本发明涉及一种微生物发酵产物、发酵产物的应用以及微生物发酵方法，尤其涉及一种能够用于治疗激素依赖性皮炎的微生物发酵产物、制剂及其应用，以及所述微生物的发酵方法。
背景技术：
：早在8000年前，古巴比伦就使用酵母帮助伤口愈合，古希腊用酿酒发酵产生的泡沫擦洗身体以保持皮肤的健康美丽，虽然已知酵母提取物对皮肤有益，但是直接使用酵母加入到护肤品中是非常危险的，经常出现过敏、发炎等反应，随着生物技术的发展，发达的发酵、提取等技术已经可以确保酵母提取物的稳定性和安全性，理论上，护肤品中最常见的酵母类成分有三类，一是酵母胞溶产物提取物，二是酵母发酵产物提取物，另外还有一种是酵母发酵过滤裂解液。酵母胞溶产物提取物具有强大修护功能的酵母成分，含有非常丰富的b族维生素、微量元素、叶酸和麦角甾醇，所以能提高皮肤血液循环和新陈代谢，换言之，酵母胞溶产物提取物可以起到清洁毛孔、抗老化和消除细纹干纹的作用，让已经有“受损”的皮肤重新恢复活力。酵母发酵产物提取物既有酵母细胞本身的营养物质提取物，又有发酵后代谢物质的过滤，一般认为，酵母发酵液富含维他命、氨基酸、矿物质以及有机酸，与肌肤天然保湿因子相似，可提升肌肤透明度、柔软度以及光滑度，通常被用作高端化妆品中美白、保湿和去皱的中药成分，例如市场上常见的sk-ii、兰蔻小黑瓶肌底液、雅诗兰黛小棕瓶均将酵母发酵液作为核心宣传卖点。覆膜酵母(trichosporonkashiwayama)是保洁公司命名的一种半乳糖酵母菌，据kashiwayamashinei于1980年的专利中报道，其发酵产物被用于保湿、淡化色斑和去皱。但是，根据该专利的报道，其发酵所得覆膜酵母发酵液中氨基酸成分很少，几十年过去之后，依然没有新的发酵方法报道，因此需要一种新的覆膜酵母发酵方法，以提升覆膜酵母的使用价值。技术实现要素：本发明提供了一种新的治疗fcad物质的生产方法和来源。本发明第一方面是提供一种酵母微生物发酵的方法，包括：将覆膜酵母(trichosporonkashiwayama)接种于培养基中发酵，发酵液离心分离，取上清液，过滤去除覆膜酵母，获得发酵产物。在一种优选实施例中，所述培养基ph值优选为4.5-5.5，更有选为4.8-5.3，更有选为5-5.2。在本发明的一种优选实施例中，以所述培养基总体积为基准，所述培养基组分包括：缓冲剂0.01-0.1m、碳源0.1-0.5％(w/v)、氮源0.01-0.1％(w/v)、kohph值调节剂将ph值调节至4.5-5.5、脱脂牛奶0.1-1％(w/v)。在本发明的一种更优选实施例中，以所述培养基总体积为基准，所述培养基组分包括：缓冲剂0.02-0.08m、碳源0.2-0.4％(w/v)、氮源0.02-0.07％(w/v)、ph值调节剂将ph值调节至4.8-5.3、脱脂牛奶0.2-0.7％(w/v)。在本发明的一种更优选实施例中，以所述培养基总体积为基准，所述培养基组分包括：缓冲剂0.03-0.05m、碳源0.2-0.4％(w/v)、氮源0.02-0.07％(w/v)、ph值调节剂将ph值调节至5-5.2、脱脂牛奶0.2-0.7％(w/v)。其中，所述碳源优选为糖类和脂类中的任意一种或更多种，并优选为糖类中的任意一种或更多种。优选地，所述糖类可以是单糖、双糖、多糖中的一种或几种，更优选地所述糖选自葡萄糖、蔗糖。其中，所述氮源优选为迟效氮源，更优选地，所述氮源选自棉籽饼粉、豆粕粉、蛋白胨、酵母粉中的任意一种或更多种。其中，所述缓冲剂优选为磷酸二氢盐、或者磷酸一氢盐与磷酸二氢盐的组合物。其中，所述ph值调节剂优选为磷酸一氢盐、氢氧化物中的一种或几种，其中，所述氢氧化物优选为碱金属氢氧化物，例如可以是氢氧化钾。其中所述盐可以是优选为钾盐。本发明的一种优选实施例中，所述缓冲剂为磷酸二氢钾，所述ph值调节剂为koh。本发明的一种优选实施例中，所述覆膜酵母按照体积比1:100的比例接种于培养基中发酵。本发明的一种优选实施例中，所述发酵在20-33℃温度条件下进行，更优选地，所述温度为25-28℃。本发明的一种优选实施例中，所述发酵时间为1-15天，更优选地，为2-10天，更优选地，为3-7天。本发明的一种优选实施例中，所述过滤采用的滤膜孔径不超过0.2微米，更优选为不超过0.22微米，更优选为不超过0.25微米。本发明的一种优选实施例中，所述覆膜酵母接种于培养基之前，还包括：获取覆膜酵母单菌落，然后接种于生长培养基培养。其中，以所述生长培养基总体积为基准，所述生长培养基组分包括：酵母提取物3.0g、麦芽提取物3.0g、葡萄糖10.0g、胰蛋白胨5.0g，ph值为6.0。其中，以所述生长培养基总体积为基准，所述生长培养基组分包括：琼脂20.0g、酵母提取物3.0g、麦芽提取物3.0g、葡萄糖10.0g、胰蛋白胨5.0g，ph值为6.0。本发明第二方面是提供一种酵母微生物发酵产物，所述发酵产物采用本发明第一方面所述方法制备。本发明第三个方面是提供所述酵母微生物发酵产物的应用，优选为在制备药物、护肤品或化妆品中的应用。更优选地，所述应用优选为在制备治疗激素依赖性皮炎的药物、护肤品或化妆品中的应用。在一种优选实施例中，所述药物、护肤品或化妆品中，所述酵母微生物发酵产物重量百分比优选为1％-100％，更优选为10％-90％，更优选为20％-80％，更优选为30％-70％，更优选为40％-65％，更优选为45％-60％，更优选为50％-55％。在一种优选实施例中，所述药物、护肤品或化妆品中，还可以包括辅料。其中，所述辅料可以是包含如下任意一种或更多种组分：润滑剂、ph值调节剂、防腐剂、保湿剂、调味剂、增稠剂、增溶剂、抗氧剂、皮肤渗透剂、乳化剂、悬浮剂、颜料、香料、表面活性剂、结冷胶、溶剂、柔润剂、填充剂。更优选地，所述润滑剂选自凡士林、矿物油、石蜡、硬脂酸镁。更优选地，所述保湿剂选自甘油、丙二醇、丁二醇、2-甲基-1,5-戊二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、木糖醇、山梨糖醇、乳酸钠、尿素、植物蛋白、胶原蛋白、透明质酸、粘多糖。更优选地，所述增稠剂选自淀粉、明胶、海藻酸钠、干酪素、瓜尔胶、甲壳胺、阿拉伯树胶、黄原胶、大豆蛋白胶、天然橡胶、羊毛脂、琼脂、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素醚(如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素等)、膨润土、硅藻土、硅凝胶。更优选地，所述结冷胶优选为高酰结冷胶。更优选地，所述分散介质或溶剂为水。更优选地，所述防腐剂选自苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、羟苯甲酯(对羟基苯甲酸甲酯)、羟苯乙酯(对羟基苯甲酸乙酯)、羟苯丙酯(对羟基苯甲酸丙酯)、羟苯丁酯(对羟基苯甲酸丁酯)、脱氢乙酸钠中的一种或几种。在本发明的一种优选实施例中，所述药物、护肤品或化妆品的组分包括：甘油1-10％(w/w)、丁二醇1-10％(w/w)、黄原胶0.05-1％(w/w)、高酰结冷胶0.01-0.1％(w/w)、苯甲酸钠0.1-5％(w/w)、羟苯甲酯0.1-0.5％(w/w)、山梨酸0.01-1％(w/w)、酵母微生物发酵产物10-90％(w/w)、水补足100％(w/w)。在本发明的一种更优选实施例中，所述药物、护肤品或化妆品的组分包括：甘油3-7％(w/w)、丁二醇3-5％(w/w)、黄原胶0.1-0.5％(w/w)、高酰结冷胶0.02-0.06％(w/w)、苯甲酸钠0.5-2％(w/w)、羟苯甲酯0.2-0.4％(w/w)、山梨酸0.05-0.5％(w/w)、酵母微生物发酵产物30-70％(w/w)、水补足100％(w/w)。在本发明的一种更优选实施例中，所述药物、护肤品或化妆品的组分包括：甘油5-6％(w/w)、丁二醇3-4％(w/w)、黄原胶0.2-0.3％(w/w)、高酰结冷胶0.03-0.05％(w/w)、苯甲酸钠1-1.2％(w/w)、羟苯甲酯0.2-0.4％(w/w)、山梨酸0.1-0.3％(w/w)、酵母微生物发酵产物50-55％(w/w)、水补足100％(w/w)。在本发明的一种更优选实施例中，制备所述药物、护肤品或化妆品的方法包括：步骤1，将结冷胶与增稠剂加入到液体保湿剂中，加热混合；步骤2，降温，然后依次加入酵母微生物发酵产物、防腐剂，混合。更优选地，所述方法包括：步骤1，将结冷胶与黄原胶加入到丁二醇和甘油中，加热至70-80℃混合；步骤2，待结冷胶与黄原胶水合达到预期效果后，降温，步骤3，温度降至40-50℃后，依次加入酵母微生物发酵产物、防腐剂，混合。本发明上下文内容中，“％(w/v)”均指的是质量体积百分比，即每100ml溶液中含有的该物质的总量(以g为单位)。本发明上下文内容中，“％(w/w)”均指的是质量百分比，即每100g组合物中含有的该物质的总量(以g为单位)。本发明所提出的酵母微生物发酵的方法，采用已知的覆膜酵母进行发酵，操作方法简单，成本低；所得酵母微生物发酵产物，具有良好的抗炎活性，可用于制备治疗激素依赖性皮炎的药物、化妆品或护肤品。具体实施方式本发明提供了一种酵母微生物发酵方法、酵母微生物发酵产品、生物制剂、所述生物制剂或发酵产物的应用。实施例1覆膜酵母微生物发酵方法如下：1、酵母初次培养1.1、复苏可以从冻存管中刮下少量细胞划在ym培养皿上，不要将整个冻存管中的贮存液融化。置于培养箱中28℃倒置培养24小时，可选择性的用封口膜封闭平皿。1.2、冻存配制10％的甘油溶液，用甘油溶液将菌体或孢子洗脱下来。混匀加入到2ml的冻存管中，置于干冰中一段时间，然后转存到-80℃冰箱中。2、酵母继代培养挑取培养于ym平板中单菌落，在新的ym平皿上划线，继代培养2次。获得稳定的单菌落。3、酵母生长培养挑取平皿上的单菌落，接种于5mlym液体培养基中，置于恒温摇床中180rpm，28℃培养24小时。生长培养基(1000ml)包括：酵母提取物3.0g，麦芽提取物3.0g，葡萄糖10.0g，胰蛋白胨5.0g，ph值为6.0，其余为水。121℃高温灭菌。4、酵母发酵培养将培养好的覆膜酵母按照1:100(v/v)转接于发酵培养基中。置于恒温摇床中180rpm，25℃培养3天。发酵培养基(1000ml)包括：kh2po40.05m，葡萄糖0.3％w/v，酵母粉0.05％w/v，用koh调ph值至5.0，脱脂牛奶0.5％w/v，其余为水。121℃高温灭菌。发酵过程中，在初期可见浑浊，随着发酵过程的持续，发酵液逐渐澄清。5、发酵液的处理将覆膜酵母发酵液置于离心管中，在10000×g条件下离心10min。取上清液。将上清液通过0.22μm滤膜过滤除覆膜酵母菌。将过滤后的发酵液置于4℃保存。制备生物制剂或化妆品/护肤品/药物的方法如下：1、将表1组分a中的黄原胶和结冷胶加到多元醇中混合均匀，然后加入水搅拌均匀并加热至70-80℃。2、待胶体完全水合好后，开始降温。3、待温度将至45℃后，依次加入表2组分b和组分c搅拌均匀；即可。产品理化指标：外观：半透明状液体ph值(25℃)：5.40表1实施例2将培养好的覆膜酵母按照1:100(v/v)转接于发酵培养基中。置于恒温摇床中180rpm，25℃培养5天。发酵培养基(1000ml)包括：kh2po40.05m，葡萄糖0.3％w/v，酵母粉0.05％w/v，用koh调ph值至4.8，脱脂牛奶0.5％w/v，其余为水。121℃高温灭菌。制备生物制剂或化妆品/护肤品/药物的方法如下：1、按照表1配比，组分a中的黄原胶和结冷胶加到多元醇中混合均匀，然后加入水搅拌均匀并加热至70-80℃。2、待胶体完全水合好后，开始降温。3、待温度将至45℃后，依次加入表2组分b和组分c搅拌均匀；即可。产品理化指标：外观：半透明状液体ph值(25℃)：5.402实施例3将培养好的覆膜酵母按照1:100(v/v)转接于发酵培养基中。置于恒温摇床中180rpm，25℃培养5天。发酵培养基(1000ml)包括：kh2po40.05m，葡萄糖0.3％w/v，酵母粉0.05％w/v，用koh调ph值至5.2，脱脂牛奶0.5％w/v，其余为水。121℃高温灭菌。制备生物制剂或化妆品/护肤品/药物的方法如下：1、按照表1配比，组分a中的黄原胶和结冷胶加到多元醇中混合均匀，然后加入水搅拌均匀并加热至70-80℃。2、待胶体完全水合好后，开始降温。3、待温度将至45℃后，依次加入表2组分b和组分c搅拌均匀；即可。产品理化指标：外观：半透明状液体ph值(25℃)：5.40对比例1参照专利ep0024738a2，将培养好的覆膜酵母按照1:100(v/v)转接于发酵培养基中。置于恒温摇床中180rpm，25℃培养5天。发酵培养基(1000ml)包括：葡萄糖0.3％w/v，酵母粉0.05％w/v、控制ph值至6.0，脱脂牛奶0.5％w/v，其余为水。121℃高温灭菌。对比例2参照专利ep0024738a2，将培养好的覆膜酵母按照1:100(v/v)转接于发酵培养基中。置于恒温摇床中180rpm，25℃培养7天。发酵培养基(1000ml)包括：葡萄糖0.3％w/v，酵母粉0.05％w/v、控制ph值至4.0，脱脂牛奶0.5％w/v，其余为水。121℃高温灭菌。上述实施例2-3、以及对比例1-2中，除发酵过程外，其他步骤均与实施例1相同。表2，本发明与对比例发酵产物治疗激素依赖性皮炎的效果对比异味总有效率实施例1无异味50％对比例1有异味，需要香精遮盖异味无抗炎活性对比例2有异味，需要香精遮盖异味无抗炎活性治疗激素依赖性皮炎的效果的评价方法，参照《中国医师协会皮肤科分会美容专业组-激素依赖性皮炎诊治指南》上对激素依赖性皮炎的相关诊断制定，具体标准如下：①面部外用糖皮质激素制剂＞1个月；②停用激素2～10d原有皮损加重；③主观症状有皮肤灼热、瘙痒、疼痛、干燥或紧绷感；④客观症状有潮红或红斑、肿胀、丘疹、脓疱、脱屑、毛细血管扩张、皮肤萎缩及色素沉着。其中①、②为必要条件，若合并③、④中的一条或两条，诊断即可成立。疗效判定根据《中医皮肤病学》中相关标准制定，具体如下：治愈：患者临床症状完全消失，局部红斑消退完全，皮肤屏障功能恢复正常；显效：患者临床症状较前明显好转，局部红斑面积消失75％以上；有效：患者临床症状改善，局部红斑面积消失50％-75％之间；无效：患者临床症状无明显改善，局部红斑面积消失50％以下。总有效率＝治愈率+显效率+有效率。从测试结果来看，本发明提供了一种治疗激素依赖性皮炎的组合物，对18至46岁的罹患激素依赖性的患者有显著的治疗和改善效果，该产品能抑制皮肤毛细血管通透性，减少炎症因子的渗出，且无糖皮质激素药物的不良反应，而且志愿者的依从度比较好，复发率也较低，可作为治疗激素依赖性皮炎的化妆品。因此，本发明所提供的方法生产的覆膜酵母发酵产物，能够起到治疗激素依赖性皮炎的效果，可用于制备治疗激素依赖性皮炎的药物、化妆品或者护肤品等外用品，而且产品无异味，不需要香精遮盖。以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。当前第1页12