一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌及其筛选方法和验证方法与流程

文档序号:26089700发布日期:2021-07-30 17:58阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:

s1、筛选出甘蔗糖蜜中的乙醇高产酵母菌株,记为lsk1;

s2、使lsk1菌株进行辣椒耐受的适应性进化,获得适应后菌株,记为lsk1pe。

2.一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌的验证方法,其特征在于,包括以下步骤:

s1、筛选出甘蔗糖蜜中的乙醇高产酵母菌株,记为lsk1;

s2、使lsk1菌株进行辣椒耐受的适应性进化,获得适应后菌株,记为lsk1pe;

s3、构建辣椒素存在的环境,基于同源菌株lsk1验证lsk1pe菌株的耐受辣椒能力。

3.根据权利要求1或2所述的一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌的筛选或验证方法,其特征在于,步骤s2具体包括:

s21、将步骤s1中获取到的lsk1菌株按一定百分比浓度接种量接种至含葡萄糖的培养基中,并加入初始百分比浓度辣椒粉至培养基中,培养直至获得当前百分比浓度辣椒粉条件下的稳定菌株;

s22、将上一步骤获得的稳定菌株按与上一步骤同样百分比浓度接种量转移至另一含同样浓度葡萄糖的培养基中,并加入较上一步骤更高百分比浓度的辣椒粉,在与上一步骤同样的条件下培养,直至获得当前百分比浓度辣椒粉条件下的稳定菌株;

s23、在预设辣椒粉浓度梯度范围内重复步骤s22直至获得适应高辣椒浓度的菌株,记为lsk1pe。

4.根据权利要求3所述的一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌的筛选或验证方法,其特征在于,步骤s21和s22中培养直至获得当前百分比浓度辣椒粉条件下的稳定菌株具体步骤包括:

(1)将菌株按一定百分比浓度接种量接种至含葡萄糖的培养基中,并加入当前百分比浓度辣椒粉至培养基后,进行一个适应性进化周期的培养;

(2)将上一步骤中经过一个适应性进化周期培养后的菌株按与上一步骤相同百分比浓度接种量转移至另一含同样浓度葡萄糖的培养基中,并加入与上一步骤相同百分比浓度辣椒粉至培养基中,再进行一个适应性进化周期的培养;

(3)重复步骤(2)多次直至获得当前百分比浓度辣椒粉条件下的稳定菌株。

5.根据权利要求4所述的一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌的筛选或验证方法,其特征在于,步骤s2中预设浓度梯度范围为1%~25%,初始百分比浓度为1%,重复步骤(2)至少2次,适应性进化周期至少为48h。

6.根据权利要求2所述的一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌的验证方法,其特征在于,步骤s3中通过构建辣椒素存在的环境,并比较辣椒环境下lsk1与lsk1pe生长状况、利用葡萄糖发酵的能力、利用淀粉发酵的能力来验证lsk1pe的耐受辣椒能力。

7.根据权利要求6所述的一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌的验证方法,其特征在于,步骤s3中将获取的lsk1和lsk1pe菌株在同样的条件下进行培养,并取样分别稀释获得多组不同稀释倍数下的菌液,同时制备含有不同百分比浓度辣椒粉培养基,从各组稀释倍数菌液取样加入至各个不同百分比浓度辣椒粉培养基中,经一定时间培养后获取各个培养基中的lsk1、lsk1pe菌株生长状况,验证辣椒环境下lsk1pe相对于lsk1菌株生长能力是否提高。

8.根据权利要求6所述的一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌的验证方法,其特征在于,步骤s3中通过分别将lsk1、lsk1pe菌株加入至含一定百分比浓度辣椒粉以及葡萄糖的培养基中测定其在辣椒环境下的利用葡萄糖发酵能力,验证辣椒环境下lsk1pe相对于lsk1菌株葡萄糖发酵能力是否提高。

9.根据权利要求6所述的一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌的验证方法,其特征在于,步骤s3中通过分别将lsk1、lsk1pe加入至含糖苷酶、一定百分比浓度辣椒粉以及淀粉的培养基中测定其在辣椒环境下的利用淀粉发酵能力,验证辣椒环境下lsk1pe相对于lsk1菌株利用淀粉发酵的能力是否提高。

10.根据权利要求1至9任一项方法获得的耐受辣椒的乙醇高产酵母菌,其特征在于,为基于甘蔗糖蜜中筛选出的并经辣椒耐受适应性进化获得的乙醇高产菌株,用于含辣椒素的餐厨垃圾的微生物发酵。


技术总结
一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌的筛选及验证方法,筛选方法包括以下步骤:S1、筛选出甘蔗糖蜜中的乙醇高产酵母菌株,记为LSK1;S2、使LSK1菌株进行辣椒耐受的适应性进化,获得适应后菌株,记为LSK1pe;验证方法为在此基础上增加:步骤S3、构建辣椒素存在的环境,基于同源菌株LSK1验证LSK1pe菌株的耐受辣椒能力。通过筛选方法能够获得经辣椒适应性进化的乙醇高产酵母菌,通过筛选方法获得的酵母菌有助于应用在含辣椒的餐厨垃圾的微生物发酵。而验证方法则能进一步对筛选获得的耐受辣椒且乙醇高产酵母进行耐受辣椒验证,有助于获得验证确认后的酵母,便于后续投入实际应用。

技术研发人员:刘泽寰;林蒋海;孙涛
受保护的技术使用者:广东利世康低碳科技有限公司;广州利世康工业科技有限公司
技术研发日:2020.01.14
技术公布日:2021.07.30
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