一种提高鸭黄病毒体外感染效率的细胞亲和剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物病毒技术领域，具体涉及一种提高鸭黄病毒体外感染效率的细 胞亲和剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 鸭黄病毒（鸭坦布苏病毒）是一种可以导致蛋鸭产蛋机能严重下降的病毒，其临 床表现为产蛋率突然下降，产蛋高峰期缩短，严重的在短时间内内产蛋率可降为零，采食量 也会同时下降，个别有死亡现象。病理剖解可见卵巢充血、肿胀、坏死和萎缩等严重病变。该 病自从2010年首次在国内被发现后，已经造成山东、湖南、广东等蛋鸭养殖大省蛋鸭大面 积减产。目前，许多研宄机构在临床分离到了鸭黄病毒，并在体外进行了细胞感染试验，试 图通过体外培养来使该病毒增殖以期用于鸭黄病毒疫苗的研制。多篇文献报道指出，临床 分离到的鸭黄病毒可对多种细胞进行体外感染，如VERO细胞、BHK细胞等，但原代病毒培养 过程较为缓慢，细胞感染效率低，在相当长的代次内仍然看不到有明显的细胞病变产生，病 毒滴度不够高，对于疫苗的研发是一个需要解决的问题。
【发明内容】
[0003] 为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种提高鸭黄病毒体外感染效 率的细胞亲和剂及其制备方法，该细胞亲和剂能够改善鸭黄病毒与细胞之间的微环境，增 加鸭黄病毒与细胞之间的亲和度，有效提高鸭黄病毒对细胞的感染率。
[0004] 为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
[0005] 一种提高鸭黄病毒体外感染效率的细胞亲和剂，其由以下按质量百分数计的各组 分制备而成：
[0006] 有机酸0.5?5%; 磷酸 0?1%; 无机盐 0?3.5%; 去离子水余量；
[0007] 其中，有机酸为丙二酸、苹果酸、山梨酸、柠檬酸中的一种或两种以上。
[0008] 作为本发明的优选方案，所述的细胞亲和剂由以下按质量百分数计的各组分制备 而成：
[0009] 有机酸 1?4%; 磷酸 0.2?0.8%; 无机盐 0?3%; 去离子水余量；
[0010] 其中，有机酸为丙二酸、苹果酸、山梨酸、柠檬酸中的一种或两种以上。
[0011] 作为本发明的进一步优选方案，所述的细胞亲和剂由以下按质量百分数计的各组 分制备而成：
[0012] 丙二酸〇?1%; 嶙酸 0?1%; 山梨酸0?0.5%; 苹果酸 0.01?1%; 无机盐0?3.5%; 去离子水余量。
[0013] 作为本发明的进一步优选方案，所述的细胞亲和剂由以下按质量百分数计的各组 分制备而成：
[0014] 丙二酸 0.03 ?0.08%; 磷酸 0.06 ?0.08%; 山梨酸0.1?0.3%; 苹果酸 0.03?0.08%; 无机盐0.05?3%; 去离子水余量。
[0015] 作为本发明的进一步优选方案，所述的细胞亲和剂由以下按质量百分数计的各组 分制备而成：
[0016] 丙二酸 0.05%; 磷酸 0.08%; 山梨酸0.3%; 苹果酸 0.05%; 无机盐0.2%; 去离子水99.32%。
[0017] 具体地，所述无机盐为硫酸钠、磷酸氢二钠、氯化钾、氯化钠中的一种或两种以上。
[0018] 具体地，所述的硫酸钠占亲和剂总量的0. 15?0. 3% ;所述的磷酸二氢钠占亲和 剂总量的0. 1-1. 6%;所述的氯化钠占亲和剂总量的0. 09-0. 9%;所述的氯化钾占亲和剂总 量的 0. 01-1%。
[0019] 本发明还提供了上述的细胞亲和剂的制备方法，所述的亲和剂是按以下步骤制备 而成的：按配方量称取丙二酸、磷酸、山梨酸、苹果酸、无机盐，将上述组分溶于配方量的去 离子水中，过滤即得。
[0020] 相比现有技术，本发明的有益效果在于：
[0021] 本发明所述的细胞亲和剂主要是由有机酸、磷酸、无机盐及去离子水复配制成，通 过改变培养液中的离子强度，干扰细胞壁疏水和亲水基团的电荷排斥作用，使病毒能够更 容易进入细胞。该细胞亲和剂能够改变鸭黄病毒与细胞间的微环境、增加鸭黄病毒与细胞 间亲和度，使鸭黄病毒更加快速地感染生产用细胞，提高了鸭黄病毒对细胞的体外感染效 率，从而可以更加快速地获得高病毒滴度的鸭黄病毒，为鸭黄病毒的疫苗研发奠定基础。
[0022] 下面结合【具体实施方式】对本发明作进一步详细说明。
【具体实施方式】
[0023] 一种提高鸭黄病毒体外感染效率的细胞亲和剂，其由以下按质量百分数计的各组 分制备而成：
[0024] 有机酸0.5-5%; 磷酸 O?1%; 无机盐 0?3.5%; 去离子水余量；
[0025] 其中，有机酸为丙二酸、苹果酸、山梨酸、柠檬酸中的一种或两种以上。
[0026] 作为本发明的优选方案，所述的细胞亲和剂由以下按质量百分数计的各组分制备 而成：
[0027] 有机酸 1?4%; 磷酸 0.2?0.8%; 无机盐 0-3%; 去离子水余量；
[0028] 其中，有机酸为丙二酸、苹果酸、山梨酸、柠檬酸中的一种或两种以上。
[0029] 作为本发明的进一步优选方案，所述的细胞亲和剂由以下按质量百分数计的各组 分制备而成：
[0030] 丙二酸〇?1%; 嶙酸 0?1%; 山梨酸0?0.5%; 苹果酸 0.0丨?1%; 无机盐0?3.5%; 去离子水余量。
[0031] 作为本发明的进一步优选方案，所述的细胞亲和剂由以下按质量百分数计的各组 分制备而成：
[0032] 丙二酸 0.03 ?0.08%; 磷酸 0.06 ?0.08%; 山梨酸0.1?0.3%; 苹果酸 0.03?0?8%; 无机盐0.05-3%; 去离子水余量。
[0033] 作为本发明的进一步优选方案，所述的细胞亲和剂由以下按质量百分数计的各组 分制备而成：
[0034] 丙二酸 0.05%; 磷酸 0.08%; 山梨酸0.3%; 苹果酸 0.05%; 无机盐 0.2%; 去离子水99.32%。
[0035] 具体地，所述无机盐为硫酸钠、磷酸氢二钠、氯化钾、氯化钠中的一种或两种以上。
[0036] 具体地，所述的硫酸钠占亲和剂总量的0. 15?0. 3% ;所述的磷酸二氢钠占亲和 剂总量的0. 1-1. 6%;所述的氯化钠占亲和剂总量的0. 09-0. 9%;所述的氯化钾占亲和剂总 量的 0. 01-1%。
[0037] -种如上述的细胞亲和剂的制备方法，所述的亲和剂是按以下步骤制备而成的： 按配方量称取丙二酸、磷酸、山梨酸、苹果酸、无机盐，将上述组分溶于配方量的去离子水 中，过滤即得。
[0038] 实施例1 :
[0039] 一种提高鸭黄病毒体外感染效率的细胞亲和剂，其由以下按质量百分数计的各组 分制备而成：
[0040] 丙二酸0.5%; 磷酸 0.5%; 山梨酸0.5%