串联表达的siRNA及其在治疗慢性淋巴细胞白血病中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医学领域，更具体地，涉及一种串联表达针对BTK的SiRNA的方法、串 联表达的siRNA及其在治疗慢性淋巴细胞白血病中的应用。
【背景技术】
[0002] 慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL)，简称慢淋，是一种 进展较缓慢的成熟B淋巴细胞增殖性疾病。
[0003] -半以上的CLL病例13ql4纯合性或杂合性丢失，是CLL最常见的染色体异常，特 征是机体的淋巴细胞在体内异常增生和积蓄伴有免疫功能低下。CLL多见于中老年人，50 岁以上占90%，男性易患。CLL起病隐袭，临床特征多样，可呈现惰性或侵袭性，患者存活时 间从1年到15年以上不等，其发病机理尚不十分明确。
[0004] 目前，对慢性淋巴细胞白血病预后因素的认识还不十分明确，使得患者不能像急 性白血病患者那样根据预后风险选择相应的治疗手段。对于患者来说，即使是预后最差者 其预期生存期也有数年。
[0005] 在治疗时考虑的因素包括疾病进展、临床症状、肿瘤负荷、年龄、并发症、不利预后 因素和治疗对生存期的影响等。目前，除了造血干细胞移植外，对于CLL尚无有效的治疗手 段。典型的医院治疗慢性粒细胞白血病的方法主要采用化疗、放疗、干扰素治疗、骨髓移植 等方法，但是治疗效果都不是很理想，并不能改变本病的自然进程。
[0006] 因此，本领域迫切需要开发新的有效治疗CLL的方法和药物。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种可用于治疗CLL的方法以及相应的药物。
[0008] 在本发明的第一方面，提供了一种重组的用于抑制酪氨酸激酶的核酸序列，所述 的核酸序列的结构如式V所示：
[0009] A- (B-L-) p-Z (式 V)
[0010]式中，
[0011] A为任选的5'端的序列（较佳地长度为0-50bp，更佳地0-20bp，最佳地O-IObp);
[0012] B为相同或不同的、特异性抑制酪氨酸激酶的siRNA序列，或者用于产生所述 siRNA序列的前体RNA序列；
[0013] L为任选的间隔序列（较佳地长度为0-50bp，更佳地0-20bp，最佳地O-IObp);
[0014] p为1、2、3、4或5的正整数；
[0015] Z为任选的5'端的序列（较佳地长度为0-50bp，更佳地0-20bp，最佳地O-IObp)。
[0016] 在另一优选例中，所述的核苷酸序列包括DNA序列和RNA序列。
[0017] 在另一优选例中，所述的B是序列选自SEQ ID NO. : 1、2或3的siRNA、或用于产 生所述siRNA的前体RNA。
[0018] 在另一优选例中，所述的重组的用于抑制酪氨酸激酶的核酸序列是选自下组的一 种或多种活性成分：
[0019] (a).抑制酪氨酸激酶的siRNA，其中所述的siRNA包括序列如SEQ ID NO. : 1-3所 述的siRNA序列；
[0020] (b).前体RNA，所述的前体RNA能在宿主内加工成（a)中所述的抑制酪氨酸激酶 的 siRNA ;
[0021] (C).多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主转录形成（b)中所述的前体RNA，并加工 形成（a)中所述的siRNA ;
[0022] (d).表达载体，所述表达载体含有（a)中所述的抑制酪氨酸激酶的siRNA、或（b) 中所述的前体RNA、或（c)中所述的多核苷酸，并且所述式V中，A和Z相连形成环状。
[0023] 在另一优选例中，所述的核酸序列是串联表达2种或多种不同siRNA序列的核酸 序列。
[0024] 在另一优选例中，所述的"重组的"包括人工合成的。
[0025] 在另一优选例中，所述的前体RNA能在宿主（如哺乳动物，包括人）内加工成（a) 中所述的siRNA。
[0026] 在本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括药学上可接 受的载体和有效量的选自下组的一种或多种活性成分：
[0027] (a).抑制酪氨酸激酶的siRNA，其中所述的siRNA包括序列如SEQ ID NO. : 1-3中 任一所述的siRNA序列；
[0028] (b).前体RNA，所述的前体RNA能在宿主内加工成（a)中所述的抑制酪氨酸激酶 的 siRNA ;
[0029] (c).多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主转录形成（b)中所述的前体RNA，并加工 形成（a)中所述的siRNA ;
[0030] (d).表达载体，所述表达载体含有（a)中所述的抑制酪氨酸激酶的siRNA、或（b) 中所述的前体RNA、或（c)中所述的多核苷酸；和
[0031] (e). (a)中所述的siRNA的激动剂。
[0032] 在另一优选例中，（c)中所述的多核苷酸串联表达相同或不同的所述siRNA。
[0033] 在另一优选例中，（a)中所述siRNA包括未修饰的形式以及或经修饰的形式。
[0034] 在另一优选例中，所述的经修饰的形式选自下组的一种或多种修饰形式：核苷酸 的糖基修饰、核苷酸之间连接方式的修饰、胆固醇修饰、锁核苷酸修饰、肽段修饰、脂类修 饰、卤素修饰、烃基修饰、和核酸修饰。
[0035] 在另一优选例中，所述的核苷酸的糖基修饰包括2-0-甲基的糖基修饰、2-0-甲氧 乙酯的糖基修饰、2-0-烷基的糖基修饰、2-氟代的糖基修饰、糖环修饰、锁核苷酸修饰；和/ 或
[0036] 所述的核苷酸之间连接方式的修饰包括硫代磷酸修饰、磷酸烷基化修饰。
[0037] 在另一优选例中，所述的修饰形式包括式I所示的结构的化合物单体或其多聚 体：
[0038] (X) n- (Y) m
[0039] 式 I，
[0040] 在式I中，
[0041] 各X为（a)中所述的siRNA ;
[0042] 各Y独立地为促进siRNA施药稳定性的修饰物；
[0043] Y连接于X的左侦彳、右侧或中间；
[0044] η为1-100的（较佳地1-20)正整数（较佳地η为1、2、3、4或5);
[0045] m为1-1000的（较佳地1-200)正整数；
[0046] 各""表示接头、化学键、或共价键。
[0047] 在另一优选例中，所述的接头是长度为1-10个碱基的核酸序列。
[0048] 在另一优选例中，所述的Y包括（但不限于）胆固醇、类固醇、甾醇、醇、有机酸、月旨 肪酸、酯、单糖、多糖、氨基酸、多肽、单核苷酸、多核苷酸。
[0049] 在另一优选例中，（c)所述的多核苷酸的序列如SEQ ID NO. :7所示。
[0050] TTCACTGGACTCTTCACCTCTGTTTTGGCCACTGACTGACAGAGGTGAAGTCCAGTGAACAGGACA CA AGGCCTGTTACTAGCACTCACATGGAACAAATGGCCCAGATCCTGGAGGCTTGCTGAAGGCTGTATGCT GTTAGCA GTTGCTCAGCCTGACGTTTTGGCCACTGACTGACGTCAGGCTGCAACTGCTAACAGGACACAAG GCCTGT