一种黄酒米曲的蛋白酶活力测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种黄酒米曲的蛋白酶活力测定方法，属于黄酒酿造的技术领域。
【背景技术】
[0002] 米曲不仅是黄酒酿造中的糖化剂，小部分发酵剂，同时还赋予黄酒独特的风味。由 于米曲在黄酒酿造中占有极其重要的地位，其质量的优劣，直接影响到黄酒的质量和产量， 因此被形象地喻为"酒之骨"。因此，测定米曲的蛋白酶活力是十分必要的。
【发明内容】
[0003] 针对现有技术的上述技术问题，本发明的目的是提供一种黄酒米曲的蛋白酶活力 测定方法，准确测定黄酒米曲的蛋白酶活力，为酿造优质的黄酒奠定了基础。
[0004] 为达到上述目的，本发明是通过W下技术方案实现的： 一种黄酒米曲的蛋白酶活力测定方法，包括W下步骤： (1)标准曲线的绘制；0.Ig/L标准酪氨酸溶液稀释，从各稀释液中吸取ImL于另外的试 管中，准确加入5mL0. 4mol/LNa2C〇3溶液，ImL福林试剂稀释液，于40°C恒温水浴显色20分 钟，然后在680nm波长下测定各管吸光度； (2 )绘制酪氨酸浓度于吸光度的线性回归曲线，线性表达式为y=0. 0099X-0. 0022，R2=0. 9999,X为酪氨酸浓度，单位为ug/mL，y为吸光度； (3)测定蛋白酶活力： a、 样品前处理：吸取米曲浸出液5mU蒸馈水稀释2倍，分别吸取ImL稀释酶液于3支 离屯、管中，40°C恒温水浴锅中水浴预热5分钟，保温比，每15min揽拌一次，用干滤纸或脱脂 棉过滤，去除滤液，用抑=3的缓冲液进行稀释，W使吸光度的值在0. 2-0. 4之间为宜； b、 酪蛋白的水解：先将适量的2%酪素液和制备好的酶液放入40 + 0. 2°C的恒温水浴锅 中保温3-55min，然后吸入2份保温后的酶液1. 0血，各加入保温后的酪素液1. 0血，摇匀， 40 + 0. 2°C恒温水浴中水解15min，加入0.Amol/LCClsCOOH液2. 0血，摇匀，使蛋白质沉淀， 终止酶水解反应，并过滤备用； C、空白管中加入0.4mol/LS氯醋酸2mL，2%酪素溶液ImL，样品管中加入2%酪素溶 液山以在40°C水浴中水解10分钟后，样品管中各加入S氯醋酸2mU摇匀，停止酶作用； 4000巧m离屯、5分钟后，分别吸取ImL上清液于S只试管中，各加入0. 4mol/LNasCOs溶液 5血W及福林试剂ImL，于40°C水浴显色20分钟，在680皿波长下测定吸光度； 所述吸光度的计算公式为；蛋白酶活力；Ig绝干曲在40°C每分钟分解酪蛋白为酪氨酸 的微克数， 酶活=(1/K)XAe8〇XVX4Xn/(wX10) K;标准曲线的斜率Aew;680nm波长下的吸光度 V冰曲浸出液的体积，单位为血 4 ;反应液体积，单位为mL n;稀释倍数 W;绝干曲质量，单位为g10 ;酶反应时间，单位为min。
[0005] 本发明的有益效果如下： 本发明黄酒米曲的蛋白酶活力测定方法，能够准确、有效地测定黄酒米曲的蛋白酶活 力，为酿造优质的黄酒奠定了基础。
【附图说明】
[0006] 图1为酪氨酸浓度于吸光度的线性回归曲线。
【具体实施方式】
[0007] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于 此。
[000引本发明黄酒米曲的蛋白酶活力测定方法，包括W下步骤： (1) 标准曲线的绘制；0.Ig/L标准酪氨酸溶液按下表1稀释，从各稀释液中吸取ImL于 另外的试管中，准确加入5mL0. 4mol/LNa2C03溶液，ImL福林试剂稀释液，于40°C恒温水浴显 色20分钟，然后在680nm波长下测定各管吸光度；
(2) 绘制如图1所示的酪氨酸浓度于吸光度的线性回归曲线，线性表达式为 y=0. 0099X-0. 0022,R2=0. 9999,X为酪氨酸浓度，单位为ug/mL，y为吸光度； (3) 测定蛋白酶活力： a、 样品前处理：吸取米曲浸出液5mU蒸馈水稀释2倍，分别吸取ImL稀释酶液于3支 离屯、管中，40°C恒温水浴锅中水浴预热5分钟，保温比，每15min揽拌一次，用干滤纸或脱脂 棉过滤，去除滤液，用抑=3的缓冲液进行稀释，W使吸光度的值在0. 2-0. 4之间为宜； b、 酪蛋白的水解：先将适量的2%酪素液和制备好的酶液放入40 + 0. 2°C的恒温水浴锅 中保温3-55min，然后吸入2份保温后的酶液1. 0血，各加入保温后的酪素液1. 0血，摇匀， 40 + 0. 2°C恒温水浴中水解15min，加入0.Amol/LCClsCOOH液2.OmL，摇匀，使蛋白质沉淀， 终止酶水解反应，并过滤备用； C、空白管中加入0.4mol/LS氯醋酸2血，2%酪素溶液1血，样品管中加入2%酪素溶 液ImU在40°C水浴中水解10分钟后，样品管中各加入S氯醋酸2mU摇匀，停止酶作用； 4000巧m离屯、5分钟后，分别吸取ImL上清液于S只试管中，各加入0. 4mol/LNasCOs溶液 5血W及福林试剂1血，于40°C水浴显色20分钟，在680皿波长下测定吸光度； 所述吸光度的计算公式为；蛋白酶活力；Ig绝干曲在40°C每分钟分解酪蛋白为酪氨酸 的微克数， 酶活=(1/K)XAe80XVX4Xn/(wX10) K;标准曲线的斜率Ae8c;680nm波长下的吸光度 V冰曲浸出液的体积，单位为mL 4 ;反应液体积，单位为mL n;稀释倍数 W;绝干曲质量，单位为g10 ;酶反应时间，单位为min。
[0009] 本发明黄酒米曲的蛋白酶活力测定方法，能够准确、有效地测定黄酒米曲的蛋白 酶活力，为酿造优质的黄酒奠定了基础。
[0010] 上述实施例仅用于解释说明本发明的发明构思，而非对本发明权利保护的限定， 凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应落入本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种黄酒米曲的蛋白酶活力测定方法，其特征在于包括以下步骤： (1)标准曲线的绘制：0. lg/L标准酪氨酸溶液稀释，从各稀释液中吸取ImL于另外的试 管中，准确加入5mL0. 4mol/LNa2C03溶液，ImL福林试剂稀释液，于40°C恒温水浴显色20分 钟，然后在680nm波长下测定各管吸光度； (2 )绘制酪氨酸浓度于吸光度的线性回归曲线，线性表达式为y=0. 0099X-0. 0022， R2=O. 9999, X为酪氨酸浓度，单位为ug/mL，y为吸光度； (3)测定蛋白酶活力： a、 样品前处理：吸取米曲浸出液5mL，蒸馏水稀释2倍，分别吸取ImL稀释酶液于3支 离心管中，40°C恒温水浴锅中水浴预热5分钟，保温lh，每15min搅拌一次，用干滤纸或脱脂 棉过滤，去除滤液，用pH=3的缓冲液进行稀释，以使吸光度的值在0. 2-0. 4之间为宜； b、 酪蛋白的水解：先将适量的2%酪素液和制备好的酶液放入40±0. 2°C的恒温水浴锅 中保温3-55min，然后吸入2份保温后的酶液1.0 mL，各加入保温后的酪素液1.0 mL，摇匀， 40±0. 2°C恒温水浴中水解15min，加入0. 4mol/LCCl3C00H液2. OmL，摇匀，使蛋白质沉淀， 终止酶水解反应，并过滤备用； c、 空白管中加入0. 4mol/L三氯醋酸2mL，2%酪素溶液lmL，样品管中加入2%酪素溶 液lmL，在40°C水浴中水解10分钟后，样品管中各加入三氯醋酸2mL，摇匀，停止酶作用； 4000rpm离心5分钟后，分别吸取ImL上清液于三只试管中，各加入0. 4mol/L Na2C03溶液 5mL以及福林试剂lmL，于40°C水浴显色20分钟，在680nm波长下测定吸光度； 所述吸光度的计算公式为：蛋白酶活力：Ig绝干曲在40°C每分钟分解酪蛋白为酪氨酸 的微克数， 酶活=(IA) XA68tlXVXdXnAwX 10) K :标准曲线的斜率 A68(l:680nm波长下的吸光度 V :米曲浸出液的体积，单位为mL 4 :反应液体积，单位为mL n :稀释倍数 w :绝干曲质量，单位为g 10:酶反应时间，单位为min。
【专利摘要】本发明涉及一种黄酒米曲的蛋白酶活力测定方法，包括以下步骤：（1）标准曲线的绘制；（2）绘制酪氨酸浓度于吸光度的线性回归曲线；（3）测定蛋白酶活力：吸取米曲浸出液，蒸馏水稀释2倍，分别吸取稀释酶液于离心管中，水浴预热，空白管中加入三氯醋酸，酪素溶液，样品管中加入酪素溶液，水浴中水解，样品管中各加入三氯醋酸，摇匀，停止酶作用；离心后吸取上清液于三只试管中，加入Na2C03溶液以及福林试剂，水浴显色，测定吸光度。本发明黄酒米曲的蛋白酶活力测定方法，能够准确、有效地测定黄酒米曲的蛋白酶活力，为酿造优质的黄酒奠定了基础。
【IPC分类】C12Q1/37
【公开号】CN104988210
【申请号】CN201510354151
【发明人】张苏敏, 张新华, 何绍木, 鲁志康
【申请人】绍兴文理学院
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年6月25日