1.电穿孔方法，其包括：
2.电穿孔方法，其包括：
3.电穿孔方法，其包括：
4.连续编辑细胞基因的方法，其包括：
5.连续编辑细胞基因的方法，其包括：
6.连续编辑细胞基因的方法，其包括：
7.权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一药剂和第二药剂是相同的药剂。
8.权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一药剂和第二药剂是不同的药剂。
9.权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述第一药剂和第二药剂是核酸、多肽、蛋白质或小分子。
10.权利要求9所述的方法，其中所述核酸是rna，并且其中所述rna是mrna、mirna、shrna、sirna或反义寡核苷酸。
11.权利要求9所述的方法，其中所述核酸是dna，并且其中所述dna是反义寡核苷酸、载体或双义线性dna。
12.权利要求9所述的方法，其中所述蛋白质是核糖核蛋白。
13.权利要求12所述的方法，其中所述核糖核蛋白包含cas9蛋白和指导rna。
14.电穿孔方法，其包括：
15.电穿孔方法，其包括：
16.电穿孔方法，其包括：
17.连续编辑细胞的方法，其包括：
18.权利要求14至17中任一项所述的方法，其中所述第一药剂和第二药剂是相同的药剂。
19.权利要求14至17中任一项所述的方法，其中所述第一药剂和第二药剂是不同的药剂。
20.权利要求14至19中任一项所述的方法，其中所述第一药剂和第二药剂是核酸、多肽、蛋白质或小分子。
21.权利要求20所述的方法，其中所述核酸是rna，并且其中所述rna是mrna、mirna、shrna、sirna或反义寡核苷酸。
22.权利要求20所述的方法，其中所述核酸是dna，并且其中所述dna是反义寡核苷酸、载体或双义线性dna。
23.权利要求20所述的方法，其中所述蛋白质是核糖核蛋白。
24.权利要求23所述的方法，其中所述核糖核蛋白包含cas9蛋白和指导rna。
25.权利要求1至24中任一项所述的方法，其还包括在所述第一电脉冲和/或第二电脉冲之后的静置步骤。
26.权利要求25所述的方法，其中所述静置步骤包括将所述样品孵育10至30分钟。
27.权利要求25或权利要求26所述的方法，其中所述静置步骤包括在25℃至50℃下孵育所述样品。
28.权利要求25至27中任一项所述的方法，其中所述静置步骤包括在3％至8％co2下孵育所述样品。
29.权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述样品在所述第一电脉冲和/或第二电脉冲之后不经受静置步骤。
30.权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述第一场强等于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间长于所述第二脉冲持续时间。
31.权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述第一场强等于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间短于所述第二脉冲持续时间。
32.权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述第一场强小于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间等于所述第二脉冲持续时间。
33.权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述第一场强大于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间等于所述第二脉冲持续时间。
34.权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述第一场强小于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间长于所述第二脉冲持续时间。
35.权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述第一场强大于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间长于所述第二脉冲持续时间。
36.权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述第一场强小于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间短于所述第二脉冲持续时间。
37.权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述第一场强大于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间短于所述第二脉冲持续时间。
38.权利要求1至37中任一项所述的方法，其中所述第一场强和第一脉冲持续时间产生第一总施加电能并且所述第二场强和第二脉冲持续时间产生第二总施加电能，并且其中所述第一总施加电能不同于所述第二总施加电能。
39.权利要求38所述的方法，其中所述第一总施加电能大于所述第二总施加电能。
40.权利要求1至39中任一项所述的方法，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的所述第一场强和第二场强是所述电脉冲的电压幅值、所述电脉冲的持续时间和所述样品的电导率的函数。
41.权利要求40所述的方法，其中所述电脉冲的电压幅值为0.001伏特至10,000伏特、0.01伏特至10,000伏特、0.1伏特至10,000伏特、1伏特至10,000伏特、1伏特至9,000伏特、1伏特至8,000伏特、1伏特至7,000伏特、1伏特至6,000伏特、1伏特至5,000伏特、1伏特至4,000伏特、1伏特至3,000伏特、1伏特至2,000伏特、或1伏特至1,000伏特。
42.权利要求40或权利要求41所述的方法，其中所述电脉冲的电压幅值为100伏特至900伏特。
43.权利要求40至42中任一项所述的方法，其中所述样品的电导率是这样的参数的函数，所述参数包括电穿孔缓冲液的离子组成、待被加载到所述细胞中的药剂的浓度、细胞密度、温度和压力。
44.权利要求40至43中任一项所述的方法，其中所述样品的电导率为0.01西门子/米至10西门子/米、0.01西门子/米至1西门子/米、0.1西门子/米至10西门子/米、0.1西门子/米至1西门子/米、或1西门子/米至10西门子/米。
45.权利要求40至44中任一项所述的方法，其中所述样品的电导率为1.0至3.0西门子/米。
46.权利要求40至45中任一项所述的方法，其中所述第一场强和第二场强还是电穿孔室的几何形状的函数。
47.权利要求46所述的方法，其中所述电穿孔室包含0.001cm至10cm、0.001cm至1cm、0.01cm至10cm、0.01cm至1cm、0.1cm至10cm、0.1cm至1cm、或1cm至10cm的电极间隙。
48.权利要求46或权利要求47所述的方法，其中所述电穿孔室包含0.01cm至1cm的电极间隙。
49.权利要求1至48中任一项所述的方法，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的所述第一场强和第二场强为0.01kv/cm至10kv/cm、0.01kv/cm至1kv/cm、0.1kv/cm至10kv/cm、0.1kv/cm至1kv/cm、或1kv/cm至10kv/cm。
50.权利要求1至49中任一项所述的方法，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的所述第一场强和第二场强为0.3kv/cm至3kv/cm。
51.权利要求1至50中任一项所述的方法，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的所述第一脉冲持续时间和第二脉冲持续时间为10-6秒至10秒、10-6秒至1秒、10-3秒至10秒、或10-3秒至1秒。
52.权利要求1至51中任一项所述的方法，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的所述第一脉冲持续时间和第二脉冲持续时间为1微秒至100毫秒。
53.权利要求1至52中任一项所述的方法，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲还包含与脉冲数、宽度、形状、模式或极性相关的特征。
54.权利要求53所述的方法，其中所述脉冲数为1个脉冲至1000个脉冲、1个脉冲至900个脉冲、1个脉冲至800个脉冲、1个脉冲至700个脉冲、1个脉冲至600个脉冲、1个脉冲至500个脉冲、1个脉冲至400个脉冲、1个脉冲至300个脉冲、1个脉冲至200个脉冲、1个脉冲至100个脉冲、1个脉冲至90个脉冲、1个脉冲至80个脉冲、1个脉冲至70个脉冲、1个脉冲至60个脉冲、1个脉冲至50个脉冲、1个脉冲至40个脉冲、1个脉冲至30个脉冲、1个脉冲至20个脉冲、或1个脉冲至10个脉冲。
55.权利要求53或权利要求54所述的方法，其中所述脉冲数为1个脉冲至130个脉冲。
56.权利要求53至55中任一项所述的方法，其中所述脉冲宽度是指数衰减率的函数。
57.权利要求56所述的方法，其中所述指数衰减率是所述样品的电阻和用于实现电穿孔的电源的电容的函数。
58.权利要求57所述的方法，其中所述样品的电阻为1欧姆至10000欧姆、1欧姆至9000欧姆、1欧姆至8000欧姆、1欧姆至7000欧姆、1欧姆至6000欧姆、1欧姆至5000欧姆、1欧姆至4000欧姆、1欧姆至3000欧姆、1欧姆至2000欧姆、1欧姆至1000欧姆、1欧姆至900欧姆、1欧姆至800欧姆、1欧姆至700欧姆、1欧姆至600欧姆、1欧姆至500欧姆、1欧姆至400欧姆、1欧姆至300欧姆、1欧姆至200欧姆、1欧姆至100欧姆、1欧姆至90欧姆、1欧姆至80欧姆、1欧姆至70欧姆、1欧姆至60欧姆、1欧姆至50欧姆、1欧姆至40欧姆、1欧姆至30欧姆、1欧姆至20欧姆、或1欧姆至10欧姆。
59.权利要求57或权利要求58所述的方法，其中所述样品的电阻为1欧姆至1000欧姆。
60.权利要求57至59中任一项所述的方法，其中所述电源电容为1μf至1,000,000μf、1μf至100,000μf、1μf至10,000μf、1μf至1,000μf、或1μf至100μf。
61.权利要求57至60中任一项所述的方法，其中所述电源电容为1000μf至5000μf。
62.权利要求53至61中任一项所述的方法，其中所述脉冲形状是方波脉冲或指数衰减波脉冲。
63.权利要求53至62中任一项所述的方法，其中所述脉冲模式包括与所述第一脉冲或第二脉冲的持续时间相对应的单脉冲。
64.权利要求53至62中任一项所述的方法，其中所述脉冲模式包括多脉冲，其中所述多脉冲的组合持续时间与所述第一脉冲或第二脉冲的持续时间相对应。
65.权利要求53至64中任一项所述的方法，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的极性为正或负。
66.权利要求1至65中任一项所述的方法，其中在所述样品经受所述第一脉冲之后至少12小时至至少48小时使所述样品经受所述第二电脉冲。
67.权利要求66所述的方法，其中在所述样品经受所述第一脉冲之后至少24小时使所述样品经受所述第二电脉冲。
68.权利要求1至67中任一项所述的方法，其中所述方法通过具有包含指令的非暂态计算机可读介质的电穿孔系统进行，所述指令当由处理器执行时引起所述处理器执行所述第一方案和第二方案以对所述样品进行电穿孔。
69.权利要求1至68中任一项所述的方法，其中所述电穿孔系统包含流式电穿孔设备，并且其中当所述样品在所述流式电穿孔设备内流动时使所述样品经受所述电脉冲。
70.权利要求1至69中任一项所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
71.权利要求70所述的方法，其中所述细胞是人细胞、鼠细胞、大鼠细胞、仓鼠细胞或灵长类细胞。
72.权利要求70或权利要求71所述的方法，其中所述细胞是原代细胞。
73.权利要求70至72中任一项所述的方法，其中所述细胞是经培养细胞。
74.权利要求73所述的方法，其中所述经培养细胞是经培养细胞系。
75.权利要求74所述的方法，其中所述经培养细胞系包括
76.权利要求70至74中任一项所述的方法，其中所述细胞包括脂肪细胞、软骨细胞、内皮细胞、上皮细胞、成纤维细胞、肝细胞、角质形成细胞、肌细胞、神经元、骨细胞、外周血单个核细胞(pbmc)、脾细胞、干细胞或胸腺细胞。
77.权利要求76所述的方法，其中所述pbmc是外周血淋巴细胞(pbl)。
78.权利要求77所述的方法，其中所述pbl是自然杀伤(nk)细胞、t细胞或b细胞。
79.权利要求76所述的方法，其中所述pbmc是单核细胞。
80.权利要求79所述的方法，其中所述单核细胞是巨噬细胞或树突细胞。
81.权利要求80所述的方法，其中所述巨噬细胞是小胶质细胞。
82.权利要求76所述的方法，其中所述干细胞是脂肪干细胞、胚胎干细胞、造血干细胞、诱导多能干细胞、间充质干细胞或神经干细胞。
83.权利要求1至82中任一项所述的方法，其中所述药剂的加载效率为至少50％、60％、70％、80％或90％。
84.权利要求1至83中任一项所述的方法，其中细胞生存力在所述第二电脉冲之后12至96小时为至少50％。
85.权利要求1至84中任一项所述的方法，其中细胞生存力在所述第二电脉冲之后12至96小时为至少60％。
86.权利要求1至85中任一项所述的方法，其中细胞生存力在所述第二电脉冲之后12至96小时为至少70％。
87.权利要求1至86中任一项所述的方法，其中细胞生存力在所述第二电脉冲之后12至96小时为至少80％。
88.权利要求1至87中任一项所述的方法，其中细胞生存力在所述第二电脉冲之后12至96小时为至少90％。
89.权利要求1至88中任一项所述的方法，其中经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至96小时有约50％至90％有生存力。
90.权利要求89所述的方法，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至72小时有约50％至90％有生存力。
91.权利要求89所述的方法，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至48小时有约50％至90％有生存力。
92.权利要求89所述的方法，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后24小时有约50％至90％有生存力。
93.权利要求1至89中任一项所述的方法，其中经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至96小时有约60％至90％有生存力。
94.权利要求93所述的方法，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至72小时有约60％至90％有生存力。
95.权利要求93所述的方法，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至48小时有约60％至90％有生存力。
96.权利要求93所述的方法，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后24小时有约60％至90％有生存力。
97.经电穿孔的细胞、细胞颗粒或脂质囊泡，其使用权利要求1至96中任一项所述的方法产生。
98.电穿孔系统，其具有包含指令的非暂态计算机可读介质，所述指令当由处理器执行时引起所述处理器进行以下：
99.权利要求98所述的电穿孔系统，其中所述第一场强等于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间长于所述第二脉冲持续时间。
100.权利要求98所述的电穿孔系统，其中所述第一场强等于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间短于所述第二脉冲持续时间。
101.权利要求98所述的电穿孔系统，其中所述第一场强小于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间等于所述第二脉冲持续时间。
102.权利要求98所述的电穿孔系统，其中所述第一场强大于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间等于所述第二脉冲持续时间。
103.权利要求98所述的电穿孔系统，其中所述第一场强小于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间长于所述第二脉冲持续时间。
104.权利要求98所述的电穿孔系统，其中所述第一场强大于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间长于所述第二脉冲持续时间。
105.权利要求98所述的电穿孔系统，其中所述第一场强小于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间短于所述第二脉冲持续时间。
106.权利要求98所述的电穿孔系统，其中所述第一场强大于所述第二场强，并且其中所述第一脉冲持续时间短于所述第二脉冲持续时间。
107.权利要求98至106中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一场强和第一脉冲持续时间产生第一总施加电能并且所述第二场强和第二脉冲持续时间产生第二总施加电能，并且其中所述第一总施加电能不同于所述第二总施加电能。
108.权利要求107所述的电穿孔系统，其中所述第一总施加电能大于所述第二总施加电能。
109.权利要求98至108中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的所述第一场强和第二场强是所述电脉冲的电压幅值、所述电脉冲的持续时间和所述样品的电导率的函数。
110.权利要求109所述的电穿孔系统，其中所述电脉冲的电压幅值为0.001伏特至10,000伏特、0.01伏特至10,000伏特、0.1伏特至10,000伏特、1伏特至10,000伏特、1伏特至9,000伏特、1伏特至8,000伏特、1伏特至7,000伏特、1伏特至6,000伏特、1伏特至5,000伏特、1伏特至4,000伏特、1伏特至3,000伏特、1伏特至2,000伏特、或1伏特至1,000伏特。
111.权利要求109或权利要求110所述的电穿孔系统，其中所述电脉冲的电压幅值为100伏特至900伏特。
112.权利要求109至111中任一项所述的电穿孔系统，其中所述样品的电导率是这样的参数的函数，所述参数包括电穿孔缓冲液的离子组成、待被加载到细胞中的药剂的浓度、细胞密度、温度和压力。
113.权利要求109至111中任一项所述的电穿孔系统，其中所述样品的电导率为0.01西门子/米至10西门子/米、0.01西门子/米至1西门子/米、0.1西门子/米至10西门子/米、0.1西门子/米至1西门子/米、或1西门子/米至10西门子/米。
114.权利要求109至113中任一项所述的电穿孔系统，其中所述样品的电导率为1.0至3.0西门子/米。
115.权利要求109至114中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一场强和第二场强还是电穿孔室的几何形状的函数。
116.权利要求115所述的电穿孔系统，其中所述电穿孔室包含0.001cm至10cm、0.001cm至1cm、0.01cm至10cm、0.01cm至1cm、0.1cm至10cm、0.1cm至1cm、或1cm至10cm的电极间隙。
117.权利要求115或权利要求116所述的电穿孔系统，其中所述电穿孔室包含0.01cm至1cm的电极间隙。
118.权利要求98至117中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的所述第一场强和第二场强为0.01kv/cm至10kv/cm、0.01kv/cm至1kv/cm、0.1kv/cm至10kv/cm、0.1kv/cm至1kv/cm、或1kv/cm至10kv/cm。
119.权利要求98至118中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的所述第一场强和第二场强为0.3kv/cm至3kv/cm。
120.权利要求98至119中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的所述第一脉冲持续时间和第二脉冲持续时间为10-6秒至10秒、10-6秒至1秒、10-3秒至10秒、或10-3秒至1秒。
121.权利要求98至120中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的所述第一脉冲持续时间和第二脉冲持续时间为1微秒至100毫秒。
122.权利要求98至121中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲还包含与脉冲数、宽度、形状、模式或极性相关的特征。
123.权利要求122所述的电穿孔系统，其中所述脉冲数为1个脉冲至1000个脉冲、1个脉冲至900个脉冲、1个脉冲至800个脉冲、1个脉冲至700个脉冲、1个脉冲至600个脉冲、1个脉冲至500个脉冲、1个脉冲至400个脉冲、1个脉冲至300个脉冲、1个脉冲至200个脉冲、1个脉冲至100个脉冲、1个脉冲至90个脉冲、1个脉冲至80个脉冲、1个脉冲至70个脉冲、1个脉冲至60个脉冲、1个脉冲至50个脉冲、1个脉冲至40个脉冲、1个脉冲至30个脉冲、1个脉冲至20个脉冲、或1个脉冲至10个脉冲。
124.权利要求122或权利要求123所述的电穿孔系统，其中所述脉冲数为1个脉冲至130个脉冲。
125.权利要求122至124中任一项所述的电穿孔系统，其中所述脉冲宽度是指数衰减率的函数。
126.权利要求125所述的电穿孔系统，其中所述指数衰减率是所述样品的电阻和用于实现电穿孔的电源的电容的函数。
127.权利要求126所述的电穿孔系统，其中所述样品的电阻为1欧姆至10000欧姆、1欧姆至9000欧姆、1欧姆至8000欧姆、1欧姆至7000欧姆、1欧姆至6000欧姆、1欧姆至5000欧姆、1欧姆至4000欧姆、1欧姆至3000欧姆、1欧姆至2000欧姆、1欧姆至1000欧姆、1欧姆至900欧姆、1欧姆至800欧姆、1欧姆至700欧姆、1欧姆至600欧姆、1欧姆至500欧姆、1欧姆至400欧姆、1欧姆至300欧姆、1欧姆至200欧姆、1欧姆至100欧姆、1欧姆至90欧姆、1欧姆至80欧姆、1欧姆至70欧姆、1欧姆至60欧姆、1欧姆至50欧姆、1欧姆至40欧姆、1欧姆至30欧姆、1欧姆至20欧姆、或1欧姆至10欧姆。
128.权利要求125或权利要求126所述的电穿孔系统，其中所述样品的电阻为1欧姆至1000欧姆。
129.权利要求126至128中任一项所述的电穿孔系统，其中所述电源电容为1μf至1,000,000μf、1μf至100,000μf、1μf至10,000μf、1μf至1,000μf、或1μf至100μf。
130.权利要求126至129中任一项所述的电穿孔系统，其中所述电源电容为1000μf至5000μf。
131.权利要求122至130中任一项所述的电穿孔系统，其中所述脉冲形状是方波脉冲或指数衰减波脉冲。
132.权利要求122至131中任一项所述的电穿孔系统，其中所述脉冲模式包括与所述第一脉冲或第二脉冲的持续时间相对应的单脉冲。
133.权利要求122至131中任一项所述的电穿孔系统，其中所述脉冲模式包括多脉冲，其中所述多脉冲的组合持续时间与所述第一脉冲或第二脉冲的持续时间相对应。
134.权利要求122至133中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一电脉冲和第二电脉冲的极性为正或负。
135.权利要求98至134中任一项所述的电穿孔系统，其中在所述样品经受所述第一脉冲之后至少12小时至至少48小时使所述样品经受所述第二电脉冲。
136.权利要求135所述的电穿孔系统，其中在所述样品经受所述第一脉冲之后至少24小时使所述样品经受所述第二电脉冲。
137.权利要求98至136中任一项所述的电穿孔系统，其中所述电穿孔系统包含流式电穿孔设备，并且其中当所述样品在所述流式电穿孔设备内流动时使所述样品经受所述电脉冲。
138.权利要求98至137中任一项所述的电穿孔系统，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
139.权利要求138所述的电穿孔系统，其中所述细胞是人细胞、鼠细胞、大鼠细胞、仓鼠细胞或灵长类细胞。
140.权利要求138或权利要求139所述的电穿孔系统，其中所述细胞是原代细胞。
141.权利要求138至140中任一项所述的电穿孔系统，其中所述细胞是经培养细胞。
142.权利要求141所述的电穿孔系统，其中所述经培养细胞是经培养细胞系。
143.权利要求142所述的电穿孔系统，其中所述经培养细胞系包括3t3，697，10t1/2，1321n1，a549，ahr77，b-lcl，b16，b65，ba/f3，bhk，c2c12，c6，caco-2，cap，caski，chago-k-1，cho，cos，dg75，dld-1，el4，h1299，hacat，hap1，hct116，hek，hcla，hcpg2，hl60，hos，ht1080，ht29，huh-7，huvec，ins-1/grinch，jurkat，k46，k562，kg1，khyg-1，l5278y，l6，lncap，ls180，mcf7，mda-mb-231，me-1 80，mg-63，min-6，molt4，nalm6，nd7/23，neuro2a，nk92，ns/0，p3u1，panc-1，pc-3，pc12，per.c6，pm1，ramos，raw 264.7，rbl，renca，rle，sh-sy5y，sk-br-3，sk-mes-1，sk-n-sh，sk-ov-3，sp2/0，sw403，thp-1，u2os，u937，vero，yb2/0，或其衍生物。
144.权利要求138至142中任一项所述的电穿孔系统，其中所述细胞包括脂肪细胞、软骨细胞、内皮细胞、上皮细胞、成纤维细胞、肝细胞、角质形成细胞、肌细胞、神经元、骨细胞、外周血单个核细胞(pbmc)、脾细胞、干细胞或胸腺细胞。
145.权利要求144所述的电穿孔系统，其中所述pbmc是外周血淋巴细胞(pbl)。
146.权利要求145所述的电穿孔系统，其中所述pbl是自然杀伤(nk)细胞、t细胞或b细胞。
147.权利要求144所述的电穿孔系统，其中所述pbmc是单核细胞。
148.权利要求147所述的电穿孔系统，其中所述单核细胞是巨噬细胞或树突细胞。
149.权利要求148所述的电穿孔系统，其中所述巨噬细胞是小胶质细胞。
150.权利要求144所述的电穿孔系统，其中所述干细胞是脂肪干细胞、胚胎干细胞、造血干细胞、诱导多能干细胞、间充质干细胞或神经干细胞。
151.权利要求98至150中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一药剂和第二药剂是相同的药剂。
152.权利要求98至150中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一药剂和第二药剂是不同的药剂。
153.权利要求98至152中任一项所述的电穿孔系统，其中所述第一药剂和第二药剂是核酸、多肽、蛋白质或小分子。
154.权利要求153所述的电穿孔系统，其中所述核酸是rna，并且其中所述rna是mrna、mirna、shrna或sirna。
155.权利要求153所述的电穿孔系统，其中所述核酸是dna，并且其中所述dna是反义寡核苷酸或载体。
156.权利要求153所述的电穿孔系统，其中所述蛋白质是核糖核蛋白。
157.权利要求156所述的电穿孔系统，其中所述核糖核蛋白包含cas9蛋白和指导rna。
158.权利要求98至157中任一项所述的电穿孔系统，其中所述药剂的加载效率为至少50％、60％、70％、80％或90％。
159.权利要求98至158中任一项所述的电穿孔系统，其中细胞生存力在所述第二电脉冲之后12至96小时为至少50％。
160.权利要求98至159中任一项所述的电穿孔系统，其中细胞生存力在所述第二电脉冲之后12至96小时为至少60％。
161.权利要求98至160中任一项所述的电穿孔系统，其中细胞生存力在所述第二电脉冲之后12至96小时为至少70％。
162.权利要求98至161中任一项所述的电穿孔系统，其中细胞生存力在所述第二电脉冲之后12至96小时为至少80％。
163.权利要求98至162中任一项所述的电穿孔系统，其中细胞生存力在所述第二电脉冲之后12至96小时为至少90％。
164.权利要求98至163中任一项所述的电穿孔系统，其中经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至96小时有约50％至90％有生存力。
165.权利要求164所述的电穿孔系统，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至72小时有约50％至90％有生存力。
166.权利要求164所述的电穿孔系统，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至48小时有约50％至90％有生存力。
167.权利要求164所述的电穿孔系统，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后24小时有约50％至90％有生存力。
168.权利要求98至164中任一项所述的电穿孔系统，其中经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至96小时有约60％至90％有生存力。
169.权利要求168所述的电穿孔系统，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至72小时有约60％至90％有生存力。
170.权利要求168所述的电穿孔系统，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后12至48小时有约60％至90％有生存力。
171.权利要求168所述的电穿孔系统，其中所述经电穿孔的细胞在所述第二电脉冲之后24小时有约60％至90％有生存力。
172.经电穿孔的细胞、细胞颗粒或脂质囊泡，其使用权利要求98至171中任一项所述的电穿孔系统产生。