一种大肠杆菌裂解液及其制备方法和应用与流程

本发明涉及水质微生物检测
技术领域：
，具体涉及一种大肠杆菌裂解液及其制备方法和应用。
背景技术：
：大肠埃希氏菌通常被称为大肠杆菌，是escherich在1885年发现的，大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌，大小0.5×1～3微米，周生鞭毛，能运动，无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，几乎占粪便干重的1/3。国家规定，每毫升饮用水中的菌落总数小于100，每100毫升水中不得检出总大肠杆菌群。大肠菌群数是污水水质分析中常用的细菌学指标，用每升水中的大肠菌群数表示。大肠菌群包括大肠杆菌等几种大量存在于人体肠道中的细菌，因此粪便中大量存在大肠菌群。在一般情况下，大肠菌群属于非致病菌。如在水样中检测出大肠菌群，表明水被粪便所污染。由于水致传染病菌和病毒的生长环境与大肠菌群基本相同，而对水致传染病菌和病毒的检测又比较困难，因此通常用大肠菌群作为间接的检测指标。如果水中的大肠菌群数超过规定的指标，就认为这些水中可能含有水致传染病菌和病毒，如人体直接接触这些水就可能会被传染上疾病。目前市场上有水质粪大肠菌群检验纸片、大肠杆菌o157:h7快速检测试纸条。此两种产品使用过程中都需要采样，利用恒温培养箱培养24小时，不仅操作不方便，而且检测时间长(大于24小时)，两种产品均是利用微生物检测(国标)方法原理制备。而且上述产品使用领域局限性大，只能用于食品、餐具表面微生物测试，或者致病性大肠杆菌的测试，不具备普遍适用性。此外，市场上也有一些试剂公司生产的裂解液，如western及ip细胞裂解液、ripa裂解液(强、中或弱)、sds裂解液、np-40裂解液，主要用作western、ip或co-ip，成分主要包括1％tritonx-100、1％deoxycholate、0.1％sds以及1％np-40等。然而这些裂解液不是专门用来检测大肠杆菌的，而是用作其他用途的，并且上述裂解液的缺点是裂解时间非常长，需要2-24个小时。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于提供一种大肠杆菌裂解液及其制备方法，使得所述裂解液能够快速裂解水质或食品中的大肠杆菌，缩短耗时，并可应用于水质和食品大肠杆菌的检测中。为了实现上述发明目的，本发明提供了如下技术方案：一种大肠杆菌裂解液，包括脱水剂、渗透剂和表面活性剂；其中所述脱水剂为氯化钠、edta-2na或氢氧化钠；所述渗透剂为甘油、聚乙二醇、吐温或曲拉通-100；所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮或乙基纤维素。作为优选，所述脱水剂的质量百分比浓度为0.1-30％，更优选为1-2％；所述渗透剂的质量百分比浓度为0.1-10％，更优选为0.1-0.2％；所述表面活性剂的质量百分比浓度为0.01-5％。在本发明具体实施方式中，所述脱水剂的质量百分比浓度为1％或2％，所述渗透剂的质量百分比浓度为0.1％或0.2％，所述表面活性剂的质量百分比浓度为0.01％。在本发明具体实施方式中，所述聚乙二醇为聚乙二醇2000，所述聚乙烯吡咯烷酮为k30，所述吐温为吐温80。同时，本发明还提供了所述裂解液的制备方法，包括：称取脱水剂、渗透剂和表面活性剂，加水配制成裂解液；采用本发明裂解液对大肠杆菌菌液、无菌水以及其他菌落菌液进行检测，结果显示，采用裂解液进行10min裂解，然后用配套的检测试纸条(试纸条上有半乳糖苷显色剂x-gal，与大肠杆菌裂解后的释放物反应显蓝色)浸入待测样品10min后，只有大肠杆菌菌液显示蓝色，无菌水和其他菌落菌液均无色，这说明本发明裂解液仅耗时10min就可以完成水质样品中大肠杆菌的检出，而且准确度高，不易出现假阳性结果。基于优异的试验结果，本发明提出了所述裂解液在检测水质中大肠杆菌和/或制备水质大肠杆菌检测试剂盒中的应用。由以上技术方案可知，本发明以适宜的组分组成大肠杆菌裂解液，有效针对水质和食品中大肠杆菌快速裂解，仅需10min耗时即可释放半乳糖酶，与含有半乳糖苷显色剂(x-gal)的试纸条反应显蓝色完成对大肠杆菌的检测，可将整个大肠杆菌检测过程缩短至30min以内，相比现有产品较长的耗时，显著提高了水质和食品中大肠杆菌的检测效率。附图说明图1所示为不同样品经过本发明试剂盒检测后的显色结果；其中，a为大肠杆菌菌液显色结果；b为无菌水显色结果；c为霉菌菌液显色结果；d为葡萄球菌菌液显色结果。具体实施方式本发明公开了一种大肠杆菌裂解液及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述裂解液及其制备方法和应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文所述裂解液及其制备方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明所述水质包括生活饮用水、自来水、海水、渔业用水、泳池用水、农田灌溉水、地下水、地表水、工业污水、试验用水等；食品包括液态食品和固态食品；液态食品主要包括果汁、牛奶、饮料、食品汤、液体原料等，用于检测前，需要先过滤掉不溶物，使用活性炭脱色，然后再检测；而固态食品需要先用水溶解，过滤掉不溶物，使用活性炭脱色后方可检测。以下就本发明所提供的一种大肠杆菌裂解液及其制备方法和应用做进一步说明。实施例1：本发明所述裂解液按照表1中任意一行的浓度加水配制裂解液。表1实施例2：本发明裂解液检测试验选取od值为0.3的大肠杆菌菌液、无菌水、od值为0.3的霉菌菌液以及od值为0.3的葡萄球菌菌液作为试验对象进行检测；向待测水样中加入实施例1中的裂解液4，静置10-20min；然后用所述试剂盒中的检测试纸条浸入待测水样，保持10min后，若检测试纸条显示任意程度的蓝色，即为阳性，检测试纸条无色或其他颜色为阴性。检测结果见表2和图1；表2样品名干化学试纸检测结果(静置裂解10min)大肠杆菌菌液(od值0.3)阳性(蓝色)20min无菌水阴性(无色)20min霉菌菌液(od值0.3)阴性(无色)20min葡萄球菌菌液(od值0.3)阴性(无色)20min由上述结果可以看出，只有大肠杆菌菌液发生变色显示蓝色，其他两组均无显色，同时整个过程仅耗费20min(10min裂解+10min反应)，这说明本发明试剂盒不仅耗时短，而且准确度高，不易出现假阳性结果。此外，采用裂解液1-3进行检测，三者均只有大肠杆菌菌液发生变色显示蓝色，其他三组均无显色。同时，依据上述试验方法，本发明采用不同od值的大肠杆菌菌液进行检测，结果见表3。表3样品名干化学试纸检测结果(20min裂解+10min反应)大肠杆菌菌液(od值0.3)阳性(蓝色+)30min大肠杆菌菌液(od值0.6)阳性(蓝色++)30min大肠杆菌菌液(od值0.9)阳性(蓝色+++)30min大肠杆菌菌液(od值1.2)阳性(蓝色++++)30min大肠杆菌菌液(od值1.5)阳性(蓝色+++++)30min由表3结果可以看出，不同od值的大肠杆菌菌液均能够被本发明所述裂解液裂解后检出，且随着od值的增加，显色强度越来越明显。此外，采用裂解液1-3进行检测，三者表现出和表3相同的显色趋势。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12