸钠溶液作空白对照，于波长680nm处测定光密度值(od)。然后将小鼠颈椎脱臼处死，分别取肝脏、胸腺和脾脏并称重，根据动物体重和脾重计算吞噬指数。

3.2.3实验结果

对免疫低下小鼠单核细胞吞噬作用和对免疫器官的影响实验结果见tab.5。

tab.5b36对免疫低下小鼠单核细胞吞噬作用

^*p<0.05and^**p<0.01

由tab.5数据可知：与模型组进行对比，b36组高中剂量组k值升高有显著性差异(p<0.05)，结果表明b36组对免疫低下小鼠单核细胞吞噬作用具有增强作用。与模型对照组对比，b36组中高剂量组小鼠的脾指数和胸腺指数升高明显，以上结果说明b36组分对免疫低下小鼠免疫器官的生长具有促进作用。

结论：

综上所述，b36对单核细胞吞噬作用具有增强作用，显著升高正常小鼠和免疫低下小鼠的脾指数和胸腺指数，表明b36组分具有显著的增强免疫作用。b36对果蝇寿命相关行为学指标考察结果显示，b36可以显著延长果蝇平均寿命和最长寿命，b36可以显著延长亚急性氧化损伤实验中果蝇的平均存活时间。此外，b36可以明显延长小鼠负重游泳时间。因此，查尔酮类化合物b36在增强免疫、抗衰老、抗氧化和抗疲劳等方面体现明显优势。