一种改进的多抗霉素孢子培养基及其制备方法与流程

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种改进的多抗霉素孢子培养基及其制备方法。

背景技术：

多抗霉素（polyoxin）具有较好的内吸传导作用，属于广谱性抗生素类杀菌剂，是一种高效低毒、无环境污染的安全农药，所以被广泛应用于粮食作物、水果和蔬菜等重要病害的防治。主要用于防治苹果斑点落叶病、水稻纹枯病、轮纹病、梨黑斑病、葡萄灰霉病、霜霉病、人参黑斑病和烟草赤星病等十多种作物病害。

由于多抗霉素遗传稳定性较差，在普通孢子培养基（麦芽糖0.5%、玉米粉0.5%、酵母膏0.4%、琼脂2.0%，蒸馏水配制，消前ph6.3，121℃灭菌20min）上传代3代后产孢能力明显下降。平时配制孢子培养基时，用到的玉米粉、酵母膏、黄豆粉等生物原材料和试剂的质量不稳定。每次在使用玉米粉、黄豆粉前经常要指定温度水浴一定时间，增加了配制培养基的时间，降低了配制效率。每次配制含有黄豆饼粉的培养基时可能会因水浴时间、水浴温度等参数也会稍微有差异。这些不同和差异影响到培养基的质量，不利于菌种的稳定生长。这就要求每次配制孢子培养基时有更高的要求。

中国专利申请201310594078.6公开了一种霉菌培养基，该霉菌培养基组成为：马铃薯浸出粉15～18g/l，酵母浸出粉3～5g/l，葡萄糖20～22g/l，琼脂粉15～20g/l。该申请采用质量稳定的马铃薯浸出粉，并配合丰富菌体生长环境、方便菌体代谢观察的酵母浸出粉作为原料，获得的霉菌培养基质量稳定，且配料简单，取材方便，配制工艺简单易行，可操作性强，应用本发明的培养基进行霉菌培养，能够得到生长同步性好，菌层厚实、均匀，产孢子能力强的菌体细胞，并且可以缩短霉菌的培养周期，仅为3～5天。

但是现有技术中还没有针对多抗霉素孢子培养基改进的研究。为了提高多抗霉素孢子培养基的质量稳定性和配制效率，解决目前该类培养基质量不稳定的问题，寻求一种改进的多抗霉素孢子培养基及其制备方法具有重要的意义。

技术实现要素：

为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种改进的多抗霉素孢子培养基及其制备方法，有效的提高多抗霉素孢子培养基的质量稳定性和配制效率，解决目前该类培养基质量不稳定的问题。

本发明采用如下技术方案：一种改进的多抗霉素孢子培养基，以质量百分比计，由以下配方组成：玉米粉为0.2%-0.8%，麦芽糖为0.2%-0.8%、酵母浸粉为0.2%-0.5%、kh2po4为0.05%-0.2%，琼脂为2-8%，余量为水。

本发明还保护所述的多抗霉素孢子培养基的制备方法，包括以下步骤：

（1）将玉米粉加水溶解，搅拌恒温至45-85℃，保持10-60min，用多层纱布过滤得到滤液；

（2）滤液中加入麦芽糖、酵母浸粉、kh2po4搅拌均匀，再经干燥，得到孢子培养基干粉；

（3）配制孢子培养基时，将琼脂加入到纯净水中，搅拌加热沸腾，趁热加入质量分数为1.2%的上述孢子培养基干粉继续搅拌均匀，分装成孢子培养基。

优选地，所述的玉米粉为不去胚芽的整粒玉米经粉碎且过80目筛后的玉米粉，占培养基的质量比例为0.2%-0.8%。

优选地，所述的麦芽糖的添加量占培养基的质量比例为0.2%-0.8%。

优选地，所述的酵母浸粉的添加量占培养基的质量比例为0.2%-0.5%。

优选地，所述的添加kh2po4占培养基的质量比例为0.05%-0.2%。

优选的，所述的琼脂的添加量占培养基的质量比例为2-5%。

优选地，所述的干燥是经喷雾干燥或冷冻真空干燥所得。

优选地，所述的步骤（3）中，加入上述孢子培养基干粉后，调节ph值至7.0，并且在120-130℃下高压灭菌20-30min，趁热分装成孢子培养基。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

（1）采用本发明的金色产色链霉菌孢子培养基与原孢子培养基中相比，质量更加稳定，培养基原料溶解速度更快，培养基澄清度更高。

（2）主要原料一次制备，多次使用，用该种原料配制培养基简单，提高了孢子培养基的配制效率，提高了各批孢子培养基的质量均一性，各批培养基之间培养的的菌落形态更为稳定，孢子量更高。

附图说明

下面结合附图做进一步的说明：

图1为对比例1的菌落形态图；

图2为实施例1的菌落形态图。

具体实施方式

为了对本发明的目的、技术方案及技术效果有更加清楚的理解，现对照附图及具体实施例对本发明进一步详细说明。

对比例1

原孢子培养基的制备方法：

（1）马铃薯浸出粉0.3%,加水溶解，搅拌恒温至45-85℃，保持10-60min，用多层纱布过滤得到滤液；

（2）滤液中加入葡萄糖、酵母浸粉、kh2po4搅拌均匀，再经喷雾干燥，得到孢子培养基干粉；

（3）配制孢子培养基时，称取20g琼脂加入到少于1l的纯净水中，加热溶解。称取12g孢子培养基干粉溶于水中，定容至1l，调节ph值至7.0，121℃高压灭菌20min，趁热分装成孢子培养基。

得到以下配方组成的多抗霉素孢子培养基：马铃薯浸出粉0.3%，葡萄糖0.2%、酵母浸粉0.4%、kh2po40.15%，琼脂2%，余量为水。搅拌均匀，再经喷雾干燥，得到孢子培养基干粉。

实施例1

（1）将玉米粉加水溶解，搅拌恒温至45-85℃，保持10-60min，用多层纱布过滤得到滤液；

（2）滤液中加入麦芽糖、酵母浸粉、kh2po4搅拌均匀，再经喷雾干燥，得到孢子培养基干粉；

（3）配制孢子培养基时，称取20g琼脂加入到少于1l的纯净水中，加热溶解。称取12g孢子培养基干粉溶于水中，定容至1l，调节ph值至7.0，121℃高压灭菌20min，趁热分装成孢子培养基。

得到以下配方组成的多抗霉素孢子培养基：得到以下配方组成的多抗霉素孢子培养基：玉米粉0.3%，麦芽糖0.2%、酵母浸粉0.4%、kh2po40.15%，琼脂2%，余量为水。

将对比例1和实施例1得到的培养基进行比较，结果如表1所示。

表1对比例1和实施例1得到的培养基对比

注：a该培养基斜面为26—28℃培养12天的茄子瓶斜面。

b孢子量的计算采用每瓶加入100ml无菌水，装入20个玻璃珠，反复摇动斜面使玻璃珠在培养基表面来回均匀滚动，洗下孢子成孢子悬液。用平板计数法测得孢子悬液的孢子浓度。

可见，采用实施例1得到的孢子培养基质量更加稳定，培养基原料溶解速度更快，培养基澄清度更高。并且各批孢子培养基的质量均一性，各批培养基之间培养的的菌落形态更为稳定，孢子量更高。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。