控制肝素钠分子量的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及控制肝素钠分子量大小的方法。
【背景技术】
[0002]肝素钠是从猪小肠粘膜中提取的一种生化药品，是手术中不可替代的、挽救生命的、市场不能断档的首选药物。自二十世纪四十年代用于临床以来，其应用范围不断扩大，尤其是二十世纪九十年代以来，该产品临床主要用于防止血栓形成，治疗心血管病、血液病、尿毒症等。西方国家已开始研究肝素钠对癌症的防治作用，其新用途不断增加。
[0003]进入二十世纪七十年代以来，我国肝素钠生产工艺不断改进，成为世界肝素钠产量最大的国家。国际市场的肝素钠产品有70%以上来自中国。肝素钠精品生产已由高锰酸钾氧化法发展到双氧水氧化法，结合醇洗分离法，将大量的杂质用乙醇带走。现在肝素钠的工艺已经成熟，产品已经稳定，我们要追求更高的品质。肝素钠的分子量是以前没有的一项指标，但研究表明肝素钠的分子量大小能够影响肝素钠的治疗效果，减少不良反应的发生，故我公司研究出通过反复氧化沉淀的方法控制肝素钠的分子量大小。
【发明内容】
[0004]本发明提供了一种控制肝素钠分子量的方法，是为了减少肝素钠的不良反应发生率，增加疗效。通过反复氧化沉淀的方法控制肝素钠的分子量大小。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现:
一种控制肝素钠分子量的方法，其特征在于:通过反复氧化沉淀的方法控制肝素钠的分子量大小。
[0006]在发明的技术方案中，还具有以下技术特征:所述反复氧化沉淀法包括如下步骤:
一、提取
1、粗品溶解:
开启水阀，加入一定量饮用水，再将肝素钠粗品加入到反应罐中，边搅边加，按原料与饮用水1: (6-7)比例溶解，搅拌5-10小时后，用搅拌棒试底部是否全部溶解；
2、酶解:
将上一步溶解液，先用盐酸溶液调PH7.0-8.0，升温至50-55°C之间时加入胃蛋白酶5-10g/亿单位，再加入10-20g/亿单位胰酶，50-55°C保温2_4小时；
3、急升温:
将上一步酶解液在30?40分钟内升温至85-90°C，静止10-30分钟，开搅拌，通入循环水降温，待温度降至50-55°C时，用2-6mol/L氢氧化钠溶液调PH10.0-12.0，静止分层20-30小时；
4、底部沉淀的杂质离心:
虹吸上清，用40-100目滤袋过滤，过滤后的溶液分为上清液和下层沉淀，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；
二、精制
1、第一次沉淀:
待上述上清液和离心液温度降至20-30°C，加入20-30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸将滤液调PH10.0-12.0，边搅边加浓度为95?97%的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20°C时达到45?50%，沉淀10-12小时；
2、第一次氧化:弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积3-5%双氧水,氧化10-12小时；
3、第二次沉淀:溶液加入20-30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液调将溶液PH6.0-7.0，边搅边加浓度为95?97%的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20°C时达到45?50%，沉淀10-12小时；
4、第二次氧化:弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积3-5%双氧水,氧化10-12小时；
5、第三次沉淀:溶液加入20-30g/L氯化钠，用盐酸溶液将溶液调PH10.0-12.0，边搅边加浓度为95?97%的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20°C时达到45?50%，沉淀10-12小时；
6、第三次氧化:弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积3-5%双氧水,氧化10-12小时；
7、第四次沉淀:上一步溶液若有沉淀物析出，则用离心机离心，没有析出则直接加入20-30g/L氯化钠，用盐酸溶液将溶液调PH6.0-7.0，将溶液放冷库中冷冻至-10°C - _5°C，边搅边加-10°C - _5°C的丙酮，使得丙酮占溶液的质量百分含量为40-45%，-50C - (TC保温24-30小时，然后将废丙酮弃去，多硫酸软骨素被丙酮带走，留底部沉淀物用纯化水溶解，溶液再加入20-30g/L氯化钠，用盐酸溶液调将溶液PH6.0-7.0，边搅边加乙醇，使乙醇浓度在20°C时为45-50%，沉淀10-12小时；
8、将沉淀物用纯化水按2-5L/亿单位溶解后，用孔径0.22-0.3微米滤膜板框机微滤，用乙醇沉淀，使乙醇浓度达75-80%，再加入23-26%的氯化钠溶液，每I升溶液加6_10ml氯化钠溶液，静止沉淀10-12小时；
9、将上层乙醇弃去，加入无水乙醇脱水，边搅边加，使乙醇浓度为97-99%，静止24-30小时，弃去上层乙醇，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空泵通过管道和过滤瓶把剩余乙醇抽干，待干燥；
10、将抽干的产品均匀放置在不锈钢盘中，放在真空干燥箱中抽真空，用循环水加温，温度35-60。。，烘干70-80小时；
11、包装:将产品取出，称重，使每包装袋5kg，用封口机封口，放在铝桶中待验。
[0007]在发明的技术方案中，还具有以下技术特征:第四次沉淀后的溶液进行QA取样化验，测吸光度:260nm < 0.1 ；400nm < 0.02 ;若不合格，继续重复上面过程，若合格移交下一工序。
[0008]与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是:
本发明的肝素钠精品生产采用双氧水氧化法，结合醇洗分离法，将大量的杂质用乙醇带走，再用丙酮萃取法将肝素钠中的多硫酸软骨素去除，其精品收率达到90%以上，活性效价在180usp/mg以上,折合WHO国际标准在200 iu/mg,其质量标准符合中国药典、美国药典、英国药典及西欧药典所规定的各项指标。
【具体实施方式】
[0009]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
[0010]实施例1
一、提取
1、粗品溶解:
开启水阀，加入900L饮用水，再将150亿单位肝素钠粗品加入到反应罐中，边搅边加，搅拌6小时后，用搅拌棒试底部是否全部溶解；
2、酶解:
将上一步溶解液，先用盐酸溶液调PH7.5，升温至53°C时加入胃蛋白酶1500g，再加入300g胰酶，53°C保温3小时；
3、急升温:
将上一步酶解液在35分钟内升温至88°C，静止15分钟，开搅拌，通入循环水降温，待温度降至50°C时，用6mol/L氢氧化钠溶液调PH11.0，静止分层24小时；
4、底部沉淀的杂质离心:
虹吸上清，用80目滤袋过滤，过滤后的溶液分为上清液和下层沉淀，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；
二、精制
1、第一次沉淀:
待上述上清液和离心液温度降至25°C，加入22.5kg氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸将滤液调PH10.5，边搅边加浓度为95?97%的乙醇溶液920L，沉淀10小时；