D为无水乙醇。
[0039] 本发明的茶叶核酸的提取方法，利用上述的提取茶叶核酸的试剂进行提取，包括 如下步骤：
[0040] S1、茶叶的研磨：将茶叶磨碎得到茶叶粉末；其中，该茶叶为新鲜茶叶或茶叶制 品。
[0041] S2、去除茶叶的细胞壁，得到去细胞壁的茶叶裂解液：使用上述试剂A与茶叶 粉末混匀，再加入上述试剂B，采用震荡混匀，混匀的时间为1-5分钟，采用振荡加热反 应进行裂解反应，得到反应液；将反应液在0-4°C下离心5-30分钟，其中离心的转速为 10000-15000rpm，离心半径为10cm，离心后收集上层水相，即得到去除细胞壁的茶叶裂解 液；所述茶叶、所述试剂A和所述试剂B的配比为1yg-lg:400y1 :400y1。所述的裂解反 应时间为30-60min。
[0042]S3、纯化去细胞壁的茶叶裂解液：在去除细胞壁的茶叶裂解液中加入等体积的上 述试剂C，在温度为15-25°C的振荡条件下进行纯化反应15-30min，得到纯化裂解液；所述 纯化反应温度为60-70 °C。
[0043]S4、得到茶叶的DNA和RNA:在纯化裂解液中加入等体积的上述试剂D，混匀，在 0_4°C下离心5-10分钟，离心的转速为10000-15000rpm，离心半径为10cm，离心后得到茶叶 细胞内的DNA和RNA。
[0044]实施1
[0045] 茶叶：新鲜茶叶
[0046] 试剂：试剂A:3-[(3_胆固醇氨丙基）二甲基氨基]-1-丙磺酸、十二烷基肌氨酸 钠和0 _巯基乙醇在试剂A中的体积百分含量浓度均为0. 1 % ;Tris在试剂A中的浓度为 10mM;EDTA在试剂A中的浓度为10mM;试剂A的pH值为7. 5 ;
[0047] 试剂B:水饱和酚、吡咯烷酮、乙醇的体积比为98:1:1 ;
[0048] 试剂C:氯仿和异戊醇的体积比为25:1 ;
[0049] 试剂D:无水乙醇；
[0050] 75% 乙醇。
[0051]1、茶叶DNA和RNA的提取
[0052]S1、茶叶的研磨：用研钵将茶叶磨碎。
[0053]S2、去除茶叶的细胞壁，得到去细胞壁的茶叶裂解液：
[0054] 取5mg茶叶粉末装入1. 5ml的离心管中，加入400ul的试剂A，用移液枪将沉淀物 重悬，使充分混合在试剂A中。然后在混合物中加入400ul的试剂B，在涡旋器上剧烈震荡 2分钟，在震荡过程中按紧离心管的盖子，防止混合物漏出。剧烈震荡结束后，将离心管放 置于65°C的震荡仪中，温育1个小时，在此期间每间隔30秒剧烈震荡5秒钟。将装有裂解 液离心管在冰上进行冰浴5分钟（0°C)，然后将离心管在4°C的条件下，12000rpm进行离 心5分钟。离心结束后，离心管中溶液自然分层，小心将上层水相用移液枪吸出转移至新的 1. 5ml的离心管中，尽量避免吸入中间的蛋白层和下层有机相溶剂，得到去细胞壁的茶叶裂 解液。
[0055]S3、纯化去细胞壁的茶叶裂解液：
[0056] 在吸出的去细胞壁的茶叶裂解液中加入400ul的试剂C，将其在涡旋震荡仪上剧 烈震荡。将装有混合物的离心管在在4°C的条件下，12000rpm进行离心5分钟。离心结束 后，离心管中的溶液自然分层，小心将上层水相用移液枪吸出转移至新的1.5ml的离心管 中，尽量避免吸入中间的蛋白层和下层有机相溶剂，得到去纯化的除细胞壁茶叶裂解液。
[0057] S4、得到茶叶的DNA和RNA
[0058] 在纯化的除细胞壁茶叶裂解液中加入2倍体积的试剂D，-20°C保温2小时，4°C 下12000rpm离心lOmin，弃掉上清。沉淀用lml的70%乙醇洗涤后，4°C下12000rpm离心 5min，将乙醇弃掉。将沉淀在室温条件下自然干燥，加入50ul纯水，将沉淀充分溶解，得到 茶叶的DNA和RNA。调整醇沉淀的条件，虽然会降低核酸的得率，但因为可以大大提高纯度。
[0059]实施2
[0060] 茶叶：新鲜茶叶
[0061] 试剂：试剂A:3-[(3_胆固醇氨丙基）二甲基氨基]-1-丙磺酸、十二烷基肌氨酸钠 在试剂A中的体积百分含量浓度均为0. 05% ;Tris在试剂A中的浓度为5mM;EDTA在试剂 A中的浓度为5mM; 0 -巯基乙醇在试剂A中的体积百分含量浓度为0. 1 % ;试剂A的pH值 为 7.2 ;
[0062] 试剂B:水饱和酚、吡咯烷酮、乙醇的体积比为98:1:1 ;
[0063] 试剂C:氯仿和异戊醇的体积比为25:1 ;
[0064] 试剂D :无水乙醇；
[0065] 75% 乙醇。
[0066]1、茶叶DNA和RNA的提取
[0067]S1、茶叶的研磨：用研钵将茶叶磨碎。
[0068]S2、去除茶叶的细胞壁，得到去细胞壁的茶叶裂解液：
[0069] 取1yg茶叶粉末装入1. 5ml的离心管中，加入400ul的试剂A，用移液枪将沉淀 物重悬，使充分混合在试剂A中。然后在混合物中加入400ul的试剂B，在涡旋器上剧烈震 荡1分钟，在震荡过程中按紧离心管的盖子，防止混合物漏出。剧烈震荡结束后，将离心管 放置于60°C的震荡仪中，温育1个小时，在此期间每间隔30秒剧烈震荡5秒钟。将装有裂 解液离心管在冰上进行冰浴5分钟（0°C)，然后将离心管在0°C的条件下，lOOOOrpm进行离 心5分钟。离心结束后，离心管中溶液自然分层，小心将上层水相用移液枪吸出转移至新的 1. 5ml的离心管中，尽量避免吸入中间的蛋白层和下层有机相溶剂，得到去细胞壁的茶叶裂 解液。
[0070]S3、纯化去细胞壁的茶叶裂解液：
[0071] 在吸出的去细胞壁的茶叶裂解液中加入400ul的试剂C，将其在涡旋震荡仪上剧 烈震荡。将装有混合物的离心管在在〇°C的条件下，lOOOOrpm进行离心5分钟。离心结束 后，离心管中的溶液自然分层，小心将上层水相用移液枪吸出转移至新的1.5ml的离心管 中，尽量避免吸入中间的蛋白层和下层有机相溶剂，得到去纯化的除细胞壁茶叶裂解液。
[0072]S4、得到茶叶的DNA和RNA
[0073] 在纯化的除细胞壁茶叶裂解液中加入2倍体积的试剂D，_20°C保温2小时，0°C下 12000rpm离心5min，弃掉上清。沉淀用lml的70%乙醇洗绦后，4°C下12000rpm离心5min， 将乙醇弃掉。将沉淀在室温条件下自然干燥，加入50ul纯水，将沉淀充分溶解，得到茶叶的 DNA和RNA样品2。
[0074]实施3
[0075] 茶叶：新鲜茶叶
[0076] 试剂：试剂A:3-[(3_胆固醇氨丙基）二甲基氨基]-1-丙磺酸、十二烷基肌氨酸 钠在试剂A中的体积百分含量浓度均为0. 2 %;Tris在试剂A中的浓度为10mM;EDTA在 试剂A中的浓度为10mM; 0 -巯基乙醇在试剂A中的体积百分含量浓度为0. 5%;试剂A的 pH值为7. 8 ;
[0077] 试剂B :水饱和酚、吡咯烷酮、乙醇的体积比为99:1:1 ;
[0078] 试剂C :氯仿和异戊醇的体积比为25:1 ;
[0079] 试剂D :无水乙醇；
[0080] 75%乙醇。
[0081]1、茶叶DNA和RNA的提取
[0082]S1、茶叶的研磨：用研钵将茶叶磨碎。
[0083]S2、去除茶叶的细胞壁，得到去细胞壁的茶叶裂解液：
[0084] 取lg茶叶粉末装入1. 5ml的离心管中，加入400ul的试剂A，用移液枪将沉淀物 重悬，使充分混合在试剂A中。然后在混合物中加入400ul的试剂B，在涡旋器上剧烈震荡 5分钟，在震荡过程中按紧离心管的盖子，防止混合物漏出。剧烈震荡结束后，将离心管放 置于70°C的震荡仪中，温育1个小时，在此期间每间隔30秒剧烈震荡5秒钟。将装有裂解 液离心管在冰上进行冰浴5分钟（0°C)，然后将离心管在4°C的条