一种与大豆百粒重遗传特征相关的标记位点Satt318及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种与大豆百粒重遗传特征相关的标记位点Satt318及其应用，属于 大豆遗传技术领域。
【背景技术】
[0002] 我国主要粮食作物中，只有大豆的单产低于世界平均水平，约为世界大豆平均单 产的80%左右。我国大豆的单产每亩115kg左右，美国、巴西单产可达180kg。对于大豆产 量的品种培育主要依靠育种者的专业经验，后期筛选工作周期长。尤其对大豆百粒重的分 子标记研究还停留在比较初级的水平，不能应用于育种实践。所以提高大豆的单产对我国 大豆生产具有重要意义。
[0003] 控制大豆合适的百粒重是实现大豆高产的有效办法。但是，目前对可以用于大豆 育种过程中父母本筛选的标记位点的报道较少，对于实现在育种前期对亲本或者杂交后代 的百粒重遗传背景进行选择的手段和方法还比较有限。
【发明内容】
[0004] 为解决上述问题，本发明提供了一种辅助鉴定大豆百粒重遗传特性的专用引物 对，所采取的的技术方案如下：
[0005] 本发明的一个目的在于提供一种与大豆百粒重遗传特征相关的标记位点，所述标 记位点位于大豆B2连锁群上，紧密连锁标记为SSR引物Satt318。
[0006] 所述标记位点的对应专用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2所示。
[0007] 所述标记位点应用于大豆的遗传育种，具体用于辅助鉴定和筛选大豆的百粒重遗 传特征。
[0008] 本发明的另一个目的在于提供一种利用所述标记位点鉴定大豆百粒重遗传特征 的方法，
[0009] 步骤如下：
[0010] 1)提取新鲜待测大豆样品中的基因组DNA ;
[0011] 2)以步骤1)所得的待测大豆样品基因组DNA为模板，利用Satt318专用引物进行 PCR扩增，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID N0. 2所示；
[0012] 3)通过SSR电泳检测步骤2)所获得的扩增产物，银染显影后扩增产物中含有 750bp DNA片段的待测大豆为候选具有减小百粒重遗传性状的大豆。
[0013] 所述方法用于鉴定大豆的百粒重遗传特征。
[0014] 本发明的另一目的在于提供一种利用所述标记位点筛选大豆百粒重遗传特征的 方法，该方法的步骤如下：
[0015] 1)提取新鲜待测大豆样品中的基因组DNA ;
[0016] 2)以步骤1)所得的待测大豆样品基因组DNA为模板，利用Satt318专用引物进行 PCR扩增，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2所示；
[0017] 3)通过SSR电泳检测步骤2)所获得的扩增产物，银染显影后扩增产物中含有 750bp DNA片段的待测大豆为候选具有减小百粒重遗传性状的大豆。
[0018] 所述方法用于筛选大豆的百粒重遗传特征。
[0019]所述PCR扩增，共35个循环，循环开始前先于95 °C下处理5min，然后进入循环，所 述循环的温度和延伸时间程序是：先94°C 30s，然后60°C 30s，最后72°C lmin，循环结束后 再于72°C下处理lOmin。
[0020] 具体而言，本发明提供的SSR标记在鉴定大豆百粒重方面的应用，是根据大豆SSR 位点设计的引物，利用引物的产物带型特征对大豆品种进行分子鉴定。
[0021] 本发明所述大豆百粒重遗传特征是在251份大豆种质资源和以北豆5号为母本 (父本包括多马卡?托利萨、坡黄、Harosoy、绿75、中特1号、NOVA、Century、烟黄3号、东 农163、杜纳吉卡、Amsoy、中豆27、95_5383、艾卡166、大明白豆子、瑞丰2号、Biogedulote、 中黄4号、天鹅蛋ZDD02114和东山69)的遗传群体中，均得到了证实。
[0022] 本发明有益效果如下：
[0023] 由于在大豆中与百粒重相关的基因还没克隆出来，利用标记位点对大豆育种进行 分子辅助选择是一个比较经济的方法，尤其是对百粒重进行直接选择。本发明的方法克服 了常规育种中因表型选择易受环境因素干扰而导致育种效率低等问题，可以利用Satt318 标记的专用引物对对大豆百粒重遗传特性进行早期世代选择而缩短育种周期，从而较快的 筛选出籽粒合适的大豆材料。本发明可用于大豆的育种，以提高育种的效率和大豆的产量 和质量。
【附图说明】
[0024] 图1为大豆百粒重QTL -致性图谱。
[0025] 图2为Satt318在B2连锁群上的位置。
[0026] 图3为卡方分析与T-测验的资源等位基因的分层分析。
[0027] 图4为等位基因的在资源中效应分析。
[0028] 图5为关键等位基因资源和群体中的变化率；
[0029](图中ZY值为资源中的变化率，QT值为群体中的变化率，A表示的验证群体母本 和父本中含有的某标记的等位基因，B表不验证关键等位基因在群体和未本中的有无）。
[0030] 图6为标记Satt318在251份资源和遗传群体中的PCR谱带特征。
【具体实施方式】
[0031] 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受实施例的限制。
[0032] 在以下的实施方案中，除非特别说明，否则所有操作均按照《分子克隆实验指南》 (第三版）（黄培堂等译，北京：科学出版社，2002)所提供的方法进行。
[0033] 实施例1
[0034] 一、种质资源的选择
[0035] 选取大豆种质资源251份，针对大豆百粒重的QTL定位和百粒重QTL的元分析结 果，明确30个与百粒重相关的SSR标记位点，验证30个标记位点在资源中的PCR产物带型 特征，检测不同带型与百粒重之间的相关性。进一步通过遗传群体验证标记带型与百粒重 之间的关系。通过统计学和实验证明Satl45的PCR产物为750bp时，则大豆种质含有减少 百粒重的遗传背景。所选取的251份大豆种质资源如下表所示 ：
[0036] 表1 251份大見种质资源名称
[0037]
【主权项】
1. 一种与大豆百粒重遗传特征相关的标记位点，其特征在于，所述标记位点位于大豆 B2连锁群上，紧密连锁标记为SSR引物Satt318。
2. 权利要求1所述标记位点，其特征在于，对应专用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1 和 SEQ ID NO. 2 所示。
3. 权利要求1和2所述标记位点，应用于大豆的遗传育种。
4. 权利要求3所述应用，其特征在于，具体用于辅助鉴定和筛选大豆的百粒重遗传特 征。
5. -种利用权利要求1所述标记位点鉴定大豆百粒重遗传特征的方法，其特征在于， 步骤如下： 1) 提取新鲜待测大豆样品中的基因组DNA; 2) 以步骤1)所得的待测大豆样品基因组DNA为模板，利用Satt318专用引物进行PCR 扩增，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2所示； 3) 通过SSR电泳检测步骤2)所获得的扩增产物，银染显影后扩增产物中含有750bp DNA片段的待测大豆为候选具有减小百粒重遗传性状的大豆。
6. 权利要求5所述方法，用于鉴定大豆的百粒重遗传特征。
7. -种利用权利要求1所述标记位点筛选大豆百粒重遗传特征的方法，其特征在于， 步骤如下： 1) 提取新鲜待测大豆样品中的基因组DNA; 2) 以步骤1)所得的待测大豆样品基因组DNA为模板，利用Satt318专用引物进行PCR 扩增，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2所示； 3) 通过SSR电泳检测步骤2)所获得的扩增产物，银染显影后扩增产物中含有750bp DNA片段的待测大豆为候选具有减小百粒重遗传性状的大豆。
8. 权利要求7所述方法，用于筛选大豆的百粒重遗传特征。
9. 权利要求5和7所述方法，其特征在于，所述PCR扩增，共35个循环，循环开始前先 于95°C下处理5min，然后进入循环，所述循环的温度和延伸时间程序是：先94°C 30s，然后 60°C 30s，最后72°C lmin，循环结束后再于72°C下处理lOmin。
【专利摘要】本发明公开了一种与大豆百粒重遗传特征相关的标记位点Satt318及其应用，属于大豆遗传技术领域。本发明所提供的专用引物是在大豆B2连锁群上，紧密连锁标记为SSR引物Satt318，引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。该引物的标记位点为Satt318与大豆百粒重性状具有极显著地的相关性。该标记PCR产物的Satt318-2(750bp)的片段是影响百粒重的主效位点。利用紧密连锁的分子标记检测育种群体家系及大豆种质资源，并进行数理统计分析证实该片段是主效位点，可预测其对百粒重性状的影响，大大提高了大豆高产育种的选择效率。
【IPC分类】C12N15-11, C12Q1-68
【公开号】CN104673788
【申请号】CN201410353557
【发明人】陈庆山, 刘春燕, 辛大伟, 朱荣胜, 胡振帮, 蒋洪蔚, 齐照明, 孙亚男, 韩雪
【申请人】东北农业大学
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2014年7月24日