赤藓糖醇制造方法、丛梗孢酵母变异菌株及其用图_2

文档序号:8425897阅读:来源:国知局
039] 使上述筛选的丛梗孢酵母菌株发生紫外线突变,分离作为本发明的菌株的丛梗孢 酵母SYC-ERY1菌株,确认赤藓糖醇产量。其结果确认到,与突变前的母菌株相比,赤藓糖醇 的产量及转变率极好地增加(实验例1)。
[0040] 此外,对本发明的菌株设定不同的酵母提取物添加量及温度条件,了解赤藓糖醇 产量及转变率。其结果确认到,虽然在多种酵母提取物添加量范围及温度范围观察到赤藓 糖醇生产及转变,但特别是在添加0.5% (w/v)的酵母提取物的情况以及温度35°C的情况 下,赤藓糖醇产量及转变率优异(实验例2至4)。
[0041] 在本发明的另一实施例中,使用葡萄糖母液和玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物 进行是否能够生产赤藓糖醇的实验。其结果可以确认到,虽然在玉米浸渍液或玉米浸渍液 的加工物的多种使用量范围观察到赤藓糖醇生产及转变,但特别是在添加相对于培养基总 量为l(w/v) %的玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物的情况下,赤藓糖醇产量及转变率优异 (实验例5)。
[0042] 在另一实施例中,在5L发酵槽中进行确认赤藓糖醇的生产情况的实验。其结果可 以确认到,与使用葡萄糖的情况相比,在使用玉米糖液的情况下赤藓糖醇产量、转变率及生 产性相似或优异(实验例6)。
[0043] 此外,在混合有玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物和酵母提取物的培养基中,实 施赤藓糖醇生产。其结果确认到,特别是在添加1 (w/v)%的CSL和0. 25 (w/v)%的酵母提 取物的情况下,赤藓糖醇产量及生产性优异(实验例7)。
[0044] 在本发明的另一实施例中,实施了解根据葡萄糖母液加料方法的赤藓糖醇的生产 的实验。其结果确认到,在培养初期以葡萄糖浓度为50g/L或100g/L的方式添加葡萄糖母 液、培养时如果发酵槽内葡萄糖浓度变为50g/L以下则间歇性加料葡萄糖母液的情况下, 尽管培养时间短,葡萄糖母液的产量及生产性也优异(实验例8及9)。
[0045] 进一步,在本发明的另一实施例中,持续进行葡萄糖母液加料来进行发酵直至无 法进一步利用葡萄糖。其结果确认,赤藓糖醇的产量为250g/L,与中断发酵的情况相比,赤 藓糖醇产量增加,转变率相似(实验例10)。
[0046] 由此确认,在包含如葡萄糖母液和CSL之类的副产物的培养基中,通过微生物发 酵,能够极好地制造赤藓糖醇。此外证明,丛梗孢酵母SYC-ERY1菌株的赤藓糖醇生产能力 优异,特别是通过将葡萄糖母液和CSL用作基质,能够极好地生产赤藓糖醇。
[0047] 据此,已将上述丛梗孢酵母SYC-ERY1菌株于2013年11月5日保藏在韩国生 命工学研宄院微生物资源中心,获得了保藏号KCTC18261P,并于2014年11月28日进行 了由最初的保藏号KCTC18261P转换为布达佩斯条约下的保藏的申请,从而获得保藏号 KCTC12720BP。
[0048] 在本发明的一个实施方式中,提供一种制造赤藓糖醇的方法,其包括在包含葡萄 糖母液和玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物的培养基中培养赤藓糖醇生产菌株的步骤。
[0049] 在本申请中,所谓术语"赤藓糖醇"是指甜度为糖的70至80%左右、具有清凉甜味 的白色结晶性粉末的甜味料,其化学式为c4H1(lo4。具体地说,在本发明中,赤藓糖醇是指通 过发酵法生产的赤藓糖醇,优选地,其可以是将葡萄糖母液和玉米浸渍液或玉米浸渍液的 加工物作为基质、通过微生物发酵生产的赤藓糖醇。作为一个实例,其可以是通过赤藓糖醇 生产菌株生产的赤藓糖醇,并且可以是通过丛梗孢酵母SYC-ERY1菌株生产的赤藓糖醇。上 述赤藓糖醇可以利用本发明的方法或者由培养本发明的菌株而得到的细胞、培养物或其提 取物获得,将菌株发酵液经过过滤、精制、结晶化或水洗过程并干燥后获得,但不限于此。
[0050] 赤藓糖醇生产菌株作为具有赤藓糖醇生产能力的菌株,在本发明中,是指利用葡 萄糖母液和/或玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物能够生产赤藓糖醇的赤藓糖醇生产菌 株。例如,当能够生产赤藓糖醇的菌株与26SrRNA序列比较时,具有优选为70%以上、更优 选为80%以上、进一步优选为90%以上、最优选为95%以上的序列同源性的微生物均属于 本发明的范围。作为一个实例,丛梗孢酵母菌株是赤藓糖醇生产菌株,当丛梗孢酵母菌株与 26SrRNA序列比较时,具有优选为70%以上、更优选为80%以上、进一步优选为90%以上、 最优选为95%以上的序列同源性的微生物均属于本发明的范围。
[0051] 所谓术语"基质(substrate) "是指赤藓糖醇生产菌株为了生产赤藓糖醇而使用的 原料。作为一个实例,其可以是葡萄糖本身,也可以是包含葡萄糖的原料。在本发明中,作 为基质,使用了葡萄糖母液,但不限于此,只要是赤藓糖醇生产菌株为了赤藓糖醇的生产而 使用的原料就属于本发明的范围。
[0052] 在本说明书中,所谓"葡萄糖母液"是指在将玉米及其他淀粉类糖化(水解)而制 造葡萄糖的过程中额外产生的脱水母液、以及利用制造葡萄糖时使用的水洗水和清洗水等 水溶解葡萄糖后具有相同糖度的所有液体。葡萄糖母液通常含有700至900g/L的葡萄糖。 本发明中所使用的葡萄糖母液包含约870g/L程度的葡萄糖。因此,葡萄糖母液能够用作赤 藓糖醇生产菌株用于生产赤藓糖醇的基质。
[0053] 作为一个实施方式,培养赤藓糖醇生产菌株的培养基可以以培养基内的葡萄糖浓 度为5至45 (w/v) %的方式包含葡萄糖母液。在葡萄糖的浓度小于5 (w/v) %的情况下,出 现培养基内葡萄糖浓度不足的现象,导致细胞损伤,有可能使细胞活性降低,在葡萄糖的浓 度大于45 (w/v) %的情况下,由于高浓度的葡萄糖导致的高渗透压而阻碍微生物生长发育, 有可能使赤藓糖醇生产速度降低。具体地说,可以以葡萄糖浓度为10至45 (w/v)%、5至 10 (w/v) %的方式包含,只要属于5至45 (w/v) %的葡萄糖浓度范围,就没有限制,均属于本 发明的范围。
[0054] 所谓术语"玉米浸渍液(cornsteepliquor,CSL) "是在制造玉米淀粉的过程中 得到的副产物或其浓缩物,是指包含大量氨基酸、3至10 (w/v) %氮和其他物质的溶液。通 常,玉米浸渍液可以是在玉米淀粉的制造过程中将玉米浸渍于含有亚硫酸的水后去除玉米 后得到的浸渍液。在本发明中,可以使用玉米浸渍液来代替通过常规发酵法生产赤藓糖醇 时所使用的酵母提取物。
[0055] 作为一个实施方式,培养赤藓糖醇生产菌株的培养基可以包含0.5至5(w/v) % 的玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物。在玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物的含量低于 0. 5 (w/v) %的情况下,与微生物生长发育所需的氮源的量相比,培养基内氮源不足,微生物 生长发育变慢,有可能产生使赤藓糖醇生产速度变慢的影响,在大于5 (w/v) %的情况下,由 于培养基内氮过量,因此微生物会受到阻碍而使生长发育及活性降低。具体地说,玉米浸渍 液或玉米浸渍液的加工物可以是0. 5至7(w/v) %、0. 5至1 (w/v) %、1至3(w/v) %、0. 5至 3 (w/v) %。作为具体的实例,在玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物与酵母提取物一同使用 的情况下,培养基中可以包含1 (w/v) %的玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物,此时,培养基 中可以包含〇. 25至0, 5 (w/v) %的酵母提取物。
[0056] 在本发明的一个实施方式中,可以使用上述玉米浸渍液或其加工物,玉米浸渍液 的加工物可以是不直接使用玉米浸渍液而将通过对玉米浸渍液离心分离或沉淀而得的上 清液与水混合而得的。此时,通过将玉米浸渍液离心分离或沉淀而得的上清液与水的混合 比率可以是1:3至3:1。在通过将玉米浸渍液离心分离或沉淀而得的上清液的含有比率高 于上述范围的情况下,有可能因玉米浸渍液内的悬浮物而使微生物生长发育受到阻碍,在 通过将玉米浸渍液离心分离或沉淀而得的上清液的含有比率低于上述范围的情况下,水的 比率升高,与此相对,玉米浸渍液或其加工物的量减少,有可能使生长发育所需的氮源供给 无法顺利实现。具体地说,可以是1: 2、1:1、2:1,但不限于此。
[0057] 为了本发明的目的,在培养赤藓糖醇生产菌株的培养基中,可以包含葡萄糖母液 和玉米浸渍液或其加工物,葡萄糖母液是生产葡萄糖时的副产物,玉米浸渍液或其加工物 是产生淀粉后留下的剩余物,因此非常廉价。由此,如果使用葡萄糖母液和玉米浸渍液或其 加工物来代替
当前第2页1 2 3 4 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1