3-羟基姜黄素-4-OCH2CO2H锶，其合成,活性和应用的制作方法

本发明涉及3-羟基姜黄素-4-och2co2h锶,涉及它的制备方法，涉及它的抗骨质疏松活性。因而本发明涉及它在制备抗骨质疏松药物中的应用。本发明属于生物医药领域。

技术背景

世界卫生组织预测,到2050年老年人口数量将达到20亿。这意味着人口老龄化是全球要面临的重要问题。骨质疏松就是困扰着老年人的疾病之一。考虑到人口基数,骨质疏松对我国老龄人健康的威胁尤其严重。姜黄素是从植物姜黄根茎中提取的天然产物,具有广泛的药理活性。例如抗肿瘤,抗血栓和抗炎症。不过,姜黄素生物利用度低及水溶性差。为改善姜黄素生物利用度及水溶性文献报道了各种姜黄素衍生物。临床上雷尼酸锶用于治疗和预防绝经后妇女骨质疏松,药效团是锶离子。因溶解度差,导致雷尼酸锶的临床剂量大。因临床剂量大,导致雷尼酸锶副作用大。发明人一直致力开发溶解度好,剂量低及副作用小的锶盐。经过三年探索,发明人发现3-羟基姜黄素-4-och2co2h锶具有这三个特点。根据这个发现,发明人提出了本发明。

技术实现要素：

本发明的第一个内容是提供下式的3-羟基姜黄素-4-och2co2h锶。

本发明的第二个内容是提供3-羟基姜黄素-4-och2co2h锶的合成方法，该方法包括:

(1)合成3-甲氧基-4-(乙酸乙酯氧基)苯甲醛；

(2)合成6-(4-氧乙酰乙酯基-3-甲氧基苯基)-5,6-己烯-2,4-二酮；

(3)合成1-(3,4-二羟基苯基)-7-(4-氧乙酰乙酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮；

(4)合成1-(3,4-二羟基苯基)-7-(4-氧乙酰乙酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮；

(5)合成3-羟基姜黄素-4-och2co2h锶。

本发明第三个内容是评价3-羟基姜黄素-4-och2co2h锶的抗骨质疏松作用。

附图说明

图13-羟基姜黄素-4-och2co2h锶的合成路线。i)k2co3,brch2cooch2ch3,无水四氢呋喃,60℃,48h；ⅱ)乙酰丙酮,b2o3,(nbuo)3b,nbu-nh3,无水乙酸乙酯,60-80℃,4h；ⅲ)b2o3,b2o3,(nbuo)3b,无水乙酸乙酯,60-80℃,4h；ⅳ)naoh水溶液(2m),meoh；ⅴ)sr(oh)2,meoh。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明,下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的,它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1制备3-甲氧基-4-(乙酸乙酯氧基)苯甲醛(1)

将15.2g(100mmol)香草醛溶解于100ml无水四氢呋喃,加入6.9g(50mmol)无水碳酸钾,室温搅拌2h,溶液由淡黄色澄清变为乳白色浑浊状态后,加入12ml(76mmol)溴乙酸乙酯,60℃搅拌48h。反应混合物过滤,滤液减压浓缩,残留物用100ml乙酸乙酯溶解。得到的溶液用5％khso4水溶液洗(30ml×3)及饱和nacl水溶液洗(30ml×3),用无水na2so4干燥12h,过滤,滤液减压浓缩,残留物在无水乙醚中放置,析出20g(84％)标题化合物,为无色晶体。esi-ms(m/e):239[m+h]⁺。

实施例2制备6-(4-氧乙酰乙酯基-3-甲氧基苯基)-5,6-己烯-2,4-二酮(2)

将9.9ml(97.0mmol)乙酰丙酮分散于50ml无水乙酸乙酯中,加4.6g(66.7mmol)硼酐,60℃搅拌1h。之后,依次加7.9g(33.3mmol)3-甲氧基-4-(乙酸乙酯氧基)苯甲醛(1)和9ml(33.5mmol)硼酸三正丁酯,80℃搅拌0.5h。之后,加34ml正丁胺的无水乙酸乙酯溶液(1/10,v/v),80℃搅拌2h。降温至60℃,加34ml稀盐酸(1m),搅拌0.5h,冷却至室温。过滤,滤液用5％khso4水溶液洗(30ml×3)及饱和nacl水溶液洗(30ml×3),用无水na2so4干燥12h,过滤,滤液减压浓缩,残留物用硅胶柱层析纯化,得到2.5g(23.4％)标题化合物,为淡黄色粉末。¹h-nmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝15.631(s,1h),7.512(d,j＝16.2hz,1h),7.356(s,1h),7.191(d,j＝8.7hz,1h),6.742(d,j＝15.9hz,1h),5.872(s,1h),4.829(s,2h),4.212(q,j＝5.4hz,2h),3.837(s,3h),2.139(s,3h),1.211(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例3制备1-(3,4-二羟基苯基)-7-(4-氧乙酰乙酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(3)

超声将4g(10.4mmol)6-(4-氧乙酰乙酯基-3-甲氧基苯基)-5,6-己烯-2,4-二酮(2),1.45g(20.8mmol)硼酐及30ml无水乙酸乙酯悬浮。悬浮液于60℃搅拌1h,加1.4g(10.4mmol)3,4-二羟基苯甲醛和3.8ml(14.1mmol)硼酸三正丁酯,80℃搅拌0.5h,加10ml正丁胺的无水乙酸乙酯溶液(1/10,v/v),搅拌2h。降温至60℃,加20.7ml稀盐酸(1m),搅拌0.5h,冷却至室温。过滤,滤液用5％khso4水溶液洗(30ml×3)及饱和nacl水溶液洗(30ml×3),用无水na2so4干燥12h,过滤,滤液减压浓缩,残留物用硅胶柱层析纯化,得到1.2g(27％)标题化合物,为深黄色粉末。esi-ms(m/e):441[m+h]⁺；¹h-nmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝9.651(s,1h),9.180(s,1h),7.562(d,j＝15.9hz,1h),7.493(d,j＝15.9hz,1h),7.387(s,1h),7.223(d,j＝8.4hz,1h),7.079(s,1h),7.035(dd,j1＝1.8hz,j2＝8.1hz,1h),6.921(d,j＝8.4hz,1h),6.843(d,j＝15.9hz,1h),6.795(d,j＝8.1hz,1h),6.601(d,j＝15.6hz,1h),6.093(s,1h),4.838(s,2h),4.177(q,j＝7.2hz,2h),3.857(s,3h),1.219(t,j＝7.2hz,3h)。

实施例4制1-(3,4-二羟基苯基)-7-(4-氧乙酰乙酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(4)

将100mg(0.387mmol)1-(3,4-二羟基苯基)-7-(4-氧乙酰乙酯基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(3)溶于10ml甲醇,0℃加1mlnaoh水溶液(2m)调反应液ph为14,搅拌2h。0℃用稀盐酸(2m)调反应液ph为7。反应混合物减压浓缩,残留物加3ml蒸馏水溶解,用稀盐酸(2m)调ph为2,得到的水溶液用乙酸乙酯萃取(30ml×3)之后用饱和nacl水溶液洗(30ml×3),无水na2so4干燥12h,过滤,滤液减压浓缩,残留物用硅胶柱层析纯化,得到56mg(60％)标题化合物,为深黄色粉末。esi-ms(m/e):411[m+h]⁺；¹h-nmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝12.98(s,1h),9.703(s,1h),9.482(s,1h),7.675(d,j＝16.2hz,1h),7.509(s,1h),7.476(s,1h),7.323(d,j＝8.1hz,1h),7.269(s,1h),7.230(d,j＝8.1hz,1h),6.960(d,j＝8.1hz,1h),6.869(d,j＝8.1hz,1h),6.554(s,1h),6.067(s,1h),4.754(s,2h),3.85(s,3h)。

实施例5制备3-羟基姜黄素-4-och2co2h锶(5)

将100mg(0.024mmol)1-(3,4-二羟基苯基)-7-(4-氧乙酰乙酸基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮(4)用10ml甲醇溶解。将114mg(0.43mmol)八水氢氧化锶用10ml蒸馏水溶解,0℃混合这两种溶液,搅拌2h,过滤,得到的红色固体用c18柱纯化,得到100mg(81％)标题化合物。ft-ms(m/e):515.00540[m+h]⁺(515.0)；mp＞245.6℃；(c＝0.01,h2o)；ir＝3027,3014,2942,2608,2359,1730,1621,1574,1504,1445,1422,1268,1212,1136,1118,1070,1027,996,854,811,739,697,648cm^-1。

实验例1评价3-羟基姜黄素-4-och2co2h锶的抗骨质疏松活性

雌性icr小鼠(25±2g)用作手术组及假手术组小鼠。手术组小鼠腹腔注射5％水合氯醛的生理盐水溶液(0.1ml/10g)。先后用碘伏及洁尔灭擦拭小鼠下腹部,剪开下腹部表皮层,沿着腹白线剪开肌肉层,剪开腹腔后在膀胱下找到子宫,沿子宫找到两侧输卵管,在两侧输卵管的盲端找到两侧呈小菜花状且有脂肪包裹的卵巢,在远离子宫处结扎输卵管,摘除两个卵巢,在结扎处滴加一滴青霉素溶液,将其放回腹腔后,在缝合肌肉层前后均滴加一滴青霉素溶液,缝合表皮层后于伤口处先后用洁尔灭及碘伏涂抹。这里涂抹青霉素,洁尔灭及碘伏均为防止伤口感染。置于鼠笼中,保温3～5h后小鼠苏醒。

假手术组小鼠腹腔注射5％水合氯醛的生理盐水(0.1ml/10g)。先后用碘伏及洁尔灭擦拭小鼠下腹部,剪开下腹部表皮层,沿着腹白线剪开肌肉层,剪开腹腔后在膀胱下找到子宫,沿子宫找到两侧输卵管,在两侧输卵管的盲端找到两侧呈小菜花状且有脂肪包裹的卵巢,不结扎输卵管,也不摘除卵巢,将其放回腹腔后,在缝合肌肉层前后均滴加一滴青霉素溶液,缝合表皮层后,于伤口处先后用洁尔灭及碘伏涂抹。置于鼠笼中,保温3～5h后小鼠苏醒。

手术后恢复七天。第八天模型组随机分组。小鼠或每天一次灌胃给予3-羟基姜黄素-4-och2co2h锶(5)与5‰cmcna的混悬液(剂量50.13μmol/kg/天)或雷尼酸锶与5‰cmcna混悬液(剂量501.3μmol/kg/天)或5‰cmcna溶液(剂量0.1ml/10g/天)。连续灌胃28天后小鼠经乙醚麻醉,牺牲,取双侧股骨,剔除肌肉组织,用游标卡尺测量其解剖长度,根据以下方法测量骨干重,骨灰重,骨矿含量。

1)脱脂:配置三氯甲烷/甲醇＝2/1的脱脂液,将小鼠左侧股骨浸泡于脱脂液中,每次3h,浸泡两次。在通风橱内挥发脱脂液。

2)测定骨干重:将股骨放入烘箱中120℃烘干6h,冷却至室温后称股骨干重。

3)测定骨灰重:称坩埚的重量(m1),将已测定干重的股骨置于小坩埚中,放入马弗炉中800℃煅烧8h,冷却到室温,称股骨灰和坩埚的总重(m2),将m2-m1计算股骨的灰重。

4)测定骨矿含量(bmc):计算股骨灰重与股骨干重的比值,得到骨矿含量。数据见表1。在50.13μmol/kg/天剂量下化合物5连续治疗28天的小鼠的骨矿含量(0.608±0.022)显著大于在0.1ml/10g/天剂量下5‰cmcna连续治疗28天的小鼠的骨矿含量(0.571±0.007,p<0.01),与在501.3μmol/kg/天剂量下雷尼酸锶连续治疗28天的小鼠的骨矿含量相当(0.595±0.019,p>0.05)。可见,化合物5在50.13μmol/kg/天剂量下不仅具有抗骨质疏松作用,而且可使小鼠的骨矿物密度恢复至摘除卵巢之前的水平。在只有阳性药雷尼酸锶1/10的剂量下化合物5仍有这么优秀的抗骨质疏松作用,说明本发明有突出的技术效果。

表1化合物5对去势小鼠股骨干重,灰重及骨矿含量的影响

a)与cmcna组比p<0.01；b)与cmcna比p<0.01,与假手术组比p<0.05,与雷尼酸锶组比p>0.05；n＝12。