一株高耐受苯胺降解菌及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物技术领域，尤其涉及一株高耐受苯胺降解菌种及其应用。
【背景技术】
[0002]苯胺是染料工业中最重要的中间体之一，可用于制造酸性墨水蓝G、靛蓝等多种染料；在农药工业中用于生产许多杀虫剂、杀菌剂；苯胺也是橡胶助剂的重要原料，同时也是生产香料、塑料等的中间体。苯胺类有毒污染物毒性大、难降解，对生态环境造成严重污染。因此，研究苯胺及其衍生物的生物降解对于保护环境及提高人类健康具有重要意义。
[0003]高浓度苯胺废水在工业排放废水中属于难处理种类之一。国内对高耐受性的苯胺降解微生物的研究较少，针对于此，筛选高浓度条件下的苯胺高效降解菌并了解其降解特性，可为高浓度苯胺类废水的工业化处理提供微生物菌剂资源，从而对解决高浓度苯胺类废水生物处理系统的问题奠定基础。
【发明内容】
[0004]本发明的第一目的是提供了一种高耐受苯胺降解菌，该菌可应用于苯胺类废水的生物强化处理，为降解废水生物处理系统中的高浓度苯胺类物质提供帮助。
[0005]本发明的第二目的是提供该菌株在处理苯胺污水中的应用。
[0006]为了实现本发明的技术目的，本发明的技术方案如下:
一、本发明通过筛选获得一株高耐受苯胺降解菌种，其特征在于，其属于苍白杆菌属(Ochrobactrum sp.),命名为苯胺降解菌 MC-01(ir應 sp.MC-OI),已于 2014 年
6月10日保藏，保藏单位全称为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称为CGMCC，保藏编号为 CGMCC 1.12930。
[0007]本发明菌种的形态学及生理生化特征如下:
它为革兰氏阴性好氧菌，杆状；在牛肉膏蛋白胨培养基上形成乳白色菌落，圆形、半透明，表面光滑，边缘圆滑状，易挑起。
[0008]本发明的高耐受苯胺降解菌MS-Ol接触酶反应阳性、产吲哚试验阳性、产氨试验阳性、甲基红试验反应阴性、淀粉水解阴性、乙酰甲基醇实验阴性、硝酸盐还原反应阴性、柠檬酸利用阳性、能利用葡萄糖、能氧化乙醇或醛糖；生长温度范围:30?40 °C、生长pH值范围:5.5?8.0。
[0009]本发明的高耐受苯胺降解菌MS-Ol的16SrDNA序列如SEQ ID NO:1所示。
[0010]本发明苯胺降解菌MC-Ol经16SrDNA测序及同源性比较，得到与其最相近的种属是苍白杆菌属(Ochrobactruni),同源性达98%。结合细菌形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果，确定高耐受苯胺降解菌MC-Ol为苍白杆菌属的一个新菌种。
[0011]二、本发明的苯胺降解菌MC-Ol苯胺废水处理中的应用。
[0012]本发明的应用具体包括如下步骤:
(I)斜面培养将实施例1获取的苯胺降解菌MC-Ol接种到LB斜面培养基中，在35°C下培养24 h ；
(2)种子培养
按步骤(I)所得的菌株接种量4% (v/v)接种于种子培养基中，35°C、160 rpm培养12h ；
(3)发酵降解
将步骤(2)培养后的菌液以10%的投放量到废水中进行发酵降解，发酵降解条件如下:温度35°C、搅拌速度600 rpm、接种量是10% (v/v)、通气量3 vvm、溶氧15%。
[0013]优选的，所述的斜面培养的培养基配方为牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，纯化琼脂18 g，蒸懼水1000 mL,苯胺300 mg。
[0014]优选的，所述的种子培养的培养基为牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，纯化琼脂18 g，蒸懼水 1000 mL,苯胺 500 mg。
[0015]优选的，所述步骤3)中苯胺浓度为1500mg/L以下。
[0016]本发明的有益效果在于:
本发明苯胺降解菌MC-Ol具有高浓度条件下苯胺废水的生物降解处理功能，本菌株的可耐受废水中苯胺的浓度达5000mg/L。实验测试数据表明，当废水中的苯胺浓度在1500mg/L (COD值6000 mg/L)以下时，经过36 h降解，在不添加任何化学试剂的情况下，该菌对苯胺降解率可达98.1%，经过60h，该菌对含苯胺废水的降解率基本达到99%，不造成环境二次污染，大幅度降低了废水的处理成本，具有广阔的应用前景。本发明苯胺降解菌MC-OI对于解决高浓度条件下苯胺废水生物处理系统的问题很有帮助，具有很高的应用价值。
[0017]本发明涉及的生物材料,属于苍白杆菌属(sp.),分类命名为苯胺降解菌MC_01(應sp.MC-OI),已于2014年6月10日保藏，保藏单位全称为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称为CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC 1.12930。
【具体实施方式】
[0018]下面列举实施例对本发明进一步说明，但不因此限制本发明的内容。
[0019]本实施方式中，以待测废水COD值作为参考指标，选用国标法进行测量。
[0020]实施例1:本实施例说明获得高耐受苯胺降解菌MC-Ol菌种的方法。
[0021]本实施例中苯胺降解菌MC-Ol是从南京炼油厂污水处理车间曝气池活性污泥中经过初筛，然后再进行复筛得到的。初筛是根据菌株在高浓度苯胺培养基中的生长情况，筛选出适应期短，代谢旺盛的细菌，复筛即是在初筛的基础上进一步在苯胺浓度5000 mg/L下，以菌株是否具有较高苯胺降解率为依据，筛选出降解效能较好的高耐受性菌株。
[0022]其中每升苯胺选择培养基由KH2PO4 2 g，MgSO4 I g，NaCl 2 g，纯化琼脂、18 g、蒸馏水1000 mL，加热溶解后121 °C灭菌20 min，待培养基冷却至50 °C左右时在洁净工作台中加入无菌苯胺1000 mg混勻。
[0023]其具体步骤如下:
一、初筛:
Cl)将取得的活性污泥与水样混合物约100 mL，搅拌均匀，加入10 mg的苯胺，于通风橱中静置48 h ；
(2)将烧杯中的活性污泥再次搅拌均匀，静置，待上层液体基本清澈时，取上清液5mL加入含苯胺100 mg/L的苯胺无机盐培养液中，在温度37 °C, 160 rpm条件培养48 h ；
(3)取5mL步骤②中培养48 h后的菌液接于苯胺浓度为800 mg/L的苯胺无机盐培养液中，在37 °C, 160 rpm条件下培养48 h ；
(4)取5mL步骤③中培养48 h后的菌液接于苯胺浓度为1500 mg/L的苯胺无机盐培养液中，在37 °C, 160 rpm条件下培养48 h ；
(5)取5mL步骤④中培养48 h后的菌液接于苯胺浓度为3000 mg/L的苯胺无机盐培养液中，在37 °C, 160 rpm条件下培养48 h ；
(6)取5mL步骤⑤中培养48 h后的菌液接于苯胺浓度为3000 mg/L的