利用微流体芯片高通量检测转基因玉米的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及含转基因成分玉米的高通量筛查方法。
【背景技术】
[0002] 玉米是世界上重要的粮食作物之一，其单位面积产量位居榜首。世界范围内玉米 害虫高达350多种，其中以鳞翅目的玉米螟分布最广、危害最重，是世界性的重要玉米害 虫，其严重影响着玉米的产量和品质。近十多年来，转基因植物培育取得突破，推出了一批 新品种，在改善农作物生产中发挥了明显的作用，也显露出巨大的潜力。然而，人们对转基 因玉米的安全性存在着很多的争论。面对生物基因工程技术对我国经济利益带来的冲击和 国外转基因产品对生态环境和消费者可能带来的风险，对转基因玉米进行检测具有重要的 现实意义。2009年，我国已经解除了对玉米进口的限制，大批量的玉米已经涌入中国。这势 必对我国的农业安全带来冲击。
[0003] 目前，转基因玉米成分检测方法主要为TaqMan实时荧光PCR方法和普通PCR方 法。普通PCR方法由于操作繁琐，污染环境、灵敏度低等不足已逐渐被实时荧光PCR检测方 法所取代。但是单通道TaqMan实时荧光PCR法检测成本较高，步骤繁琐，不适合于转基因 产品的多品系筛查检测，尤其对于业务量大的检测部门。因此，继续开发新的技术来解决这 一问题。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种简单快捷、灵敏准确同时又省时省力的针对多种转基 因玉米进行高通量筛查的方法。
[0005] 本发明首先提供一种利用微流体芯片高通量检测转基因玉米的方法，所述方法使 用单列流体通道包含反应孔腔数目不少于20、通道不少于3列的微流体芯片进行检测，每 一列流体通道的反应孔腔中分别预先包埋下述特异性引物探针组合物：
[0006] (1)针对转基因玉米TC 1507的特异性引物探针组：
[0007] 探针[SEQ ID No. 1] :FAM-TAACTCAAGGCCCTCACTCCG-MGB
[0008] 上游引物[SEQ ID No. 2] :AGTAGTCTTCGGCCAGAATGG
[0009] 下游引物[SEQ ID No. 3] :TCAAATATCTTTGCCAAGATCAAGCG
[0010] (2)针对转基因玉米NK 603的特异性引物探针组：
[0011] 探针[SEQ ID No. 4] :FAM-ACGCGACACACTTCCACTC-MGB
[0012] 上游引物[SEQ ID No. 5] :ATGAATGACCTCGAGTAAGCTTGTTAA
[0013] 下游引物[SEQ ID No. 6] :AAGAGATAACAGGATCCACTCAAACACT
[0014] (3)针对转基因玉米MON 87640的特异性引物探针组：
[0015] 探针[SEQ ID No. 7] :FAM-ATTTTCAAAGCGTTAGACGGC-MGB
[0016] 上游引物[SEQ ID No. 8] :CTCTCACGTTGAAGGAAAATGGATTG
[0017] 下游引物[SEQ ID No. 9] :TCGCGATCCTCCTCAAAGAC
[0018] (4)针对转基因玉米MON 863的特异性引物探针组：
[0019] 探针[SEQ ID No. 10] :FAM-CATCCGAACAAGTAGGGTCA-MGB
[0020] 上游引物[SEQ ID No. 11] :AGTAGGATCGGAAAGCTTGGTACA
[0021] 下游引物[SEQ ID No. 12] :TGTTACGGCCTAAATGCTGAACT
[0022] (5)针对转基因玉米MON 810的特异性引物探针组：
[0023] 探针[SEQ ID N。· 13] :FAM-ATCCTTTGCCATTGCCCAGC-MGB
[0024] 上游引物[SEQ ID No. 14] :TCGAAGGACGAAGGACTCTAAC
[0025] 下游引物[SEQ ID No. 15] :GCCACCTTCCTTTTCCACTATCTT
[0026] (6)针对转基因玉米MIR 162的特异性引物探针组：
[0027] 探针[SEQ ID No. 16] :FAM-CCGGGTCTAGACAATTCAGTACA-MGB
[0028] 上游引物[SEQ ID No. 17] :GCGCGGTGTCATCTATGTTACTAG
[0029] 下游引物[SEQ ID No. 18] :TGCCTTATCTGTTGCCTTCAGA
[0030] (7)针对转基因玉米MIR 604的特异性引物探针组：
[0031] 探针[SEQ ID No. 19] :FAM-AAACGACAATCTGATCATGAGC-MGB
[0032] 上游引物[SEQ ID No. 21] :GCGCACGCAATTCAACAG
[0033] 下游引物[SEQ ID No. 21] :GGTCATAACGTGACTCCCTTAATTCT
[0034] (8)针对转基因玉米LY 038的特异性引物探针组：
[0035] 探针[SEQ ID No. 22] :FAM-ATCCGAGCGGAGTTTAT-MGB
[0036] 上游引物[SEQ ID No. 23] :TGGGTTCAGTCTGCGAATGTT
[0037] 下游引物[SEQ ID No. 24] :GCTGCAGGAATTCGATATCAAGCT
[0038] (9)针对转基因玉米GA21的特异性引物探针组：
[0039] 探针[SEQ ID No. 25] :FAM-ATCTCTTTCTCAACAGCAGGTGG-MGB
[0040] 上游引物[SEQ ID No. 26] :GCTTATCGTTATGCTATTTGCAACTTTAGA
[0041] 下游引物[SEQ ID No. 27] :TGGCTCGCGATCCTCCT
[0042] (10)针对转基因玉米DAS 40278-9的特异性引物探针组：
[0043] 探针[SEQ ID No. 28] :FAM-TAGCTAACCTTCATTGTATTCCG-MGB
[0044] 上游引物[SEQ ID No. 29] :CAGCACGAACCATTGAGTTACAATCA
[0045] 下游引物[SEQ ID No. 30] :TGGTTCATTGTATTCTGGCTTTGC
[0046] (11)针对转基因玉米Btl76的特异性引物探针组：
[0047] 探针[SEQ ID No. 31] :FAM-CCAGATCGGCCGACACC-MGB
[0048] 上游引物[SEQ ID No. 32] :GCCGTGAACGAGCTGTT
[0049] 下游引物[SEQ ID No. 33] :GGGAAGAAGCCTACATGTTTTCTAA
[0050] (12)针对转基因玉米Btll的特异性引物探针组：
[0051] 探针[SEQ ID N。· 34] :FAM-TGACCAAAATCCCTTAACGTGAGT-MGB
[0052] 上游引物[SEQ ID No. 35] :TGTGTGGCCATTTATCATCGACT
[0053] 下游引物[SEQ ID No. 36] :CGCTCAGTGGAACGAAAACTC
[0054] (13)针对转基因玉米98140的特异性引物探针组：
[0055] 探针[SEQ ID No. 37] :FAM-CTCTATCGATCCCCCTCTTTGATA-MGB
[0056] 上游引物[SEQ ID No. 38] :GTGTGTATGTCTCTTTGCTTGGTCTT
[0057] 下游引物[SEQ ID No. 39] :GATTGTCGTTTCCCGCCTTC
[0058] (14)针对转基因玉米59122的特异性引物探针组：
[0059] 探针[SEQ ID No. 40] :FAM-ACTGAAGGCGGGAAAC-MGB
[0060] 上游引物[SEQ ID No. 41] :GGATAAGCAAGTAAAAGCGCTCA
[0061] 下游引物[SEQ ID No. 42] :CCTTAATTCTCCGCTCATGATCAGA
[0062] (15)针对转基因玉米3272的特异性引物探针组：
[0063] 探针[SEQ ID No. 43] :FAM-CTGCTGACTGCTGACGC-MGB
[0064] 上游引物[SEQ ID No. 44] :TCATCAGACCAGATTCTCTTTTATGGC
[0065] 下游引物[SEQ ID No. 45] :CGTTTCCCGCCTTCAGTTTAA
[0066] (16)针对转基因玉米MON 88017的特异性引物探针组：
[0067] 探针[SEQ ID N。· 46] :FAM-TCCCGCCTTCAGTTTAAACAGAGTCGGGT-TAMRA
[0068] 上游引物[SEQ ID No. 47] :GAGCAGGACCTGCAGAAGCT
[0069] 下游引物[SEQ ID No. 48] :TCCGGAGTTGACCATCCA
[0070] (17)针对转基因玉米T25的特异性引物探针组：
[0071] 探针[SEQ ID No. 49] :FAM-TCATTGAGTCGTTCCGCCATTGTCG-TAMRA
[0072] 上游引物[SEQ ID No. 50] :ACAAGCGTGTCGTGCTCCAC
[0073] 下游引物[SEQ ID No. 51] :GACATGATACTCCTTCCACCG
[0074] (18)针对转基因玉米MON 89034的特异性引物探针组：
[0075] 探针[SEQ ID No. 52] :FAM-CATCCCCGGAAATTATGTT-MGB
[0076] 上游引物[SEQ ID No. 53] :CGTTCTCCATATTGACCATCATACTCATT
[0077] 下游引物[SEQ ID No. 54] :GCCGGTATCTATAATACCGTGGTTTTTA
[0078] (19)玉米内源基因 hmg :
[0079] 探针[SEQ ID No. 55] :FAM-CAATCCACACAAACGCACGCGTA-MGB
[0080] 上游引物[SEQ ID No. 56] :TTGGACTAGAAATCTCGTGCTGA
[0081] 下游引物[SEQ ID No. 67] :GCTACATAGGGAGCCTTGTCCT
[0082] (20)玉米内源基因 Adhl :
[0083] 探针[SEQ ID No. 58] :VIC-AATCAGGGCTCATTTTCTCGCTCCTCA-TAMRA
[0084] 上游引物[SEQ ID No. Μ] :CGTCGTTTCCCATCTCTTCCTCC
[0085] 下游引物[SEQ ID No. 60] :CCACTCCGAGACCCTCAGTC
[0086] 作为优选的方式，本发明的检测方法中，所述的微流体芯片是包埋了特异性引物 探针组合物的384孔TaqMan微流体芯片。TaqMan微流体芯片是一种384孔板