量，分别用注射用水加热溶解后过0.22ym微孔滤膜，冷却后加入到无 菌滤液中，混合均匀后放入冻干箱中冻干。
[0072] 冻干工艺条件如下：将产品在零下20~50°C温度下预冻5~8小时（视盘中液 量），将导热油以l〇°C/小时的速度升至35°C，真空度前箱保持小于15Pa，使制品升华。当 制品温度达到30°C时，保温3小时直至完全干燥。即得胰激肽原酶，纯度95. 75%，效价371 单位/mg，比活928单位/mg蛋白，收率91%。
[0073] 7)包装：将冻干好的成品混合均匀后粉碎，并过80目筛装入密闭容器中，加盖密 封即得。
[0074] 其中，胰激肽原酶粗品液的制备方法同实施例1，制备得到的粗品液中总效价 3840万单位。
[0075] Lysine - Sepharose亲和层析偶联固定相制备方法为：
[0076] ①将S印harose用5倍量纯化水溶涨，加入质量浓度为5%的硫酸溶液，5%硫酸溶 液用量为Sepharose湿重的50%，搅拌均勾；
[0077] ②向步骤①搅拌均匀后的溶液中滴加质量浓度为3%硝酸钠溶液，3%硝酸钠溶液 用量为Sepharose湿重的30%，搅拌，放置30分钟，洗绦；
[0078] ③将赖氨酸（Lysine)用纯化水溶解，10%浓度溶液用量为6%，缓缓滴加到上述 Sepharose上，揽拌均勾；
[0079] ④用碳酸钠溶液调整pH值至5. 0~7. 0,放置3小时，抽滤，纯化水洗至中性，即 得。
[0080] 制备得到的Lysine - Sepharose亲和层析偶联固定相的结合率为85%，亲和吸附 率为95. 3%。
[0081] 实施例3 :胰激肽原酶的制备
[0082] (1)配制：配制浓度为20% (g/ml)浓度的硫酸铵平衡液，调整pH为4. 0 ;配制浓 度为30%(g/ml)的氯化钠洗脱液，调整pH为6.0,检测溶液的电导值；
[0083](2)亲和柱层析：
[0084] 1)平衡：将Histidine-Sepharose亲和层析偶联固定相填入直径为94〇cm，体积 为50L的层析柱中，用步骤（1)配制的pH4.0、浓度20% (g/ml)的硫酸铵平衡液平衡，直至 进出层析柱的溶液pH值与电导值相同时平衡完毕；
[0085] 2)进样：调整胰激肽原酶粗品液的pH值与无机盐平衡液一致，粗品液电导值等于 平衡液电导值（以无机盐或水调整电导值），根据每升填料最大亲和量3000万单位进行上 样；
[0086] 3)洗涤：用pH4. 0、20% (g/ml)浓度的硫酸铵平衡液冲洗柱子，同时用紫外分光光 度计跟踪检测流出液在280nm处的吸收值，冲洗至流出液的吸收值低于0. 5时停止；
[0087] 4)洗脱：用pH6. 0、30% (g/ml)浓度的氯化钠洗脱液洗脱柱子，同时用紫外分光光 度计跟踪检测流出液在254nm处的吸收值，收集洗脱液，得收集液；以洗脱液效价大于30单 位/cm时为洗脱收集起点，以洗脱液效价小于20单位/cm时为洗脱收集终点，收集浓液体 积约为30~50L。
[0088] 5)除菌：收集液用0. 22 y m微孔滤膜的过滤器进行除菌过滤；
[0089]6)冻干：根据浓缩液的效价加入辅料明胶，控制成品的效价在360单位/mg以上， 计算辅料明胶的用量，分别用注射用水加热溶解后过0.22ym微孔滤膜，冷却后加入到无 菌滤液中，混合均匀后放入冻干箱中冻干。
[0090] 冻干工艺条件如下：将产品在零下20~50°C温度下预冻5~8小时（视盘中液 量），将导热油以l〇°C/小时的速度升至40°C，真空度前箱保持小于15Pa，使制品升华。当 制品温度达到30°C时，保温3小时直至完全干燥。即得胰激肽原酶，纯度95. 33%，效价375 单位/mg，比活975单位/mg蛋白。收率90. 8%。
[0091] 7)包装：将冻干好的成品混合均匀后粉碎，并过80目筛装入密闭容器中，加盖密 封即得。
[0092] 其中，胰激肽原酶粗品液的制备方法同实施例1，制备得到的粗品液中总效价 3960万单位。
[0093] Histidine - Sepharose亲和层析偶联固定相制备方法为：
[0094] ①将S印harose用纯化水溶涨，加入质量浓度为5%的硫酸溶液，5 %硫酸溶液用 量为Sepharose湿重的30%，搅拌均勾；
[0095] ②向步骤①搅拌均匀后的溶液中滴加质量浓度为3%硝酸钠溶液，3%硝酸钠溶液 用量为Sepharose湿重的60%，搅拌，放置30分钟，洗绦；
[0096] ③将组氨酸（Histidine)用纯化水溶解，10%浓度溶液用量为8%，缓缓滴加到上 述Sepharose上，搅拌均勾；
[0097] ④用碳酸钠溶液调整pH值至5. 0~7. 0,放置3小时，抽滤，纯化水洗至中性，即 得。
[0098] 制备得到的Histidine - Sepharose亲和层析偶联固定相的结合率为90. 6%，亲 和吸附率为95. 79%。
[0099] 实施例4:胰激肽原酶的制备
[0100] ⑴配制：配制浓度为20% (g/ml)浓度的硫酸钠平衡液，调整pH为4. 0;配制浓 度为25 % (g/ml)的氯化钠洗脱液，调整pH为6. 0,检测溶液的电导值；
[0101] (2)亲和柱层析：
[0102]1)平衡：将Arginine - Sepharose亲和层析偶联固定相填入直径为cp40cm，体积 为50L的层析柱中，用步骤（1)配制的pH4.0、浓度20% (g/ml)浓度的硫酸钠平衡液平衡， 直至进出层析柱的溶液pH值与电导值相同时平衡完毕；
[0103] 2)进样：调整胰激肽原酶粗品液的pH值与无机盐平衡液一致，粗品液电导值等于 平衡液电导值（以无机盐或水调整电导值），根据每升填料最大亲和量3000万单位进行上 样；
[0104] 3)洗涤：用pH4. 0、20% (g/ml)浓度的硫酸钠平衡液冲洗柱子，同时用紫外分光光 度计跟踪检测流出液在280nm处的吸收值，冲洗至流出液的吸收值低于0. 5时停止；
[0105] 4)洗脱：用pH6. 0、25%(g/ml)浓度的氯化钠洗脱液洗脱柱子，同时用紫外分光光 度计跟踪检测流出液在254nm处的吸收值，收集洗脱液，得收集液；以洗脱液效价大于30单 位/cm时为洗脱收集起点，以洗脱液效价小于20单位/cm时为洗脱收集终点，收集浓液体 积约为30~50L。
[0106] 5)除菌：收集液用0.22 ym微孔滤膜的过滤器进行除菌过滤；
[0107] 6)冻干：根据浓缩液的效价加入辅料明胶，控制成品的效价在360单位/mg以上， 计算辅料明胶的用量，分别用注射用水加热溶解后过0.22ym微孔滤膜，冷却后加入到无 菌滤液中，混合均匀后放入冻干箱中冻干。
[0108] 冻干工艺条件如下：将产品在零下20~50°C温度下预冻5~8小时（视盘中液 量），将导热油以l〇°C/小时的速度升至35°C，真空度前箱保持小于15Pa，使制品升华。当 制品温度达到30°C时，保温3小时直至完全干燥。即得胰激肽原酶，纯度95. 23%，效价373 单位/mg，比活925单位/mg蛋白，收率90. 7%。
[0109] 7)包装：将冻干好的成品混合均匀后粉碎，并过80目筛装入密闭容器中，加盖密 封即得。
[0110] 其中，胰激肽原酶粗品液的制备方法同实施例1，制备得到的粗品液中总效价 3970万单位。
[0111] 实施例5 :胰激肽原酶的制备
[0112] (1)配制：配制浓度为30% (g/ml)浓度的硫酸钠平衡液，调整pH为4. 0;配制浓 度为20% (g/ml)浓度的氯化铵洗脱液，调整pH为6. 0,检测溶液的电导值；
[0113] (2)亲和柱层析：
[0114] 1)平衡：将Histidine-Sepharose亲和层析偶联固定相填入直径为cp40cm，体积 为