微生物菌剂及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种微生物菌剂及其制备方法和应用；更确切地说，涉及一种微生物 菌剂及其制备方法，还涉及所述生物菌剂在蔬菜育苗中的应用。
【背景技术】
[0002] 随着世界农业经济的发展，农业种植结构也经历着相应的调整，由传统农业逐渐 向现代化农业转变，蔬菜的种植面积也逐年增加，而育苗则是蔬菜栽培中的一项非常重要 的技术环节，蔬菜育苗不但能使蔬菜提早上市，还能够提高蔬菜产量和改进品质。
[0003] 目前蔬菜育苗存在的问题是蔬菜育苗土传病害严重，有害菌大量繁殖，严重影响 蔬菜育苗成活率；同时现代农业设施栽培导致蔬菜连作障害越来越严重，而且土壤易板结， 透气性差，土壤墒情差，从而影响蔬菜产量、品质；因此，迫切需要开发出能够提高植株壮苗 指数的育苗相关技术。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服目前蔬菜育苗过程中存在的植株壮苗指数低的问题，提供 一种能够提高植株壮苗指数的微生物菌剂及其制备方法和应用。
[0005] 为了实现第一个发明目的，本发明提供了一种微生物菌剂，该微生物菌剂包括培 养基和菌体，其中，所述菌体包括枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱杆菌（Bacillus safensis)〇
[0006] 为了实现第二个发明目的，本发明还提供了一种微生物菌剂的制备方法，其 中，该方法包括：该方法包括：将枯草芽孢杆菌（Baci Ilus subtil is)、解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱杆菌（Bacillus safensis)接种于培养基中进 行培养。
[0007] 本发明还提供了所述的微生物菌剂在所述的微生物菌剂在蔬菜育苗中的应用。
[0008] 本发明提供的的微生物菌剂能够提高蔬菜育苗成活率，例如，实施例5-8中检 测的结果可以看出，虽然苗期出苗率各处理与对照没有明显差异；但壮苗指数A3最高为 0. 325,对照最差为0. 077,各处理与对照之间达差异极显著水平，各处理间A2、A3、A4与Al 达显著水平，A2、A3、A4之间没有差异；发病率对照最高达5%，各处理没有发病；西瓜幼苗定 植到大田后，开花期最早是A2,为8月1日，其次是A1、A2,最晚是对照，为8月10日，说明 使用微生物菌剂育苗能够提高开花结果；总产量A3最高为1441公斤，最低为对照，1092公 斤，各处理与对照达显著水平，处理间没有差异；西瓜品质来看，糖度最高为A3和A4,最低 为对照；西瓜后期发病率最高为对照，达13. 33%，最低为A3和A4,发病主要病害为枯萎病； 从以上综合可以看出，使用本发明微生物菌剂能够获得良好的植株壮苗指数，从而使最终 的产量和品质等方面都明显优于对照，在蔬菜育苗领域具有广阔的应用前景。此外，由于使 用本发明提供的微生物菌剂能够改善植株根际微生物环境，有益菌增多从而抑制有害菌的 生长，从而还能够提高植株的抗病性。
【具体实施方式】
[0009] 本发明提供了一种微生物菌剂，该微生物菌剂包括培养基和菌体，其中， 所述菌体包括枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱杆菌（Bacillus safensis)。
[0010] 所述微生物菌剂中含有的菌体的量可以在很大范围内改变，优选情况下，每克所 述微生物菌剂所含的总活菌数可以为2-10X IO7个。
[0011] 优选地，所述微生物菌剂中，以所述微生物菌剂中的总活菌数为基准，枯草芽孢杆 菌（Bacillus subtilis)的活菌数可以为总活菌数的10-50%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数可以为总活菌数的10-50%、沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的活菌数可以为总活菌数的10-50%。
[0012] 更优选地，以所述微生物菌剂中的总活菌数为基准，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的活菌数可以为总活菌数的40-50 %、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数可以为总活菌数的15-35%、沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的活菌数可以为总活菌数的15-35%。
[0013] 根据本发明，所述培养基的种类可以在很大范围内改变，可以为各种能够用于培 养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、沙福芽孢杆菌的培养基，例如，可以为 牛肉膏蛋白胨培养基、肉汤培养基、LB培养基等常用培养基作为种子培养基，用于菌种的 保存；而发酵的培养基一般用于生产，这些培养基的种类也为本领域技术人员所公知。上 述培养基能够商购得到或者根据"微生物培养基手册"（Microbiology Culture Media Manual)的记载制备得到。例如，牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g, 琼脂15-20g，蒸馏水1000ml，PH值7. 0-7. 2, 121°C灭菌20min ;发酵培养基：葡萄糖15g，淀 粉lg，豆饼粉25g，硫酸锰lg，磷酸二氢钾I. 5g，硫酸镁0. 5g，酵母膏0. 2g，氯化铁0. lg，碳 酸钙 0· lg，PH 值 7. 0-7. 2, 121°C灭菌 20min。
[0014] 本发明还提供了所述微生物菌剂的制备方法，其中，该方法包括：将枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)、解淀粉芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱杆菌 (Bacillus safensis)接种于培养基中进行培养。
[0015] 根据本发明，所述培养的方法包括：在各自独立的培养体系中分别培养枯草芽孢 杆菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱 杆菌（Bacillus safensis),并将分别培养得到的微生物按照比例混合。优选情况下，通过 在各自独立的培养体系中的培养及培养后的混合，使得到的每克微生物菌剂的总活菌数为 2-10X10 7 个。
[0016] 在一种优选实施方式中，通过在各自独立的培养体系中的培养及培养后按照比例 的混合，所述混合的条件没有特别的限制，只要能够使得到的微生物菌剂满足以下条件即 可：以使所述微生物菌剂中的总活菌数为基准，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的活菌 数为总活菌数的10-50%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数为总 活菌数的10-50%、沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的活菌数为总活菌数的10-50% ;优 选地，以所述微生物菌剂中的总活菌数为基准，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的活菌 数为总活菌数的40-50%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数为总 活菌数的15-35%、沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的活菌数为总活菌数的15-35%。
[0017] 根据本发明，所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)、沙福芽抱杆菌（Bacillus safensis)的菌种可以通过商 购得到，例如，中国农业微生物菌种保藏中心保藏的枯草芽孢杆菌（ACCC01266)、解淀粉芽 孢杆菌（ACCC1855)、北京北纳创联生物技术研究院的沙福芽孢杆菌（CCTCCAB205598)。
[0018] 根据本发明，所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的培养方法没有特别的限 制为本领域技术人员所公知，例如，可以在100重量份的培养基(葡萄糖5g，豆柏30g，蛋白 胨2g，蒸馈水1000ml，PH7. 0-7. 2)中接种2-5重量份的枯草芽孢杆菌（BaciIlus subtilis) 的菌株，37°C培养，直至枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的活菌数为2-10 XlO7个/克 的培养基。
[0019] 所述解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的培养方法没有特别的限 制，例如，可以在100重量份培养基(豆饼粉50g，蔗糖20g，硫酸铵5g，柠檬酸三钠2. 5g，磷 酸二氢钾0. 3g，硫酸镁0. 5g，硫酸亚铁0. 05g，PH7. 0-7. 2)中接种2-5重量份的解淀粉芽 孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的菌株，37°C培养，直至解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数为2-10 X IO7个/克的培养基。
[0020] 所述沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的培养方法没有特别的限制，例如，可以 在100重量份的培养基(葡萄糖15g，淀粉lg，豆饼粉25g，硫酸锰lg，磷酸二氢钾I. 5g，硫酸 镁〇. 5g，酵母膏0. 2g，氯化铁0. lg，碳酸钙0. lg，PH7. 0-7. 2)中接种2-5重量份的沙福芽 抱杆菌（Bacillus safensis)的菌株，37°C培养，直至沙福芽抱杆菌（Bacillus safensis) 的活菌数为2-10 X IO7个/克的培养基。
[0021] 本发明还提供了所述的微生物菌剂在蔬菜育苗中的应用。
[0022] 所述蔬菜可以为西瓜、甜瓜、黄瓜、番茄、辣椒、茄子等等，优选为西瓜、甜瓜、黄瓜 等蔬菜经济作物上。
[0023] 下面通过具体的实施例对本发明进行更进一步的说明。
[0024] 实施例1
[0025] (1)在100重量份的培养基(葡萄糖5g，豆柏30g，蛋白胨2g，蒸馏水1000ml， PH7. 0-7. 2)中接种5重量份的枯草芽孢杆菌（ACCCOl266)，37°C培养，在培养过程中进行取 样并通过显微镜直接计数法进行观察，直至枯草芽孢杆菌的活菌数为2 X IO7个/克的培养 基。
[0026] (2)在100重量份的培养基(豆饼粉50g，蔗糖20g，硫酸铵5g，柠檬酸三钠2. 5g，磷 酸二氢钾0. 3g，硫酸镁0. 5g，硫酸亚铁0. 05g，PH7. 0-7. 2)接种4重量份的解淀粉芽孢杆菌 (ACCC1855)，37°C培养，在培养过程中进行取样并通过显微镜直接计数法进行观察，直至解 淀粉芽孢杆菌的活菌数为2 X IO7个/克的培养基。
[0027] (3)在100重量份的培养基(葡萄糖15g，淀粉lg，豆饼粉25g，硫酸锰lg，磷酸二氢 钾I. 5g，硫酸镁0. 5g，酵母膏0. 2g，氯化铁0. lg，碳酸