生物催化剂组合物中，可以进一步包含使赤藓糖醇的产 量或转变率增加的成分。
[0077] 发明效果
[0078] 本发明提供将如葡萄糖母液和/或玉米浸渍液或其加工物之类的副产物用作微 生物发酵基质来制造赤藓糖醇的方法、以及包含如葡萄糖母液和/或玉米浸渍液或其加工 物之类的副产物的培养基组合物，并且提供适合于本发明的赤藓糖醇制造方法且赤藓糖醇 生产能力优异的丛梗孢酵母SYC-ERY1菌株。由此，通过将葡萄糖母液和玉米浸渍液或其加 工物用作基质，能够非常廉价地生产赤藓糖醇，如果使用上述菌株，则能够使赤藓糖醇的收 率及生产性增加，并且能够缩短培养天数。
【附图说明】
[0079] 图1表示根据实验例8的加料（feeding)方法的OD值的变化。"常规加料 (conventionalfeeding) "表示实施例8的培养及加料条件1 连续加料（continuous feeding) "表示实施例8的培养及加料条件2 间歇加料（intermittentfeeding) "表示 实施例8的培养及加料条件3。
【具体实施方式】
[0080] 以下，依据本发明的实施例进行详细说明。但，下述实施例仅用于例示本发明，本 发明并不限于下述实施例。
[0081] 实施例1.从挿孢酵母SYC-ERY1母菌株的分离
[0082] 本发明所使用的微生物依据以下方法分离。将蜂巢在包含35(w/v) %葡萄糖和 1.5(w/v) %酵母提取物的液体培养基中以30度、250rpm的条件培养6天。将培养的培养液 涂抹于相同组成的固体培养基，得到约5000个菌落（colony)。
[0083] 将通过菌株分离获得的菌落接种于包含45(w/v) %葡萄糖、0.5(w/v) %酵母提 取物、0.35(w/v) %KN03、0.025(w/v) %KH2P04、5ppmMnS04、3ppm硫胺素（Thiamine)的 4 ml(试管）培养基（pH5.5)，并以30°C、200rpm培养6天。
[0084] 将培养6天的培养液在13,OOOrpm下进行10分钟离心分离，去除细胞而仅仅得到 培养上清液，利用薄层色谱（TLC)分析上清液，筛选赤藓糖醇生产菌株。
[0085]TLC分析条件如下。TLC板（plate)使用TLCSilicagel60F254,展开溶剂 是乙腈：乙酸乙醋：1_丙醇：水（water) = 85:20:20:15 (v/v/v/v)，展开后将板在碱性 (Alkaline)AgN03溶剂中浸泡5分钟。之后，在甲醇（MeOH)溶液中浸泡30分钟后，快速浸 泡于1. 5MNa2S203溶液并取出，完全干燥后确认色点（spot)。
[0086] 通过TLC在5000个菌落中只筛选生产赤藓糖醇的菌落，对于色点鲜明的样品， 通过高效液相色谱（HPLC)的RI分析定量剩余葡萄糖和所生产的赤藓糖醇的量。HPLC分 析条件如表1所示，之后的全部实施例均在相同条件下进行分析。HPLC分析使用Aminex HPC-87H柱，流动相溶剂使用0. 0025NH2S04，在65°C以0. 5ml/min的速度一边流淌溶剂一 边用RI检测仪分析。
[0087][表1]
【主权项】
1. 一种制造赤藓糖醇的方法，其包括在包含葡萄糖母液和玉米浸渍液或玉米浸渍液的 加工物的培养基中培养赤藓糖醇生产菌株的步骤。
2. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述培养基以培养基内的葡萄糖浓度为 5至45 (w/v) %的方式包含葡萄糖母液。
3. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述葡萄糖母液包含700至900g/L的葡 萄糖。
4. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述培养基包含0. 5至5 (w/v) %的玉米 浸渍液或玉米浸渍液的加工物。
5. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物 包含3至10 (w/v) %的氮。
6. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述玉米浸渍液的加工物是将通过对玉 米浸渍液进行离心分离或沉淀而得的上清液与水以3:1至1:3的比率混合而成的。
7. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述培养步骤在30至35°C的温度下实 施。
8. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述培养步骤在pH 5至6下实施。
9. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述培养步骤实施3至10天。
10. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述培养步骤是分批式、补料分批式或 连续式形式的培养。
11. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，在所述培养步骤中，如果培养时发酵槽 内葡萄糖浓度变为50g/L以下，则间歇性加料葡萄糖母液。
12. 如权利要求11所述的制造赤藓糖醇的方法，所述加料葡萄糖母液使所述发酵槽内 葡萄糖浓度保持为10至l〇〇g/L。
13. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述培养基进一步包含酵母提取物。
14. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述培养基包含大于0且小于或等于 0. 5 (w/v) %的酵母提取物。
15. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述赤藓糖醇生产菌株是在所述培养 步骤前进行种菌培养而得的。
16. 如权利要求15所述的制造赤藓糖醇的方法，所述种菌培养在包含选自由葡萄糖、 硝酸钾KNO3、磷酸二氢钾KH 2PO4、硫酸锰MnSO#硫胺素组成的组中的一种以上的培养基中 实施。
17. 如权利要求15所述的制造赤藓糖醇的方法，所述种菌培养在pH 5至6、以及温度 28至32°C下实施1至3天。
18. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述赤藓糖醇生产菌株为选自由丛 梗抱酵母（Moniliella pollinis)、Moniliella tomentosa var. pollinis、Moniliella acetoabutens、短梗霉属（Aureobasidium sp. )、Trichosporonoides madida、木兰假丝酵 母（Candida magnolia)、圆酵母属（Torula sp.)、毕赤酵母属（Pichia sp.)和Pseudozyma tsukubaensis组成的组中的一种以上。
19. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述赤藓糖醇生产菌株是丛梗孢属 (Moniliella sp.)〇
20. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述赤藓糖醇生产菌株是丛梗孢酵母。
21. 如权利要求1所述的制造赤藓糖醇的方法，所述赤藓糖醇生产菌株是保藏号为 KCTC12720BP 的丛梗孢酵母 SYC-ERYl (Moniliella pollinis SYC-ERY1)菌株。
22. -种用于生产赤藓糖醇的赤藓糖醇生产菌株培养用培养基组合物，其包含葡萄糖 母液和玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物。
23. 如权利要求22所述的赤藓糖醇生产菌株培养用培养基组合物，所述赤藓糖醇生产 菌株是保藏号为KCTC12720BP的丛梗孢酵母SYC-ERYl菌株。
24. -种保藏号为KCTC12720BP的丛梗孢酵母SYC-ERYl菌株，其具有赤藓糖醇生产能 力。
25. -种赤藓糖醇制造用生物催化剂组合物，其包含保藏号为KCTC12720BP的丛梗孢 酵母SYC-ERYl菌株。
【专利摘要】本发明提供赤藓糖醇制造方法、丛梗孢酵母变异菌株及其用途。本发明提供包含葡萄糖母液和玉米浸渍液或玉米浸渍液的加工物的培养基组合物，以及利用该培养基组合物由赤藓糖醇生产菌株制造赤藓糖醇的方法。此外，本发明提供具有赤藓糖醇生产能力的丛梗孢酵母SYC-ERY1菌株及包含其的赤藓糖醇制造用生物催化剂组合物。KCTC 12720BP20131105
【IPC分类】C12P7-18, C12R1-645, C12R1-84, C12N1-16, C12R1-72
【公开号】CN104745644
【申请号】CN201410831742
【发明人】李尚熙, 吴百禄, 朴成原, 朴钟辰, 李康杓
【申请人】株式会社三养吉尼克斯
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2014年12月26日