3-乙烯基吲唑类衍生物及其制备方法和用途与流程

本发明涉及3-乙烯基吲唑类衍生物及其制备方法和用途，属于化学医药领域。

背景技术：

目前治疗癌症的主要方法有：手术、放疗、化疗等传统疗法，以及靶向疗法，包括pd1/pd-l1、car-t疗法等免疫疗法，小分子靶向药物、单克隆抗体和抗体偶联药物等。传统癌症治疗方法效果有限，容易出现复发、转移或毒副作用，且对患者生活质量有较大影响。分子靶向药物具有一定特异性，其中小分子靶向药物一直是包括癌症等在内的疾病治疗的重要治疗方式。

受体酪氨酸激酶(receptortyrosinekinases,rtks)作为分子靶向药物的一类靶点，是位于细胞膜上的受体蛋白，可以将胞外信号传导至细胞内。大多数具有致癌作用的rtks在正常组织中的活性或表达水平很低，但在癌细胞中过度活化或表达上调。受体酪氨酸激酶对肿瘤血管生成、肿瘤细胞存活、增殖、分化、迁移等发挥重要调控作用。

成纤维生长因子受体(fibroblastgrowthfactorreceptors,fgfrs)是一种位于细胞膜上的受体酪氨酸激酶，能与配体fgf结合后发生二聚化和自磷酸化而激活，进而激活pi3k-akt、ras-raf-mapk、jak-stat和plcγ四条信号通路。fgfr在胚胎发育、组织修复、维持体内稳态等正常生理过程中发挥重要作用。fgf/fgfr的异常与癌症和骨骼疾病等有密切联系。fgfr扩增、突变和染色体易位使fgf/fgfr信号通路发生异常，促进肿瘤的发生、发展、转移和耐药。在肿瘤形成、发展、转移、复发等各个阶段，fgfr信号通路都发挥着一定的调控作用，影响癌症的进展和预后。fgfr的过度活化和过表达激活下游信号通路或者自分泌-旁分泌信号，产生旁路代偿作用，使肿瘤对放疗、化疗、靶向治疗等疗法耐药。因此，靶向fgfr是治疗癌症的重要策略之一。

fgfr除了与癌症密切相关，近年来也有报道证明它与肺纤维化有着密切的关系。在ipf中，成纤维细胞的增殖和基质沉积的增加会导致肺损伤和肺功能的恶化。急性肺损伤和肺纤维化患者的肺泡灌洗液和组织中均发现了高水平的fgf2。表达fgf2的肥大细胞积聚在ipf的细胞外基质沉积区和平滑肌细胞/肌成纤维细胞样细胞增殖的区域。fgf2在纤维化形成中具有重要作用，其直接参与了博莱霉素诱导的小鼠肺损伤后的细胞增殖和纤维增生。ipf中血管新生的增加可能是由fgfr信号通路中的fgf2/fgfr2介导。fgf1/fgfr在ipf患者的发病部位大量表达，提示ipf患者出现异常fgf1/fgfr信号后，可以通过促进成纤维细胞的迁移和増加mapk信号导致肺纤维化的发生。在肺纤维化过程中，tgf-β1诱导成纤维细胞中的α-sma的表达上调和释放fgf2，而fgfr2c可通过erk1/2及smad3通路抑制肺纤维化小鼠的成纤维细胞增殖。同时，fgfr在肝纤维化中具有重要作用也被报道，所以，靶向fgfr也可能是治疗肺纤维化和肝纤维化的新的策略。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供3-乙烯基吲唑类衍生物及其制备方法和用途。

本发明提供了式ⅰ所示的化合物、其光学异构体、化合物或其光学异构体药学上可接受的盐：

其中，环a选自取代或未取代的苯基、取代或未取代的六元并五元芳基；

r1、r2、r3独立选自h、卤素、取代或未取代的烷基；

环b选自取代或未取代的5～8元芳基。

进一步地，当环a为取代的苯基时，含有至少一个选自下组的取代基：卤素、未取代的烷基、卤素取代的烷基、未取代的烷氧基、卤素取代的烷氧基、羟基。

优选地，所述取代的苯基含有至少一个选自下组的取代基：卤素、未取代的c1～c6烷基、卤素取代的c1～c6烷基、未取代的c1～c6烷氧基、卤素取代的c1～c6烷氧基、羟基。

优选地，所述取代的苯基含有至少一个选自下组的取代基：卤素、未取代的c1～c2烷基、卤素取代的c1～c2烷基、未取代的c1～c2烷氧基、卤素取代的c1～c2烷氧基、羟基。

优选地，所述取代的苯基含有至少一个选自下组的取代基：氟、氯、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、羟基。

进一步优选地，所述取代的苯基选自：

优选地，所述取代的苯基含有至少一个选自下组的取代基：氟、氯、甲氧基。

进一步优选地，所述取代的苯基选自：

进一步地，当环a为取代或未取代的六元并五元芳基时，所述六元并五元芳基中，六元芳基含有0～2个杂原子。

优选地，六元芳基为苯基。

所述六元并五元芳基中，五元芳基含有至少一个杂原子氮。

优选地，五元芳基选自取代或未取代的咪唑基、恶唑基或吡咯基。

优选地，五元芳基选自其中，r4～r9独立选自h、取代或未取代的烷基。

优选地，r4～r9独立选自h、未取代的c1～c6烷基或卤素取代的c1～c6烷基。

优选地，r4～r9独立选自h、甲基或乙基。

优选地，r5选自h、甲基或乙基，r4、r6、r7、r8、r9均为h。

进一步优选地，所述六元并五元芳基选自：

进一步地，r1、r2、r3独立选自h、卤素、未取代的c1～c6烷基或卤素取代的c1～c6烷基。

优选地，r1、r2、r3独立选自h、卤素或未取代的c1～c3烷基。

优选地，r1、r2、r3独立选自h、氟、氯或甲基。

进一步优选地，r2选自h、氟、氯或甲基，r1、r3均为h。

进一步优选地，r2选自h或甲基，r1、r3均为h。

进一步地，环b选自取代或未取代的5～6元芳基。

优选地，所述芳基含有0～2个杂原子。

优选地，所述杂原子为氮。

优选地，所述芳基选自苯基、吡啶基、嘧啶基或吡唑基。

进一步地，当环b为取代的6元芳基时，含有至少一个选自下组的取代基：卤素、未取代的烷基、卤素取代的烷基、未取代的烷氧基、卤素取代的烷氧基、-c(＝o)or10、-x-nr11r12，其中，r10选自取代或未取代的烷基，x选自-(ch2)n-、-c(＝o)-或-so2-，n为0～6的整数，r11、r12独立选自取代或未取代的烷基，或者，r11与r12相连形成脂环。

优选地，当环b为取代的6元芳基时，含有至少一个选自下组的取代基：卤素、未取代的c1～c6烷基、卤素取代的c1～c6烷基、未取代的c1～c6烷氧基、卤素取代的c1～c6烷氧基、-c(＝o)or10、-x-nr11r12，其中，r10选自取代或未取代的c1～c6烷基，x选自-(ch2)n-、-c(＝o)-或-so2-，n为0～6的整数，r11、r12独立选自取代或未取代的c1～c6烷基，或者，r11与r12相连形成6元脂环。

优选地，当环b为取代的6元芳基时，含有至少一个选自下组的取代基：卤素、甲基、三氟甲基、甲氧基、三氟甲氧基、-c(＝o)or10、-x-nr11r12，其中，r10选自取代或未取代的c1～c6烷基，x选自-(ch2)n-、-c(＝o)-或-so2-，n为0～3的整数，r11、r12独立选自取代或未取代的c1～c6烷基，或者，r11与r12相连形成6元脂环，所述6元脂环含有2个杂原子。

优选地，当环b为取代的6元芳基时，仅含有一个选自下组的取代基：-c(＝o)or10、-x-nr11r12，其中，r10选自未取代的c1～c6烷基或卤素取代的c1～c6烷基，x选自-(ch2)n-或-c(＝o)，n为0～3的整数，r11、r12独立选自未取代的c1～c6烷基或卤素取代的c1～c6烷基，或者，r11与r12相连形成6元脂环，所述6元脂环含有2个杂原子，所述杂原子为氮或氧。

进一步优选地，r10为未取代的c1～c6烷基。

进一步优选地，r10为甲基。

进一步优选地，n为0或1。

进一步优选地，r11、r12独立选自未取代的c1～c6烷基，或者，r11与r12相连形成取代或未取代的吗啉基、哌嗪基。

进一步优选地，r11、r12均为甲基。

进一步优选地，所述取代的吗啉基、哌嗪基含有至少一个选自下组的取代基：取代或未取代的c1～c6烷基、c1～c6烷氧羰基、苄氧羰基、芴氧羰基。

进一步优选地，所述取代的吗啉基、哌嗪基含有至少一个选自下组的取代基：甲基、叔丁氧羰基。

进一步优选地，r11与r12相连形成其中，r13、r15独立选自h或甲基，r14选自h、甲基或叔丁氧羰基。

进一步优选地，当环b为取代的6元芳基时，选自：

进一步地，当环b为未取代的6元芳基时，选自

进一步地，环b为取代的吡唑基，含有至少一个选自下组的取代基：未取代的烷基、卤素取代的烷基、羟基取代的烷基。

优选地，所述取代的吡唑基含有至少一个选自下组的取代基：未取代的c1～c6烷基、卤素取代的c1～c6烷基、羟基取代的c1～c6烷基。

优选地，所述取代的吡唑基仅含有一个取代基，所述取代基为羟基取代的c1～c6烷基。

优选地，所述取代的吡唑基仅含有一个取代基，所述取代基为

进一步优选地，环b为

进一步地，环b选自：

进一步地，所述化合物选自：

本发明提供了所述的化合物、其光学异构体、化合物或其光学异构体药学上可接受的盐的制备方法，包括如下步骤：

a、化合物1与化合物2在钯催化剂作用下偶联，得到中间体ⅰ：

其中，y为卤素，r16、r17独立选自h、取代或未取代的烷基，或者，r16与r17相连形成脂环；

b、中间体ⅰ在碱存在的条件下与酸酐和亚硝酸酯反应，得到中间体ⅱ：

所述亚硝酸酯为r18选自取代或未取代的烷基，r21选自取代或未取代的烷基；

c、中间体ⅱ脱除酰基，得到中间体ⅲ：

d、中间体ⅲ经卤代，得到中间体ⅳ：

e、中间体ⅳ与化合物3在钯催化剂作用下偶联，即得：

其中，r19、r20独立选自h、取代或未取代的烷基，或者，r19与r20相连形成脂环。

优选地，y为溴。

优选地，r16、r17独立选自h或未取代的c1～c6烷基，或者，r16与r17相连形成5元脂环。

进一步优选地，化合物2为

优选地，r18为未取代的c1～c6烷基。

进一步优选地，r18为异戊基。

优选地，r21为未取代的c1～c6烷基。

进一步优选地，r21为甲基。

优选地，r19、r20独立选自h或未取代的c1～c6烷基，或者，r19与r20相连形成5元脂环。

进一步优选地，化合物3为

进一步地，所述的制备方法满足以下至少一项：

步骤a所述钯催化剂为醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、三(二亚苄基茚丙酮)二钯中一种或两种以上；

步骤a向反应体系中加入碱，所述碱为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯中一种或两种以上；

步骤a中化合物1：化合物2：碱：钯催化剂的摩尔配比为1：(1.1～1.5)：(2.0～3.0)：(0.003～0.010)；

步骤a的反应溶剂为二氧六环、水、甲苯、dmf、正丁醇、异丙醇、仲丁醇中一种或两种以上；

优选地，步骤a的反应溶剂为1,4-二氧六环：水体积比为(4～8)：1的混合溶剂；

步骤a的反应温度为90～110℃；

步骤a的反应时间为5～10h；

步骤a于n2保护下反应；

步骤b将中间体i溶于反应溶剂中，加入碱和酸酐充分搅拌，加入亚硝酸酯反应，得到中间体ⅱ；

步骤b所述碱为乙酸钾；

步骤b中中间体i：碱：酸酐：亚硝酸酯的摩尔配比为1：(1.1～1.5)：(1.8～2.5)：(3～5)；

步骤b的反应溶剂为甲苯；

步骤b加入亚硝酸酯回流反应4～8h；

步骤c在酸性条件下反应；

优选地，步骤c向反应体系中加入盐酸；

优选地，步骤c向反应体系中加入6nhcl；

步骤c的反应溶剂为醇系溶剂；

优选地，步骤c的反应溶剂为甲醇；

步骤c回流反应1～2h；

当z为碘时，步骤d将中间体ⅲ溶于反应溶剂中，加入碱，将i2溶于反应溶剂中滴加至反应液，反应得到中间体ⅳ；

优选地，所述碱为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾中一种或两种以上；

步骤d中中间体ⅲ：i2：碱的摩尔配比为1：(1.5-2.0)：2.0；

步骤d的反应溶剂为dmf；

步骤d的反应温度为25～80℃；

步骤d的反应时间为2～10h；

步骤e所述钯催化剂为醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、三(二亚苄基茚丙酮)二钯中一种或两种以上；

步骤e向反应体系中加入碱，所述碱为diea、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、磷酸钾、碳酸铯中一种或两种以上；

步骤e中中间体ⅳ：化合物3：碱：钯催化剂的摩尔配比为1：(1.1～1.5)：(2.0～3.0)：(0.003～0.010)；

步骤e的反应溶剂为二氧六环、水、甲苯、dmf、正丁醇、异丙醇、仲丁醇中一种或两种以上；

优选地，步骤e的反应溶剂为1,4-二氧六环：水体积比为(4～8)：1的混合溶剂；

步骤e的反应温度为90～110℃；

步骤e的反应时间为5～10h；

步骤e于n2保护下反应。

本发明提供了所述的化合物、其光学异构体、化合物或其光学异构体药学上可接受的盐在制备fgfr激酶抑制剂类药物中的用途。

优选地，所述药物是fgfr1、fgfr2和/或fgfr3激酶抑制剂。

本发明提供了所述的化合物、其光学异构体、化合物或其光学异构体药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。

优选地，所述癌症为乳腺癌、肺癌或胃癌。

进一步优选地，所述肺癌为非小细胞肺癌。

本发明提供了所述的化合物、其光学异构体、化合物或其光学异构体药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防器官纤维化的药物中的用途。

优选地，所述器官纤维化为肺纤维化或肝纤维化。

本发明提供了药物组合物，它是以所述的化合物、其光学异构体、化合物或其光学异构体药学上可接受的盐为活性成分，加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂；优选地，所述制剂为口服制剂或注射制剂。

术语定义：

本发明提供的化合物和衍生物可以根据iupac(国际纯粹与应用化学联合会)或cas(化学文摘服务社，columbus，oh)命名系统命名。

术语“烷基”是直链或支链的饱和烃基的基团。c1～c6烷基的实例包括但不限于甲基(c1)、乙基(c2)、正丙基(c3)、异丙基(c3)、正丁基(c4)、叔丁基(c4)、仲丁基(c4)、异丁基(c4)、正戊基(c5)、3-戊基(c5)、戊基(c5)、新戊基(c5)、3-甲基-2-丁基(c5)、叔戊基(c5)和正己基(c6)。

术语“烷氧基”是指基团-or，其中r是上文所定义的烷基。c1～c6烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基和1,2-二甲基丁氧基。

术语“芳基”是指在芳族环系中包含或不包含杂原子的4n+2芳族环系的基团，其中，杂原子选自氮、氧和/或硫。

术语“脂环”是指饱和或部分不饱和的环状烃基基团。

术语“烷氧羰基”是指基团r-o-c(o)-，其中r是上文所定义的烷基，优选r是c1～c6烷基(即本发明所述c1～c6烷氧羰基)。其例子包括但不限于甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、异丙氧羰基、丁氧羰基、异丁氧羰基、叔丁氧羰基。

术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增溶剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明所述药学上可接受的辅料，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质。

本发明所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明药物组合物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。

本发明提供了一类结构新颖的3-乙烯基吲唑类衍生物。生物学实验证明，本发明提供的化合物对fgfr激酶的活性具有显著抑制作用，能有效抑制乳腺癌、肺癌、胃癌等多种癌细胞的增殖，具有广谱的抗癌作用；此外，对成纤维细胞的增殖也表现出明显的抑制作用，效果与目前临床上用于治疗肺纤维化的药物尼达尼布相当，抗纤维化疗效显著。本发明为抗癌、抗纤维化药物的开发和应用提供了新的选择。

附图说明

图1为本发明化合物4-20(c)抑制博来霉素诱导的肺纤维化的肺部结构变化-he(苏木精-伊红染色)图；

图2为本发明化合物4-20(c)抑制博来霉素诱导的肺纤维化的胶原沉积变化-masson(马氏染色)图；

图3为本发明化合物4-22(a)抑制博来霉素诱导的肺纤维化的肺部结构变化-he图；

图4为本发明化合物4-22(a)抑制博来霉素诱导的肺纤维化的胶原沉积变化-masson图。

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

实施例1本发明化合物的制备

取化合物1-1(1.86g,10mmol)，化合物2-1(3.17g,12mmol)，pd(dppf)cl2(5mmol％)，碳酸钾(2.76g,20mmol)，加入1,4-二氧六环与水(体积比为4:1)的混合溶剂50ml中，n2置换后于100℃下反应6小时。tlc监测反应，反应完全后将反应液减压蒸除，剩余物用二氯甲烷与甲醇混合溶剂溶解，经硅藻土过滤，滤液浓缩后，经柱层析(pe:ea＝2:1)得到中间体ⅰ-1(浅黄色固体，73％)，msm/z(esi)：244.1[m+h]⁺。

将中间体ⅰ-1(1.21g,5mmol)溶于甲苯30ml中，加入乙酸钾(0.59g,6mmol)，乙酸酐(0.94ml,10mmol)，室温搅拌1h后加入亚硝酸异戊酯(2ml,15mmol)，回流5h后tlc监测反应。反应完全后将溶剂减压浓缩，剩余物加水搅拌后用ea萃取，有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，柱层析(pe：ea＝4:1)得中间体ⅱ-1(浅黄色固体，57％)，msm/z(esi)：297.2[m+h]⁺。

将中间体ⅱ-1(1.48g,5mmol)溶于甲醇50ml中，加入6nhcl(20ml)，回流1h后tlc监测。反应完毕后减压浓缩溶剂，剩余物用碳酸氢钠水溶液调节ph至8，将析出的固体过滤干燥，得到中间体ⅲ-1(浅棕色固体，69％)，msm/z(esi)：255.1[m+h]⁺。

将中间体ⅲ-1(1.27g,5mmol)溶于dmf10ml中，加入碳酸钾(1.38g,10mmol)，室温搅拌下加入i2(1.9g,7.5mmol)，65℃下反应8h后tlc监测。反应完毕后用保险粉的饱和水溶液淬灭反应，将反应液倒入水中，有白色固体析出，将固体过滤后干燥，得中间体ⅳ-1(浅黄色固体，92％)，msm/z(esi)：381.0[m+h]⁺。

取4-溴-n,n-二甲基苄胺(642mg,3mmol)，乙烯基硼酸频哪醇酯(612μl,3.6mmol)，diea(884μl,5.4mmol)，加入干燥甲苯20ml，n2置换后于95℃下反应6小时.tlc监测反应。反应完全后减压蒸除溶剂，剩余物用二氯甲烷与甲醇混合溶剂溶解，经硅藻土过滤，滤液浓缩后，经薄层色谱层析(dcm:meoh＝15:1)得到化合物3-1(浅黄色固体，77％)，msm/z(esi)：288.2[m+h]⁺。

取中间体ⅳ-1(190mg,0.5mmol)，化合物3-1(172mg,0.6mmol)，pd(dppf)cl2(5mmol％)，碳酸钾(138mg,1mmol)，加入1,4-二氧六环与水(体积比4:1)的混合溶剂15ml中，n2置换后于100℃下反应8小时。tlc监测反应，反应完全后将反应液减压蒸除，剩余物用二氯甲烷与甲醇混合溶剂溶解，经硅藻土过滤，滤液浓缩后，经薄层色谱层析(dcm:meoh＝10:1)得到化合物4-1(浅黄色固体，17％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.20(s,1h),8.23(d,j＝8.4hz,1h),7.77–7.72(m,1h),7.67(d,j＝8.0hz,2h),7.57–7.47(m,3h),7.32(d,j＝8.0hz,2h),6.87(d,j＝2.3hz,2h),6.55(t,j＝2.2hz,1h),3.84(s,6h),3.40(s,2h),2.16(s,6h).

使用类似方法可得到以下化合物：

化合物4-2

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.08(s,1h),8.19(d,j＝8.5hz,1h),7.72(s,1h),7.57(d,j＝8.5hz,2h),7.51–7.39(m,2h),7.34(d,j＝16.7hz,1h),6.96(d,j＝8.5hz,2h),6.86(d,j＝2.2hz,2h),6.54(t,j＝2.2hz,1h),3.84(s,6h),3.20(t,j＝5.0hz,4h),2.49–2.41(m,4h),2.24(s,3h).

化合物4-3

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.35(s,1h),8.28(d,j＝8.5hz,1h),7.99(d,j＝8.1hz,2h),7.88(d,j＝8.2hz,2h),7.75(d,j＝17.2hz,2h),7.62(d,j＝16.7hz,1h),7.53(dd,j＝8.5,1.5hz,1h),6.88(d,j＝2.2hz,2h),6.56(d,j＝2.3hz,1h),3.87(s,3h),3.85(s,6h).

化合物4-4

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.28(s,1h),8.26(d,j＝8.4hz,1h),7.81(d,j＝8.0hz,2h),7.75(s,1h),7.66(d,j＝16.8hz,1h),7.57(d,j＝16.7hz,1h),7.52(dd,j＝8.5,1.5hz,1h),7.45(d,j＝8.2hz,2h),6.87(d,j＝2.2hz,2h),6.55(t,j＝2.2hz,1h),3.84(s,6h),3.40(s,8h),1.42(s,9h).

化合物4-6

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.33(s,1h),8.28(d,j＝8.5hz,1h),7.86–7.76(m,3h),7.67(d,j＝16.7hz,1h),7.62–7.51(m,2h),7.45(d,j＝7.9hz,2h),7.23–7.13(m,2h),6.91–6.83(m,1h),4.08(s,4h),3.87(s,6h),3.09(s,2h),1.41(s,9h),1.10(d,j＝19.9hz,6h).

化合物4-8

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.10(s,1h),8.15(d,j＝8.5hz,1h),8.01(s,1h),7.84(s,1h),7.76(s,1h),7.49(d,j＝8.5hz,1h),7.38(d,j＝16.7hz,1h),7.28–7.11(m,3h),6.86(dt,j＝10.9,2.3hz,1h),4.93(s,1h),4.16(t,j＝5.6hz,2h),3.87(s,6h),3.77(q,j＝5.5hz,2h).

化合物4-9

¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.40(s,1h),8.28(d,j＝8.5hz,1h),7.82(d,j＝8.1hz,3h),7.65(t,j＝17.6hz,2h),7.58–7.51(m,1h),7.47(d,j＝7.9hz,2h),7.24–7.11(m,2h),6.87(d,j＝10.9hz,1h),3.87(s,6h),3.63(s,4h),3.00(s,4h)2.20(s,3h).

实施例2本发明化合物的制备

取化合物4-4(50mg)，加入hcl/1,4-二氧六环溶液10ml，室温下搅拌5h，浓缩溶剂，剩余物用甲醇溶解后经薄层色谱层析(dcm:meoh＝8:1)得化合物4-5(浅棕色固体，52％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.58(s,2h),8.26(d,j＝8.5hz,1h),7.83(d,j＝7.9hz,2h),7.77(s,1h),7.68(d,j＝16.7hz,1h),7.58(d,j＝16.7hz,1h),7.51(dd,j＝7.9,4.4hz,3h),6.87(d,j＝2.2hz,2h),6.55(t,j＝2.2hz,1h),3.84(s,6h),3.78–3.63(m,4h),3.16(s,4h).

使用类似方法可以得到以下化合物：

化合物4-7

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.35(s,1h),8.28(d,j＝8.5hz,1h),7.84–7.78(m,3h),7.66(d,j＝16.8hz,1h),7.61–7.51(m,2h),7.40(d,j＝8.0hz,2h),7.23–7.13(m,2h),6.87(dt,j＝10.9,2.3hz,1h),3.87(s,6h),3.63–3.35(m,3h),2.69(d,j＝8.5hz,3h),1.10–0.80(m,7h).

下表1中化合物的制备方法与上述化合物类似。

表1本发明部分化合物的质谱数据

以下通过生物学实验证明本发明的有益效果。

一、实验仪器及材料

主要生物实验仪器和设备如下所述。超净工作台bhc-1000iia/b3：苏净安泰生物技术公司；恒温水浴箱polyscience9505：polyscience公司；灭菌锅mls-3780：sanyo公司；烘箱：binder公司；超纯水仪milli-qintegral10：millipore公司；酶标仪multiscanmk3、细胞培养箱、低速离心机sorvallst1：thermofisher公司；centrifuge5415c超速离心机：德国eppendorf公司；nuairenu-425-600e生物安全柜：美国nuaire公司；bcd-215yd型普通冰箱：中国haier公司；sanyo(-80℃)超低温冰箱：日本三洋电器集团；rocker51702摇床：美国coleparmer公司；96孔细胞培养板：costacorning公司；普通光学显微镜：olympus公司；移液枪：thermo公司；ph计：coring公司；高压灭菌锅：sanyo公司。

实验中采用的细胞系购自美国atcc公司。培养细胞所用各种必需品购自gibcobrl公司，包括dmem培养基、rpmi1640培养基、胎牛血清(fbs)和胰酶。四甲基偶氮唑蓝(mtt)、二甲基亚砜(dmso)购自美国sigma公司。

二、实验方法

1、激酶测试

用dmso将化合物稀释至反应中最终所需最高抑制剂浓度的50倍。将100μl化合物稀释液转移到96孔板中。在同一96孔板的两个空白孔中加入100μldmso。该96孔板作为源板。将10μl化合物从源板转移到的96孔板中，作为中间板。向中间板的每个孔中加入90μll1x激酶缓冲液。在振荡器上将中间板中的化合物混合10分钟。将96孔中间板的每孔取5μl转移至384孔板，设置副孔。在1x激酶碱缓冲液中加入激酶。在1x激酶碱缓冲液中加入fam标记的肽和atp。测定板中已含有5μl化合物10％dmso溶液。向384孔测定板的每个孔中加入10μll2.5x酶溶液。在室温下孵育10分钟。向384孔测定板的每个孔中加入10μl的2.5x肽溶液。在28℃下孵育特定时间后，加入25μl终止缓冲液以停止反应。在caliper上收集数据，将数据进一步换算为ic50。

2、细胞培养

从液氮中取出冻存保种的肿瘤细胞，迅速置于37℃恒温水浴复温融化，在无菌条件下用培养基洗涤1次。然后用完全培养基接种于培养瓶内，在37℃，5％co2培养箱中培养，第二天置换新鲜细胞培养液。悬浮生长细胞的传代：细胞培养2～3天后，从培养箱中取出培养瓶，收集细胞悬液于离心管中，1500rpm/min，离心3min，倒去上清液，细胞沉淀用完全培养基重悬并吹打均匀，然后分至3～5瓶培养。一般3～4天传代1次；贴壁生长细胞的传代：细胞贴壁长满至瓶底的80％左右，从培养箱中取出培养瓶，吸去培养基，用0.25％胰酶洗涤1次，然后加入0.25％的胰酶消化液消化，观察细胞收缩变圆后，加入完全培养基终止消化，并吹打使细胞分散脱落，收集细胞悬液，1500rpm/min，离心3min，倒去上清液，细胞沉淀用完全培养基重悬并吹打均匀，然后分至3～5瓶瓶培养。一般3～4天传代1次。

3、细胞增殖抑制实验(mtt法)

收集对数生长期的细胞(4t1鼠源乳腺癌细胞株；mda-mb-231人源乳腺癌细胞株；a549人源非小细胞肺癌株；sun-16人低分化胃癌细胞；nih3t3小鼠成纤维细胞；人肺成纤维细胞hpf(catalog#3300))，以每孔2.5×10³～1×10⁴个的数量接种于96孔板中，在37℃、5％co2的细胞培养箱中培养过夜24小时，采用dmem培养基稀释待测药物并加入到96孔板中，每种药物8个梯度，每个梯度含3个复孔。加药组中，按梯度(终浓度分别为1000、333、127、42.3、14.1、4.7、1.56、0.53nm)每孔加入100μl化合物的培养基溶液，每个浓度设3个复孔；阴性对照组每孔中加入含1‰dmso的空白培养基100μl，共6个复孔；空白对照组每孔中只加入100μl培养基。将板置于37℃、5％co2细胞培养孵箱内培养72小时。药物处理组、隐形对照组和空白组每孔加入20μlmtt溶液(5mg/ml)，继续培养2-4小时，待甲瓒形成后，终止培养，倾去上清液后每孔加150μldmso(对于悬浮细胞则直接加入50μl20％sds溶液)，在摇床上摇15～20分钟。用酶标仪在570nm波长下检测每孔细胞吸光度(od570)，取其平均值记录结果。细胞增殖抑制率＝(对照组od570-实验组od570)/(对照组od570-空白od570)×100％。最后，使用graphpadprism软件拟合半数抑制浓度。

4、动物体内抑制肺纤维化实验

1.动物模型及给药

雄性c57bl/6小鼠(7-9周龄，体重18-22g)购自华阜康(中国北京)。将小鼠圈养并在spf条件下维持在设施中。在实验的第0天，先用10％水合氯醛将小鼠麻醉，然后给小鼠单次气管内滴注溶于生理盐水(3mg/kg体重)的硫酸博来霉素，同时注射等体积的生理盐水到对照组的大鼠中。第二天随机将小鼠分组，每组6只，每天腹腔注射本发明化合物4-20(c)，4-22(a)，阳性对照为尼达尼布(nintedanib，bibf1120)(20mg/kg,溶剂配比为dms0:ped400:生理盐水＝0.5:3.5:6)药和等体积的溶剂做对照。给药28天后，处死小鼠。

2.he和masson染色

在实验的第28天处死小鼠。将肺组织样品置于4％(m/v)pbs-缓冲的多聚甲醛溶液中，三天后，取部分组织冲水2h，后使用梯度乙醇脱水并包埋在石蜡中。将包裹在石蜡中的组织切割连续切片(3μm)并用苏木精和伊红或masson三色染色以评估组织病理学变化和累积的胶原蛋白纤维的程度。

三、体外实验结果

1、下表2列举了本发明合成的部分化合物对fgfr1激酶的抑制情况。字母a代表ic50为50nm以下，字母b代表ic50为50nm至100nm，字母c代表ic50为100nm至500nm，字母d代表ic50为500nm以上。

表2本发明部分化合物抑制fgfr1激酶的ic50值

2、下表3列举了本发明合成的部分化合物在72小时作用下对snu16细胞的增殖抑制情况。字母a代表ic50为50nm以下，字母b代表ic50为50nm至100nm，字母c代表ic50为100nm至500nm，字母d代表ic50为500nm以上。

表3本发明部分化合物抑制sun16细胞增殖的ic50值

3、下表4列举了本发明合成的部分化合物在72小时对部分肿瘤细胞的增殖抑制情况。

表4本发明部分化合物抑制肿瘤细胞增殖的ic50值

4、下表5列举了本发明合成的部分化合物在作用72h后对nih-3t3细胞和人肺成纤维细胞的增殖抑制情况。

表5本发明部分化合物抑制nih-3t3细胞和人肺成纤维细胞增殖的ic50值

nt表示未测试。

四、动物体内实验结果

实验结果见图1～4。图1，he染色结果显示：假手术组，小鼠肺组织结构完整清晰，肺泡壁未见增厚，无炎性细胞侵入；溶剂对照组，小鼠肺泡结构破坏，肺泡间隔增宽，大量的炎性细胞浸润及成纤维细胞增生，明显纤维化状态；c为4-20化合物治疗组，与溶剂对照组相比，情况明显好转，病变范围明显减少，肺实质结构未见明显破坏。

图2，马氏染色结果显示：假手术组，小鼠肺组织结构正常，肺泡壁未见增厚；溶剂对照组，肺泡、肺间隔以及终末端支气管等周围有增生的胶原纤维，呈现纤维化状态；c为4-20化合物治疗组，与溶剂对照组相比，情况明显好转，胶原总体含量减少，纤维化程度减轻。

图3，he染色结果显示：假手术组，小鼠肺组织结构完整清晰，肺泡壁未见增厚，无炎性细胞侵入，无成纤维细胞增生；溶剂对照组，小鼠肺泡结构破坏，肺泡间隔增宽，大量的炎性细胞浸润及成纤维细胞增生，呈现明显纤维化状态；bibf1120阳性对照组，小鼠肺组织结构完整，清晰，较溶剂组相比，明显的好转；a为4-22化合物治疗组，与溶剂对照组相比，情况明显好转，病变程度明显减少，肺实质结构未见明显破坏。

图4，马氏染色结果显示：假手术组，小鼠肺组织结构正常，肺泡壁未见增厚；无胶原沉积；溶剂对照组，肺泡、肺间隔以及终末端支气管等周围有增生的胶原纤维，呈现纤维化状态；bibf1120阳性对照组，小鼠肺组织结构完整，较溶剂组相比，胶原沉积现象明显减少，呈明显的好转；a为4-22化合物治疗组，与溶剂对照组相比，情况明显好转，胶原总体含量减少，减轻胶原增生等，改善纤维化程度。

以上实验结果表明，本发明化合物4-20(c)和4-22(a)均具有抗肺纤维化的作用。