及其制备方法_2

文档序号:8507820阅读:来源:国知局
丹型邸0VVLP疫苗W;
[0046] 所述名称为B的重组载体为将苏丹型邸0VG蛋白1编码基因和苏丹型邸0VVP40 蛋白3编码基因插入pFas巧acDUAL载体中得到的载体;
[0047] 所述科特迪瓦型邸0VG蛋白1编码基因和科特迪瓦型邸0VVP40蛋白3编码基 因通过名称为C的重组载体转染目的细胞,即得到科特迪瓦型邸0VVLP疫苗IX;
[0048] 所述名称为C的重组载体为将科特迪瓦型邸0VG蛋白1编码基因和科特迪瓦型 邸0VVP40蛋白3编码基因插入pFas巧acDUAL载体中得到的载体。
[0049] 上述成套免疫原中,
[0050] 所述扎伊尔型邸0V G蛋白1的编码基因序列如序列表中序列1所示;
[0051] 所述苏丹型邸0VG蛋白1的编码基因序列如序列表中序列2所示;
[0052] 所述科特迪瓦型邸0VG蛋白1的编码基因序列如序列表中序列3所示;
[0053] 所述扎伊尔型邸0V亚单位疫苗IV的编码基因序列如序列表中序列4所示;
[0054] 所述苏丹型邸0V亚单位疫苗V的编码基因序列如序列表中序列5所示;
[00巧]所述科特迪瓦型邸0V亚单位疫苗VI的编码基因序列如序列表中序列6所示; [0056] 所述扎伊尔型邸0VVP40蛋白3的编码基因序列如序列表中序列7所示;
[0057]所述苏丹型邸OV VP40蛋白3的编码基因序列如序列表中序列8所示;
[005引所述科特迪瓦型邸0VVP40蛋白3的编码基因序列如序列表中序列9所示。
[0059] 上述成套免疫原中,所述目的细胞为Sf9昆虫细胞。
[0060] 本发明的另一个目的是提供上述免疫原制备得到的抗埃博拉病毒的免疫球蛋白 F(ab')2、抗埃博拉病毒的抗体或中和埃博拉病毒的产品。
[0061] 上述免疫原在制备抗埃博拉病毒的免疫球蛋白F(油')2中的应用;或上述免疫 原在制备抗埃博拉病毒的抗体中的应用;或上述免疫原在制备中和埃博拉病毒的产品中的 应用也属于本发明的目的。
[0062] 上述抗埃博拉病毒的免疫球蛋白F(油')2、抗埃博拉病毒的抗体或中和埃博拉病 毒的产品在制备预防和/或治疗埃博拉病毒引起的疾病的产品中的应用也属于本发明的 保护范围。
[0063] 本发明的最后一个目的是一种制备抗埃博拉病毒的抗体或中和埃博拉病毒的产 品的试剂盒。
[0064] 本发明提供的制备抗埃博拉病毒的抗体或中和埃博拉病毒的产品的试剂盒包括 上述的免疫原。
[0065] 上述试剂盒中,所述试剂盒还包括记载在可读载体中的免疫方法:
[0066]所述免疫方法为;第一次免疫用扎伊尔型邸0V核酸疫苗I、苏丹型邸0V核酸疫苗 II和科特迪瓦型邸0V核酸疫苗III各3mg混匀得到的S价核酸疫苗、第二次免疫用扎伊尔型 邸0V核酸疫苗I、苏丹型邸0V核酸疫苗II和科特迪瓦型邸0V核酸疫苗III各6mg混匀得到 的S价核酸疫苗、第S次免疫用扎伊尔型邸0V核酸疫苗I、苏丹型邸0V核酸疫苗II和科特 迪瓦型邸0V核酸疫苗III各12mg混匀得到的S价核酸疫苗;第四次免疫用扎伊尔型邸0V核 酸疫苗I、苏丹型邸0V核酸疫苗II和科特迪瓦型邸0V核酸疫苗III各24mg混匀得到的S价 核酸疫苗;
[0067]或第一次免疫用扎伊尔型邸0V亚单位疫苗IV、苏丹型邸0V亚单位疫苗V、科特迪 瓦型邸0V亚单位疫苗VI各Img混匀得到的S价亚单位疫苗;第二次免疫用扎伊尔型邸0V 亚单位疫苗IV、苏丹型邸0V亚单位疫苗V、科特迪瓦型邸0V亚单位疫苗VI各2mg混匀得到 的S价亚单位疫苗;第S次免疫用扎伊尔型邸0V亚单位疫苗IV、苏丹型邸0V亚单位疫苗V 和科特迪瓦型邸0V亚单位疫苗VI各3mg混匀得到的S价亚单位疫苗;第四次免疫用扎伊尔 型邸0V亚单位疫苗IV、苏丹型邸0V亚单位疫苗V和科特迪瓦型邸0V亚单位疫苗VI各4mg 混匀得到的=价亚单位疫苗;
[0068] 或第一次免疫用扎伊尔型邸0VVLP疫苗W、苏丹型邸0VVLP疫苗W和科特迪瓦 型邸0VVLP疫苗IX各Img混匀得到的S价VLP疫苗;第二次免疫用扎伊尔型邸0VVLP疫 苗W、苏丹型邸0VVLP疫苗W和科特迪瓦型邸0VVLP疫苗IX各2mg混匀得到的S价VLP 疫苗;第S次免疫用扎伊尔型邸0VVLP疫苗W、苏丹型邸0VVLP疫苗W、科特迪瓦型邸0V VLP疫苗IX各3mg混匀得到的S价VLP疫苗;第四次免疫用扎伊尔型邸0VVLP疫苗W、苏 丹型邸0VVLP疫苗W和科特迪瓦型邸0VVLP疫苗IX各4mg混匀得到的S价VLP疫苗;
[0069]或第一次免疫用核酸疫苗扎伊尔型邸0V核酸疫苗I、苏丹型邸0V核酸疫苗II 和科特迪瓦型邸0V核酸疫苗III各Img混匀得到的S价核酸疫苗;第二次免疫用扎伊尔型 邸0V亚单位疫苗IV、苏丹型邸0V亚单位疫苗V和科特迪瓦型邸0V亚单位疫苗VI各Img混 匀得到的S价亚单位疫苗;第S次免疫用扎伊尔型邸OVVLP疫苗W、苏丹型邸OVVLP疫苗W和科特迪瓦型邸0VVLP疫苗IX各2mg混匀得到的S价VLP疫苗;第四次免疫用扎伊尔型 邸0VVLP疫苗W、苏丹型邸0VVLP疫苗W和科特迪瓦型邸0VVLP疫苗IX各3mg混匀得到 的=价VLP疫苗;
[0070] 或第一次免疫Img的邸0V核酸疫苗I;第二次免疫Img的邸0V亚单位疫苗IV;第 S次免疫2mg的邸0VVLP疫苗W;第四次免疫3mg的邸0VVLP疫苗W。
[0071] 上述试剂盒中,所述免疫的动物为马;所述马的重量为300-5(K)kg。
[0072] 本发明利用S种S价邸0V疫苗抗原巧BOV核酸疫苗、邸0V亚单位疫苗和邸0VVLP 疫苗)免疫健康动物,产生高效价EB0V的抗血清,去除能引起副作用的Fc片段,制备得到 抗邸0V特异性免疫球蛋白F(油')2。通过实验证明:本发明制备得到的抗邸0V特异性免 疫球蛋白F(油')2不仅中和效价、纯度、安全性均较高且稳定,符合中国生物制品规程的要 求,而且能特异中和邸0V,对邸0V感染有特异性治疗效果,可W有效地治疗埃博拉病毒病, 是非常有价值的治疗性药物。
【附图说明】
[0073] 图1为巧光显微镜检测实验例1制备的邸0V假病毒结果。图1A为Zaire埃博拉 病毒假病毒(1 ; 1000稀释)巧光显微镜结果;图1B为Sudan埃博拉病毒假病毒(1 ; 1000稀 释)巧光显微镜结果;图1C为Coted'Ivoire埃博拉病毒假病毒(1 ; 1000稀释)巧光显微 镜结果;图1D为空白对照巧光显微镜结果;图1E为Zaire埃博拉病毒假病毒红色激发光下 观察结果。
[0074] 图2为实施例1制备的邸0V核酸疫苗的鉴定结果。Ml、M2为分子量Marker;Z、 S、C分别为Zaire、Sudan、Coted'Ivoire埃博拉病毒核酸疫苗EcoRI和甜aI双酶切结 果;Z1为Zaire埃博拉病毒核酸疫苗纯度检定结果。
[00巧]图3为实施例2制备的邸0VG蛋白亚单位疫苗的检定结果。M为分子量Marker;ZG为Zaire埃博拉病毒亚单位疫苗SDS-PAGE结果。
[0076] 图4为实施例3制备的邸0VVLP疫苗的检定结果。图4A为Zaire埃博拉病毒 VLPSDS-PAGE代表性结果;图4B为Zaire埃博拉病毒VLP透射电镜图。
[0077] 图5为实施例1、3、5制备的马抗埃博拉病毒免疫球蛋白F(油')2成品的 SDS-PAGE代表性结果。M为分子量Marker;IgG为血浆;1、3、5分别为实施例1、3、5制备的 马抗埃博拉病毒免疫球蛋白F(油')2。
【具体实施方式】
[0078] 下述所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
[0079] 下述所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
[0080] 下述实验例和实施例进一步说明,但不限于本发明。
[0081]实施例1、邸0V核酸疫苗及抗邸0V特异性免疫球蛋白F(油')2的制备 [008引一、邸0V核酸疫苗的制备
[0083] 1、目的基因的获得
[0084] 从NCBI网站下载邸0VG蛋白全基因序列(2(mbp),利用DNAMAN软件进行序列比 对,分析核巧酸和氨基酸序列的同源性,得到能代表现代流行株遗传特征的核巧酸序列;分 析G蛋白核巧酸序列、商品化核酸疫苗载体pVAXl序列内切酶酶切位点;在G蛋白核巧酸序 列上游加入内切酶巧coRI)序列佑AATTC)和KozaK序列(ACTATGG),下游加入终止密码 子序列(TAA)和内切酶畑aI)序列(TCT
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