钙0. lg，PH7. 0-7. 2)中接种5重量份 的沙福芽孢杆菌（CCTCCAB205598)，37°C培养，在培养过程中进行取样并通过显微镜直接计 数法进行观察，直至沙福芽孢杆菌的活菌数为2 X IO7个/克的培养基。
[0028] (4)将步骤（1)至（3)中分别得到的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)、、解淀粉 芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)、沙福芽抱杆菌（Bacillus safensis)按照比例 进行混合，使得到的微生物菌剂中，枯草芽孢杆菌（Baci I lus subti I is )的活菌数为总活菌 数的20%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数为总活菌数的40%、 沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的活菌数为总活菌数的40%，得到微生物菌剂Al。
[0029] 实施例2
[0030] (1)在100重量份的培养基(葡萄糖5g，豆柏30g，蛋白胨2g，蒸馏水1000ml， PH7. 0-7. 2)中接种4重量份的枯草芽孢杆菌（ACCCOl266)，37°C培养，在培养过程中进行取 样并通过显微镜直接计数法进行观察，直至枯草芽孢杆菌的活菌数为8 X IO7个/克的培养 基。
[0031] (2)在100重量份的培养基(豆饼粉50g，蔗糖20g，硫酸铵5g，柠檬酸三钠2. 5g，磷 酸二氢钾0. 3g，硫酸镁0. 5g，硫酸亚铁0. 05g，PH7. 0-7. 2)中接种3重量份的解淀粉芽孢杆 菌(ACCC1855)，37°C培养，在培养过程中进行取样并通过显微镜直接计数法进行观察，直至 解淀粉芽孢杆菌的活菌数为8 X IO7个/克的培养基。
[0032] (3)在100重量份的培养基(葡萄糖15g，淀粉lg，豆饼粉25g，硫酸锰lg，磷酸二氢 钾I. 5g，硫酸镁0. 5g，酵母膏0. 2g，氯化铁0. lg，碳酸钙0. lg，PH7. 0-7. 2)中接种4重量份 的沙福芽孢杆菌（CCTCCAB205598)，37°C培养，在培养过程中进行取样并通过显微镜直接计 数法进行观察，直至沙福芽孢杆菌的活菌数为8 X IO7个/克的培养基。
[0033] (4)将步骤（1)至（3)中分别得到的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)、、解淀粉 芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)、沙福芽抱杆菌（Bacillus safensis)按照比例 进行混合，使得到的微生物菌剂中，枯草芽孢杆菌（Baci I lus subti I is )的活菌数为总活菌 数的35%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数为总活菌数的35%、 沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的活菌数为总活菌数的30%，得到微生物菌剂A2。
[0034] 实施例3
[0035] (1)在100重量份的培养基(葡萄糖5g，豆柏30g，蛋白胨2g，蒸馏水1000ml， PH7. 0-7. 2)中接种3重量份的枯草芽孢杆菌（ACCCOl266)，37°C培养，在培养过程中进行取 样并通过显微镜直接计数法进行观察，直至枯草芽孢杆菌的活菌数为5 X IO7个/克的培养 基。
[0036] (2)在100重量份的培养基(豆饼粉50g，蔗糖20g，硫酸铵5g，柠檬酸三钠2. 5g，磷 酸二氢钾0. 3g，硫酸镁0. 5g，硫酸亚铁0. 05g，PH7. 0-7. 2)中接种2重量份的解淀粉芽孢杆 菌(ACCC1855)，37°C培养，在培养过程中进行取样并通过显微镜直接计数法进行观察，直至 解淀粉芽孢杆菌的活菌数为5 X IO7个/克的培养基。
[0037] (3)在100重量份的培养基(葡萄糖15g，淀粉lg，豆饼粉25g，硫酸锰lg，磷酸二氢 钾I. 5g，硫酸镁0. 5g，酵母膏0. 2g，氯化铁0. lg，碳酸钙0. lg，PH7. 0-7. 2)中接种2重量份 的沙福芽孢杆菌（CCTCCAB205598)，37°C培养，在培养过程中进行取样并通过显微镜直接计 数法进行观察，直至沙福芽孢杆菌的活菌数为5 X IO7个/克的培养基。
[0038] (4)将步骤（1)至（3)中分别得到的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)、、解淀粉 芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)、沙福芽抱杆菌（Bacillus safensis)按照比例 进行混合，使得到的微生物菌剂中，枯草芽孢杆菌（Baci I lus subti I is )的活菌数为总活菌 数的40%、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数为总活菌数的30%、 沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的活菌数为总活菌数的30%，得到微生物菌剂A3。
[0039] 实施例4
[0040] 根据与实施例3相同的方法制备微生物菌剂A4,不同在于，将步骤（1)至 (4)中分别得到的枯草芽孢杆菌（Baci Ilus subtil is)、、解淀粉芽孢杆菌（Baci Ilus amy 1 〇 I i quef ac i ens )、沙福芽孢杆菌（Bac i 11us saf ens i s )按照比例进行混合，使得到的微 生物菌剂中，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的活菌数为总活菌数的50%、解淀粉芽孢 杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数为总活菌数的25%、沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的活菌数为总活菌数的25%，得到微生物菌剂A4。
[0041] 实施例5-8
[0042] 分别使用实施例1-4中制得的微生物菌剂A1-A4进行蔬菜育苗，具体步骤如下： (1)试验材料①试验作物西瓜、黄瓜、番茄、万寿菊②试验微生物营养基制备：分别把微生物 菌剂A1-A4按照配方比例拌入营养基原料中混匀，然后填入营养基液压设备中，压制成一 体化育苗营养基。（2)试验处理。试验设5个处理(包括1个对照)，每个处理3次重复，每 个重复50株。调查项目：苗期(壮苗指数、出苗率、发病率)，定植后（开花期、产量、品质、发 病率）（3)试验方法。把制备好的微生物营养基随机区组排列，摆放到苗床内，浇水膨胀，把 催芽种子播入营养基中，盖上覆盖土。（4)结果分析。结果如下表1所示。
[0043] 对比例1
[0044] 根据与实施例5-8相同的方法进行蔬菜育苗，不同在于在育苗过程中没有使用微 生物菌剂，结果如下表1所示。
[0045] 表1西瓜各项指标统计分析
[0046]
【主权项】
1. 一种微生物菌剂，该微生物菌剂包括培养基和菌体，其特征在于，所述菌体包括枯草 芽抱杆菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)和沙福 芽抱杆菌（Bacillus safensis)〇
2. 根据权利要求1所述的微生物菌剂，其中，每克所述微生物菌剂所含的总活菌数为 2-10X107 个。
3. 根据权利要求2所述的微生物菌剂，其中，以所述微生物菌剂中的总活菌数为基 准，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的活菌数为总活菌数的10-50%、解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数为总活菌数的10-50%、沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的活菌数为总活菌数的10-50%。
4. 根据权利要求3所述的微生物菌剂，其中，以所述微生物菌剂中的总活菌数为基 准，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的活菌数为总活菌数的40-50%、解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数为总活菌数的15-35%、沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的活菌数为总活菌数的15-35%。
5. 权利要求1所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，该方法包括：将枯草芽孢杆 菌（Bacillus subtilis)、解淀粉芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱杆 菌（Bacillus safensis)接种于培养基中进行培养。
6. 根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述接种于培养基中进行培养的方法包括： 在各自独立的培养体系中分别培养枯草芽孢杆菌（BaciIlus subtiIis)、解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)和沙福芽抱杆菌（Bacillus safensis)，并将分别培养得 到的微生物按照比例混合。
7. 根据权利要求6所述的制备方法，其中，通过在各自独立的培养体系中的培养及 培养后的混合，使得到的每克微生物菌剂的总活菌数为2-10X IO7个，其中，枯草芽孢杆 菌（Bacillus subtilis)的活菌数为总活菌数的10-50 %、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数为总活菌数的10-50%、沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis) 的活菌数为总活菌数的10-50%。
8. 根据权利要求7所述的制备方法，其中，以所述微生物菌剂中的总活菌数为基准， 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的活菌数为总活菌数的40-50%、解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)的活菌数为总活菌数的15-35%、沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis)的活菌数为总活菌数的15-35%。
9. 权利要求1-4中的任意一项所述的微生物菌剂在蔬菜育苗中的应用。
【专利摘要】本发明提供了一种微生物菌剂，该微生物菌剂包括培养基和菌体，其中，所述菌体包括枯草芽孢杆菌（Bacillus？subtilis）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus？amyloliquefaciens）和沙福芽孢杆菌（Bacillus？safensis）。本发明提供的微生物菌剂能够获得良好的植株壮苗指数，从而能够提高蔬菜的产量和品质，在蔬菜育苗领域具有广阔的应用前景。此外，由于使用本发明提供的微生物菌剂能够改善植株根际微生物环境，有益菌增多从而抑制有害菌的生长，从而还能够提高植株的抗病性。
【IPC分类】A01P3-00, A01N63-00, C12N1-20, C12R1-125, C12R1-07
【公开号】CN104560769
【申请号】CN201310516573
【发明人】高红春, 朱昌雄, 顾金刚, 周艳丽
【申请人】北京中农赛世农业科技有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月28日