柯赫氏芽孢杆菌及其用途的制作方法

文档序号:20265859发布日期:2020-04-03 18:22阅读:501来源:国知局

本发明属于微生物肥料技术领域,具体涉及一种柯赫氏芽孢杆菌及其用途。



背景技术:

据统计,当前我国单位面积化肥使用量为世界平均水平的3倍,居世界第一位。由于大量施用化肥,造成耕地土壤中化学养分大量累积,土壤酸化、次生盐渍化等问题越来越突出,土壤微生态平衡严重破坏,病原菌大量积累,植物生长弱势,病害高发,对农田生态环境安全和食品安全造成了严重威胁。改进当前农业生产中化肥农药过量施用的生产技术模式,改善土壤结构,增加土壤中有益微生物的数量和活性,促进植物生长,提高土壤中肥料的利用率,提高土壤的供肥能力,成为当前及以后我国农业发展的重要方向,对于恢复良好的农田生态环境,实现农业生产与自然和谐相处、共同发展,促进农业生态、经济、社会的可持续发展是十分必要的。

近年来,随着生物技术的不断进步,微生物肥料的研究与应用有了很大的发展,在我国也有微生物肥料应用方面的很多报道,是新型肥料的研究热点。研究表明,许多功能微生物可以固定空气中的氮气,溶解土壤中不能被植物直接吸收的磷素,分泌植物生长调节物质,促进植物根系生长,增强植物抗病能力,拮抗土壤中的致病微生物,减少土壤病害的发生。通过接种这些功能微生物制备的生物肥料,与化肥相比具有成本低,使用安全,持续效果好,增产稳定,非再生能源消耗少,对环境、食品安全,经济效益高等特点,同时可以改善土壤结构,提高土壤有机质含量,改良盐碱地,保持农牧业生态系统的平衡,实现农牧业生产的可持续发展。

但目前有效促进植物生长等的微生物菌肥的相关菌种仍较少,因此迫切需要开发基于新型微生物菌种的微生物菌肥的制备技术和方法,其具有广阔的应用前景和价值。



技术实现要素:

本发明要解决的技术问题是提供一种柯赫氏芽孢杆菌及其用途。

为了解决上述技术问题,本发明提供一种柯赫氏芽孢杆菌yq1-1,为柯赫氏芽孢杆菌(bacilluskochii),其保藏号:cgmccno.18470。

本发明还同时提供了上述柯赫氏芽孢杆菌yq1-1的用途:促进植物生长。

本发明还同时提供了一种微生物菌肥,为利用上述柯赫氏芽孢杆菌yq1-1制备而得的发酵菌液,含菌量为108~1010/ml。

本发明还同时提供了一种利用发酵菌液进行的促进植物生长的方法:按每亩配用0.1-2升发酵菌液的用量比,将发酵菌液用水稀释100-1000倍,将所得的稀释液浇灌于土壤中或者喷施于植物表面。

本发明的柯赫氏芽孢杆菌yq1-1,保藏名称为柯赫氏芽孢杆菌bacilluskochii,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号:cgmccno.18470,保藏时间2019年09月06日。

在本发明中,固体活化和液体活化的培养方式均为:37℃培养24~96小时。

固体培养基为:酵母膏5~20g/l,牛肉膏10~30g/l,葡萄糖5~50g/l,琼脂15~20g/l。

液体培养基为:酵母膏5~20g/l,牛肉膏10~30g/l,葡萄糖5~50g/l。

发酵培养基为:葡萄糖5~50克/l,酵母膏5~20克/l,蛋白胨10~30克/l,玉米粉5~50克/l,磷酸氢二钾0.1~5克/l,硫酸镁0.1~1克/l。

发酵方式为:按照5%(体积%)的接种量,将活化后的柯赫氏芽孢杆菌yq1-1接种至发酵培养基,于37℃发酵24~96小时,发酵后所获得菌液为微生物菌液;该菌液的含菌量为108~1010/ml。

该菌液为悬浮液。

本发明的促进植物生长的方法为以下任一:

预处理方式1:

按每亩0.1-2升菌液用量,将本制剂用水稀释100-1000倍,然后浇灌于土壤中。

预处理方式2、

按每亩0.1-2升用量,先将本制剂用水稀释100-1000倍,然后喷施于植物表面。

本发明具有如下技术优势:

(1)本发明中提供了一种基于柯赫氏芽孢杆菌的新型微生物菌肥制备方法;

(2)原料价格低廉、来源丰富;

(3)通过本方法培养获得的菌肥能显著促进植物的生长,对环境和人体健康无任何毒害作用,具有经济实用、安全高效、环境友好等特点。

综上所述,柯赫氏芽孢杆菌作为一种芽孢杆菌,虽然芽孢杆菌用于微生物肥料的已有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等数十种,但目前有关柯赫氏芽孢杆菌用于微生物肥料的研究报道较少,因此利用本微生物制备的微生物菌剂具有创新性,应用前景广阔。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此:

实施例1、柯赫氏芽孢杆菌yq1-1的筛选:

于浙江省杭州市利用有机肥堆肥物进行柯赫氏芽孢杆菌,得菌株yq1-1。

本发明的柯赫氏芽孢杆菌yq1-1进行了保藏,保藏信息如下:保藏名称为柯赫氏芽孢杆菌bacilluskochii,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号:cgmccno.18470,保藏时间2019年09月06日。

实施例2、微生物菌肥的制备:

1)、菌种活化:

a、先采用固体培养基斜面活化2代:

取一接种环的柯赫氏芽孢杆菌yq1-1接种至斜面固体培养基,于37℃培养48小时,得活化1代的柯赫氏芽孢杆菌;

然后重复上述活化,得到活化2代的柯赫氏芽孢杆菌。

所述固体培养基为酵母膏5克/l,牛肉膏10克/l,葡萄糖10克/l,琼脂20克/l。

该固体培养基的制备方法为:在1l水中加入酵母膏5克,牛肉膏10克,葡萄糖10克,琼脂20克,调节ph为7,然后高温灭菌(在121℃下灭菌20min)。

b、然后采用液体培养基活化2代:

取一接种环的活化2代的柯赫氏芽孢杆菌yq1-1接种至250ml液体培养基,于37℃培养24小时,得1代的柯赫氏芽孢杆菌液体种子液;

然后重复上述活化,得柯赫氏芽孢杆菌培养液。

所述液体培养基为酵母膏5克/l,牛肉膏10克/l,葡萄糖10克/l。

该液体培养基的制备方法为:在1l水中加入酵母膏5克,牛肉膏10克,葡萄糖10克,调节ph为7,然后高温灭菌(在121℃下灭菌20min)。

2)、采用发酵培养基进行发酵:

取上述步骤1)所得的柯赫氏芽孢杆菌培养液,按照5%(体积%)的接种量,接种至发酵培养基,于37℃发酵培养24小时,发酵后所获得菌液(含菌量为108/ml)为微生物菌肥。

所述发酵培养基为葡萄糖10克/l,酵母膏5克/l,豆粕20克/l,玉米粉10克/l,磷酸氢二钾2克/l,硫酸镁1克/l。

该发酵培养基的制备方法为:在1l水中加入葡萄糖10克、酵母膏5克、豆粕20克、玉米粉10克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁1克,调节ph为7,然后高温灭菌(在121℃下灭菌20min)。

田间小区试验

为验证微生物菌剂的效果,评价其肥效,分别在湖州市长兴县和杭州市建德县进行生菜施用微生物菌剂的小区试验,具体如下:

1.材料与方法

1.1试验地点

试验地点1:长兴县

试验地点2:建德市

1.2试验时间

长兴点——2019年;

建德点——2018年。

试验期间两个试验点均未发生严重的自然灾害。

1.3供试地基本情况

试验点受亚热带湿润季风气候影响,年温适中,雨量充沛,气候环境优越。长兴县供试土壤为水稻土,土壤偏酸性,有机质含量低;建德市供试土壤为黄泥砂田,土壤微酸性,有机质含量中等,磷钾含量丰富。各试验点土壤类型及理化性状如表1。

表1、试验点土壤类型及理化性状

1.4供试肥料

供试肥料为实施例2制备而得的发酵菌液(微生物菌肥),含菌量为108/ml。

1.5供试作物与品种

供试作物:生菜

品种:长兴点:202生菜;建德点:玻璃生菜。

1.6试验设计和方法

试验设置4个处理。

处理1:不施肥,ck;

处理2:常规施肥:

长兴点:基施复合肥(15-15-15)50kg/亩;

建德点:基施复合肥(15-15-15)50kg/亩。

处理3:常规施肥+灭活菌剂,即在常规施肥基础上施用灭活菌剂,灭活菌剂使用时间及使用量同处理4一致。

所述灭活菌剂为实施例2制备而得的发酵菌液进行灭活处理(100℃、30min)而得。

处理4:常规施肥+供试肥料,常规施肥基础上,在生菜定植后15天左右,按500倍液稀释(即100ml原液兑水50l),均匀喷施于根部土壤,每亩施用2瓶原液(约500ml),第二次和第三次分别在第一次和第二次施用后的7-10天喷施,每亩每次施用2瓶原液(约500ml),稀释500倍后均匀喷施于根部土壤,喷施最佳时间为阴天或晴天下午4点以后,避免雨天使用,大棚内喷施后24小时内不浇水。肥料久放瓶底部可能会形成沉淀,使用前摇匀再稀释。原液,即,实施例2制备而得的发酵菌液。

本试验为小区对比试验,各处理设3次重复,共设12个小区,随机区组排列。长兴县试验小区面积为30m2,建德市试验小区面积为20m2。各处理除施肥存在差异外,其他管理措施相同。

1.7主要农事管理措施

长兴点:

2019年4月12日翻耕,4月17日播种,5月15日施用基肥,5月21日移苗,208株/区,6月4日、6月12日和6月22日追施供试肥料,7月12日收获。

建德点:

2018年9月20日播种,2018年10月10日翻耕施基肥,2018年10月11日移栽,每小区350棵,2019月11日19日收获。

2.试验结果与分析

2.1不同处理对生菜生物学性状的影响

如表2所示,在一定范围内增施供试肥料有助于增加生菜单株产量、株高和产量。与不施肥处理(处理1)相比,长兴点单株重平均增加58.82%,株高增加37.72%,建德点单株重平均增加73.31%,产量增加78.98%;与常规施肥(处理2)相比,长兴点单株重平均增加8.00%,株高增加9.00%,建德点单株重平均增加23.95%,产量增加29.00%;与常规施肥+灭活处理(处理3)相比,长兴点单株重平均增加22.73%,株高增加11.06%,建德点单株重平均增加13.99%,产量增加20.56%。

表2、不同施肥处理对生菜生物学性状的影响

2.2不同处理对生菜产量的影响

如表3所示,在一定范围内增施供试肥料有助于增加生菜产量。与常规施肥(处理2)相比,长兴点生菜产量平均增加80.10kg/667m2,增产幅度8.48%,建德点平均增加426.88kg/667m2,增产幅度11.04%;与常规施肥+灭活处理(处理2)相比,长兴点平均增加88.7kg/667m2,增产幅度6.96%,建德点平均增加310.16kg/667m2,增产幅度7.79%。

表3、不同施肥处理对生菜产量的影响

3.试验结论

在常规施肥基础上增施供试肥料后,在一定范围内能一定程度上增加生菜产量,与常规施肥相比,长兴点平均增产8.48%;建德点平均增产11.04%;与灭活处理相比,长兴点平均增产6.96%;建德点平均增产7.79%。

最后,还需要注意的是,以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然,本发明不限于以上实施例,还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形,均应认为是本发明的保护范围。

当前第1页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1