本发明涉及微生物发酵领域，具体是一种提高鸡腿菇菌丝体中不饱和脂肪酸含量的方法。
背景技术：
微生物油脂主要是由真菌和藻类等微生物在一定条件下利用碳水化合物、碳氢化合物和普通油脂作为碳源，同时利用氮源、无机盐产生的油脂。微生物油脂中含有许多对人体有益的不饱和脂肪酸，如油酸、亚油酸、dha、ara等。
不饱和脂肪酸在维持人体功能方面发挥着非常重要的作用，能够调节血脂、清理血栓、提高机体免疫力、维护视网膜功能、预防阿尔茨海默病、改善关节炎症、减轻疼痛等。油酸和亚油酸的作用，除了供给人体所需的能量以外，还能够降低胆固醇，防止心血管疾病的发生、改善消化系统功能、防止大脑衰老、预防早老性痴呆、保护皮肤受损、抑制恶性肿瘤等。
鸡腿菇含有碳水化合物、蛋白质、氨基酸、脂肪酸、维生素、矿物质，膳食纤维等营养物质，味道鲜美，营养丰富，具有极高的食用价值和药用价值。其味甘滑性平，具有益脾胃、清心安神、治疗痔疮、降血糖的功效，此外还能够助消化、增加食欲、提高机体免疫力、抑制肿瘤生长、改善血液循环等。
根据研究发现，鸡腿菇中的不饱和脂肪酸主要是油酸和亚油酸，亚油酸的含量比油酸多。相应地，不饱和脂肪酸的存在提高了鸡腿菇的药用价值。传统的鸡腿菇栽培方法主要是固体栽培，但培养时间长，不适合工业大生产。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种提高鸡腿菇菌丝体中不饱和脂肪酸含量的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种提高鸡腿菇菌丝体中不饱和脂肪酸含量的方法，具体步骤如下：
步骤一，菌种活化：在超净台中，从鸡腿菇菌种试管中挑取3-4块菌丝，接种于pda培养基上，密封并且于培养箱中活化，待斜面长满菌丝，于冰箱保存，得到活化菌种；
步骤二，制备液体种子液：在温水中加入其质量分数为2％的葡萄糖、1％的蛋白胨、0.1％的kh2po4和0.1％的mgso4，搅拌后加入装有种子液的烧瓶中并且加塞密封，然后高压蒸汽灭菌，待压力降为零后取出，冷却后贮存备用，得到液体种子液；
步骤三，培养液体种子：在超净台中，从步骤一的活化菌种上挑取6-8块菌丝，接种于液体种子液中并且摇床培养4天，得到液体种子；
步骤四，制备深层发酵培养基：在温水中加入其质量分数为1.5％的植物油、1％的葡萄糖、1％的蛋白胨、0.1％的kh2po4、0.1％的mgso4，搅拌后加入装有种子液的烧瓶中并且加塞密封，然后高压蒸汽灭菌，待压力降为零后取出，冷却后贮存备用，得到深层发酵培养基；
步骤五，液体发酵培养：将步骤三中的液体种子以体积分数5％的接种量接种于步骤四中的深层发酵培养基中，摇床培养5天，得到发酵产物；
步骤六，测定含量：将发酵产物进行抽滤，从而将菌丝体和发酵液分离，菌丝体用蒸馏水洗2-3次，于烘箱烘干，待测，称取一定量的菌丝体，按照国标gb5009.168-2016《食品中脂肪酸的测定》方法测定鸡腿菇菌丝体中亚油酸的含量。
作为本发明进一步的方案：步骤一中采用接种针挑取菌丝。
作为本发明进一步的方案：步骤一中培养箱的温度为26℃，冰箱的温度为4℃。
作为本发明进一步的方案：步骤二中高压蒸汽灭菌的温度为121℃，灭菌时间为18-25min。
作为本发明进一步的方案：步骤三中摇床培养的转速为180r/min，培养温度为26℃。
作为本发明进一步的方案：步骤四中中高压蒸汽灭菌的温度为121℃，灭菌时间为16-24min。
作为本发明进一步的方案：步骤四中植物油包括橄榄油、葵花籽油和玉米油中的至少一种。
作为本发明进一步的方案：步骤五中摇床培养的转速为160r/min，培养温度为26℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过保持其他发酵培养条件不变，只改变培养基的组成条件，在培养基中添加一定量的植物油和葡萄糖作为发酵碳源，使鸡腿菇菌丝体中亚油酸的含量提高3％-5％，使鸡腿菇营养更加充分，具有广阔的使用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
对照组
采用现有方法培养鸡腿菇菌丝体，测定鸡腿菇菌丝体中亚油酸的含量，记录。
实施例1
一种提高鸡腿菇菌丝体中不饱和脂肪酸含量的方法，具体步骤如下：
(1)菌种活化：在超净台中，从鸡腿菇菌种试管中用接种针挑取3-4块绿豆大小般的菌丝，接种于pda培养基上，密封，于培养箱26℃活化，待斜面长满菌丝，于4℃冰箱保存；
(2)液体种子液的制备：水一定量并且微热，加入质量分数2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.1％kh2po4、0.1％mgso4，分装于含有50ml种子液的100ml锥形瓶中，加塞密封，121℃高压蒸汽灭菌20min左右待压力降为零后取出，冷却后贮存备用；
(3)液体种子培养：在超净台中，从鸡腿菇活化菌种上挑取6-8块绿豆般大小的菌丝，接种于种子培养液中，摇床培养，180r/min，26℃培养4天；
(4)深层发酵培养基的制备：水一定量并且微热，加入质量分数1.5％橄榄油、1％葡萄糖、1％蛋白胨、0.1％kh2po4、0.1％mgso4，分装于含有100ml种子液的250ml锥形瓶中，加塞密封，121℃高压蒸汽灭菌20min左右待压力降为零后取出，冷却后贮存备用；
(5)液体发酵培养：将液体种子以体积分数5％的接种量接种于发酵培养基中，摇床培养，160r/min，26℃培养5天。
含量测定：发酵结束后，抽滤将菌丝体和发酵液分离。菌丝体用蒸馏水洗2-3次，于60℃烘箱烘干，待测。称取一定量的菌丝体，按照国标gb5009.168-2016《食品中脂肪酸的测定》方法测定鸡腿菇菌丝体中亚油酸的含量，实验结果显示，与培养基中不添加橄榄油的对照组相比，培养基中添加橄榄油的实验组亚油酸的含量提高了3.82％。
实施例2
一种提高鸡腿菇菌丝体中不饱和脂肪酸含量的方法，具体步骤如下：
(1)菌种活化：在超净台中，从鸡腿菇菌种试管中用接种针挑取3-4块绿豆大小般的菌丝，接种于pda培养基上，密封，于培养箱26℃活化，待斜面长满菌丝，于4℃冰箱保存；
(2)液体种子液的制备：水一定量并且微热，加入质量分数2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.1％kh2po4、0.1％mgso4，分装于含有50ml种子液的100ml锥形瓶中，加塞密封，121℃高压蒸汽灭菌20min左右待压力降为零后取出，冷却后贮存备用；
(3)液体种子培养：在超净台中，从鸡腿菇活化菌种上挑取6-8块绿豆般大小的菌丝，接种于种子培养液中，摇床培养，180r/min，26℃培养4天；
(4)深层发酵培养基的制备：水一定量并且微热，加入质量分数1.5％葵花籽油、1％葡萄糖、1％蛋白胨、0.1％kh2po4、0.1％mgso4，分装于含有100ml种子液的250ml锥形瓶中，加塞密封，121℃高压蒸汽灭菌20min左右待压力降为零后取出，冷却后贮存备用；
(5)液体发酵培养：将液体种子以体积分数5％的接种量接种于发酵培养基中，摇床培养，160r/min，26℃培养5天。
(6)含量测定：发酵结束后，抽滤将菌丝体和发酵液分离。菌丝体用蒸馏水洗2-3次，于60℃烘箱烘干，待测。称取一定量的菌丝体，按照国标gb5009.168-2016《食品中脂肪酸的测定》方法测定鸡腿菇菌丝体中亚油酸的含量，实验结果显示，与培养基中不添加葵花籽油的对照组相比，培养基中添加葵花籽油的实验组亚油酸的含量提高了4.17％。
实施例3
一种提高鸡腿菇菌丝体中不饱和脂肪酸含量的方法，具体步骤如下：
(1)菌种活化：在超净台中，从鸡腿菇菌种试管中用接种针挑取3-4块绿豆大小般的菌丝，接种于pda培养基上，密封，于培养箱26℃活化，待斜面长满菌丝，于4℃冰箱保存；
(2)液体种子液的制备：水一定量并且微热，加入质量分数2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.1％kh2po4、0.1％mgso4，分装于含有50ml种子液的100ml锥形瓶中，加塞密封，121℃高压蒸汽灭菌20min左右待压力降为零后取出，冷却后贮存备用；
(3)液体种子培养：在超净台中，从鸡腿菇活化菌种上挑取6-8块绿豆般大小的菌丝，接种于种子培养液中，摇床培养，180r/min，26℃培养4天；
(4)深层发酵培养基的制备：水一定量并且微热，加入质量分数1.5％玉米油、1％葡萄糖、1％蛋白胨、0.1％kh2po4、0.1％mgso4，分装于含有100ml种子液的250ml锥形瓶中，加塞密封，121℃高压蒸汽灭菌20min左右待压力降为零后取出，冷却后贮存备用；
(5)液体发酵培养：将液体种子以体积分数5％的接种量接种于发酵培养基中，摇床培养，160r/min，26℃培养5天。
(6)含量测定：发酵结束后，抽滤将菌丝体和发酵液分离。菌丝体用蒸馏水洗2-3次，于60℃烘箱烘干，待测。称取一定量的菌丝体，按照国标gb5009.168-2016《食品中脂肪酸的测定》方法测定鸡腿菇菌丝体中亚油酸的含量，实验结果显示，与培养基中不添加玉米油的对照组相比，培养基中添加玉米油的实验组亚油酸的含量提高了4.85％。
本发明的工作原理是：普通油脂可作为真菌发酵利用的碳源。有研究者选用高山被孢菌，通过添加植物油作为前体物质，增加了菌体中花生四烯酸的产量。
液体发酵技术可以在较短时间内获得大量的菌丝体及其发酵产物，发酵周期短、产量高、成本低、工艺设备简单，因此在食用菌生产中具有广阔的应用前景。
本发明提供的提高鸡腿菇菌丝体中亚油酸含量的方法，其创新点在于在液体发酵培养基中添加植物油和葡萄糖同时作为发酵的碳源，培养基含有碳源、氮源、微量元素，营养充分，适合鸡腿菇种子深层发酵。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。