抗体逃避性病毒载体的制作方法

文档序号:23728082发布日期:2021-01-26 18:04阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种重组腺相关病毒(aav)衣壳蛋白,其中所述衣壳蛋白包含在所述aav衣壳蛋白的抗原位点中的取代,其中所述取代具有seq id no:9、10、11、12、13、14、15、16、17、297、298、299或411-421中任一者的序列。2.如权利要求1所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述取代包含seq id no:9、10、14或17中任一者的序列。3.如权利要求1或2所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白包含第一氨基酸取代和第二氨基酸取代,其中所述第一氨基酸取代和所述第二氨基酸取代各自修饰所述aav衣壳蛋白上的不同抗原位点,其中所述第一氨基酸取代和所述第二氨基酸取代各自包含seq id no:9、10、11、12、13、14、15、16、17、297、298、299或411-421中的任一者。4.如权利要求1或2所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白包含第一氨基酸取代、第二氨基酸取代和第三氨基酸取代,其中所述第一氨基酸取代、所述第二氨基酸取代和所述第三氨基酸取代各自修饰所述aav衣壳蛋白上的不同抗原位点,其中所述第一氨基酸取代、所述第二氨基酸取代和所述第三氨基酸取代各自包含seq id no:9、10、11、12、13、14、15、16、17、297、298、299或411-421中的任一者。5.如权利要求4所述的重组aav衣壳,其中所述第一氨基酸取代包含seq id no.9;所述第二氨基酸取代包含seq id no.10、11、12、13、14、15、16、297、298、299或411-421中的任一者;且所述第三氨基酸取代包含seq id no.17。6.如权利要求5所述的重组aav衣壳,其中所述第一氨基酸取代包含seq id no.9;所述第二氨基酸取代包含seq id no.10;且所述第三氨基酸取代包含seq id no.17。7.如权利要求5所述的重组aav衣壳,其中所述第一氨基酸取代包含seq id no.9;所述第二氨基酸取代包含seq id no.14;且所述第三氨基酸取代包含seq id no.17。8.如权利要求1-7中任一项所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白还包含修饰所述衣壳的hi环的取代。9.如权利要求8所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳包含所述hi环中的一个或多个以下取代:p661r、t662s、q666g、s667d,其中所述编号对应于野生型aav8衣壳(seq id no:6),或p659r、t660s、a661t、k664g,其中所述编号对应于野生型aav9衣壳(seq id no:7)。10.如权利要求1至9中任一项所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白的aav血清型选自aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11、aav12、aavrh.8、aavrh.10、aavrh32.33、aavrh74、牛aav和禽aav。11.如权利要求1至9中任一项所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白是嵌合的。12.如权利要求11所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白包含源自两种或更多种aav血清型的序列。13.如权利要求12所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白包含源自三种或更多种aav血清型的序列。14.如权利要求1-10中任一项所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白包含与seq id no:18-80、300-410、422-612或783-785中的任一者具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。
15.如权利要求14所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白包含seq id no:18-80、300-410、422-612或783-785中的任一者的氨基酸序列。16.如权利要求15所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白包含seq id no:380或seq id no:384的氨基酸序列。17.如权利要求1至16中任一项所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述一个或多个抗原位点的修饰导致抗体与所述一个或多个抗原位点的结合受到抑制。18.如权利要求1至17中任一项所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述一个或多个抗原位点的修饰导致包含所述aav衣壳蛋白的病毒颗粒的感染性的中和受到抑制。19.一种重组aav衣壳蛋白,其包含seq id no:49的氨基酸序列。20.如权利要求19所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白通过用seq id no:9置换seq id no:49的跨越氨基酸454-460的区域来修饰。21.如权利要求19或20中任一项所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白通过用seq id no:10、11、12、13、14、15、16、297、298、299或411-421中的任一者置换seq id no:49的跨越氨基酸493-500的区域来修饰。22.如权利要求19至21中任一项所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白通过用seq id no:17置换seq id no:49的跨越氨基酸585-590的区域来修饰。23.如权利要求19至22中任一项所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述aav衣壳蛋白通过用seq id no:9置换seq id no:49的跨越氨基酸454-460的区域、用seq id no:10、11、12、13、14、15、16、297、298、299或411-421中的任一者置换seq id no:49的跨越氨基酸493-500的区域以及用seq id no:17置换seq id no:49的跨越氨基酸585-590的区域来修饰。24.如权利要求19至23中任一项所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述修饰导致抗体与所述aav衣壳蛋白的结合受到抑制。25.如权利要求19至24中任一项所述的重组aav衣壳蛋白,其中所述修饰导致包含所述aav衣壳蛋白的病毒颗粒的感染性的中和受到抑制。26.一种重组aav衣壳蛋白,其包含seq id no:18-80、300-410、422-612或783-785中任一者的氨基酸序列。27.一种重组aav衣壳蛋白,其包含seq id no:380或seq id no:384的氨基酸序列。28.一种核苷酸序列,其编码如权利要求1至27中任一项所述的重组aav衣壳蛋白。29.如权利要求28所述的核苷酸序列,其中所述核苷酸序列是dna序列。30.如权利要求28所述的核苷酸序列,其中所述核苷酸序列是rna序列。31.一种表达载体,其包含如权利要求28-30中任一项所述的核苷酸序列。32.一种细胞,其包含如权利要求28-30中任一项所述的核苷酸序列,或如权利要求31所述的表达载体。33.一种aav病毒载体,其包含如权利要求1至27中任一项所述的重组衣壳蛋白。34.如权利要求33所述的aav病毒载体,其还包含被所述衣壳蛋白衣壳化的货物核酸。35.如权利要求34所述的aav病毒载体,其中所述货物核酸编码治疗性蛋白或rna。36.如权利要求34-35中任一项所述的aav病毒载体,其中所述货物核酸编码基因编辑分子。37.如权利要求36所述的aav病毒载体,其中所述基因编辑分子是核酸酶。
38.如权利要求37所述的aav病毒载体,其中所述基因编辑分子是cas9核酸酶。39.如权利要求37所述的aav病毒载体,其中所述基因编辑分子是cpf1核酸酶。40.如权利要求36所述的aav病毒载体,其中所述基因编辑分子是单指导rna。41.一种药物组合物,其包含如权利要求33至40中任一项所述的aav病毒载体。42.如权利要求41所述的药物组合物,其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。43.一种药物组合物,其包含如权利要求32所述的细胞或如权利要求31所述的表达载体。44.如权利要求43所述的药物组合物,其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。45.一种治疗有需要的患者的方法,其包括向所述患者施用治疗有效量的如权利要求33-40中任一项所述的aav病毒载体或如权利要求41-44中任一项所述的药物组合物。46.如权利要求45所述的方法,其中所述患者患有肝脏疾病或病症。47.如权利要求46所述的方法,其中所述肝脏疾病或病症是原发性胆汁性肝硬化、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、自身免疫性肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、酒精性肝病、纤维化、黄疸、原发性硬化性胆管炎(psc)、布-加综合征、血色素沉着症、威尔逊氏病、酒精性纤维化、非酒精性纤维化、肝脂肪变性、吉尔伯特综合征、胆道闭锁、α-1-抗胰蛋白酶缺乏症、阿拉吉欧综合征、进行性家族性肝内胆汁淤积症、血友病b、遗传性血管性水肿(hae)、纯合子家族性高胆固醇血症(hofh)、杂合子家族性高胆固醇血症(hefh)、冯
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吉尔克氏病(gsdi)、血友病a、甲基丙二酸血症、丙酸血症、高胱氨酸尿症、苯丙酮酸尿症(pku)、酪氨酸血症i型、精氨酸酶i缺乏症、精氨琥珀酸裂解酶缺乏症、氨甲酰磷酸合成酶1缺乏症、瓜氨酸血症1型、希特林蛋白缺乏症、克里格勒-纳贾尔综合征1型、胱氨酸病、法布里病、糖原贮积病ib、lpl缺乏症、n-乙酰谷氨酸合成酶缺乏症、鸟氨酸转氨甲酰酶缺乏症、鸟氨酸移位酶缺乏症、原发性高草酸尿症i型或ada scid。48.如权利要求46所述的方法,其中所述肝脏疾病或病症是肝癌或转移。49.如权利要求45-48中任一项所述的方法,其中所述患者是哺乳动物。50.如权利要求49所述的方法,其中所述患者是人类。51.一种将核酸分子引入到细胞中的方法,其包括使所述细胞与如权利要求33-40中任一项所述的aav病毒载体接触。52.如权利要求33-40中任一项所述的aav病毒载体,其用作药物。53.如权利要求33-40中任一项所述的aav病毒载体,其用于治疗方法中。
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