清液B3中；
[0080] 步骤13、将步骤12接种后的上清液B3放入摇床28°C、200rpm震荡培养48小时； 培养完成后静置60min，弃掉30ml上清液，取沉淀5ml接种到上清液B2中继续培养；
[0081] 步骤14、将步骤13接种后的上清液B2放入摇床28°C、200rpm震荡培养48小时； 培养完成后静置60min，弃掉30ml上清液，取沉淀5ml接种到上清液B1中继续培养；
[0082] 步骤15、将步骤14接种后的上清液B1放入摇床28°C、200rpm震荡培养48小时； 培养完成后静置60min，弃掉30ml上清液，当样品经过上清液B1驯化培养后，取沉淀lml， 接种到第3富集管16中，将第3富集管16的管盖拧紧，平放入摇床35°C、200rpm震荡培养 24小时；培养后向第3富集管中加入4ml无菌甘油，混匀后分装到冻存管后冻存，此驯化后 菌种为好氧驯化菌种。
[0083] 经过驯化的菌种通过以下实验进行驯化效果对比：
[0084] 污水来源为内蒙古一煤制油企业调节池出水，C0D为3948mg/L。各取污水40ml分 装入2个50ml无菌螺口管中待用。待验证样品为经过驯化的菌种和未经驯化的菌种。验 证方法为：1、缺氧效果验证：将未经驯化的菌种和经过缺氧驯化的菌种按2%的接种量分 别接种到装有污水的螺口管中，平放入摇床28°C、lOOrpm震荡培养，每天测一次C0D，连续 观察5天。2、好氧效果验证：将以上经过缺氧验证的污水分别转入2个灭过菌的三角瓶中， 将未经驯化的菌种和经过好氧驯化的菌种按2%的接种量分别接种到2个三角瓶中，放入 摇床28°C、200rpm震荡培养，每天测一次C0D，连续观察5天。观察结果如下。
[0085] 表1:驯化前后菌种效果对比
[0086]
[0087] 通过对比试验可以看出，经过试剂盒驯化的菌种具有更快的启动速度和更好的降 解效率。
[0088] 实施例2:
[0089] 实施例2所用试剂盒配方及制备方法如下：
[0090] -、富集管：
[0091] 富集管的制备：
[0092] 1、取牛肉膏0. 7g，蛋白胨0. 7g，磷酸二氢钾1. 2g，磷酸氢二钠1. 5g，用1L水溶解， 以上培养基用浓度5%的碳酸钠和5%HC1调pH至7. 50,分装到50ml螺口管中，每支管加 入培养基20ml;分装完毕后，将螺口管盖拧松，115°C灭菌30min，待灭菌结束并冷却至室温 后，从灭菌锅中取出并拧紧管盖，至此基础富集管制备完成；
[0093] 2、取苯酸10mg，萘酸2mg，喹啉lmg，甲醇0? 08ml，丁醇0? 08ml，用100ml无菌水溶 解，溶解后在无菌条件下用〇. 22ym无菌滤膜过滤除菌；过滤除菌完成后，取2ml经过过滤 除菌的溶液，0. 3y1煤制柴油，在无菌条件下加入到步骤1中的基础富集管中，在高速漩涡 震荡器上震荡lOmin，至此富集管制备完成；
[0094] 二、驯化预制管A:
[0095] 驯化预制管A的制备：
[0096] 1、取牛肉膏0. 4g，蛋白胨0. 4g，丙三醇0. 4ml，磷酸二氢钾1. 2g，磷酸氢二钠1. 5g， 用1L水溶解，以上培养基用浓度5%的碳酸钠和5%HC1调pH至8. 00,分装到50ml螺口管 中，每支管加入培养基30ml;分装完毕后，将螺口管盖拧松，115 °C灭菌30min，待灭菌结束 并冷却至室温后，从灭菌锅中取出并拧紧管盖，至此基础驯化预制管A制备完成；
[0097] 2、取苯酸18mg，萘酸8mg，喹啉4mg，苯胺4mg，P比啶0. 4mg，辛基十二烧醇0.lmg，用 100ml无菌水溶解，溶解后在无菌条件下用0. 22ym无菌滤膜过滤除菌，过滤除菌后的溶液 为水添加物A;
[0098] 3、取萘130mg，甲苯3mg，邻苯二甲酸二丁酯2mg，苯并咪唑2mg，甲醇0. 08ml，丁醇 0. 08ml，用100ml75 %乙醇溶解，此溶液为醇添加物A;
[0099] 4、分别取水添加物A3ml，醇添加物A0.012ml，煤制柴油1.2yl，在无菌条件下 装到步骤1中的基础驯化预制管A中，在高速漩涡震荡器上震荡lOmin，至此驯化预制管A 制备完成；
[0100] 三、驯化预制管B:
[0101] 驯化预制管B的制备：
[0102] 1、取牛肉膏0. 2g，蛋白胨0. 2g，丙三醇0. 6ml，磷酸二氢钾1. 2g，磷酸氢二钠1. 5g， 用1L水溶解，以上培养基用浓度5%的碳酸钠和5%HC1调pH至8. 00,分装到50ml螺口管 中，每支管加入培养基30ml;分装完毕后，将螺口管盖拧松，115 °C灭菌30min，待灭菌结束 并冷却至室温后，从灭菌锅中取出并拧紧管盖，至此基础驯化预制管B制备完成；
[0103] 2、取苯酸150mg，萘酸18mg，喹啉9mg，苯胺10mg，吡啶0? 9mg，辛基十二烧醇 0. 4mg，用100ml无菌水溶解，溶解后在无菌条件下用0. 22ym无菌滤膜过滤除菌，过滤除菌 后的溶液为水添加物B;
[0104] 3、取萘540mg，甲苯18mg，邻苯二甲酸二丁酯8mg，苯并咪唑8mg，甲醇1. 8ml，丁醇 1. 8ml，用100ml75%乙醇溶解，此溶液为醇添加物B;
[0105] 4、分别取水添加物B3ml，醇添加物B0.012ml，煤制柴油4.0yl，在无菌条件下 装到步骤1中的基础驯化预制管B中，在高速漩涡震荡器上震荡lOmin，至此驯化预制管B 制备完成。
[0106] 采用本试剂盒对菌种进行驯化的方法见图1。其中样品来源为本实验室从山东一 化工工业园区污水处理厂采集的活性污泥样品。详细方法如下：
[0107] -、缺氧阶段驯化：
[0108] 步骤1、将待驯化样品1取3ml接种到第1富集管2中，将第1富集管2的管盖拧 紧，平放入摇床28°C、150rpm震荡培养48小时；
[0109]步骤2、取经步骤1的第1富集管2培养的样品5ml，接种到第1驯化预制管A3中， 将第1富集管2连同管内剩余样品放入4°C冷藏；
[0110]步骤3、将步骤2的第1驯化预制管A3的管盖拧紧，平放入摇床25°C、lOOrpm震荡 培养48小时；培养完成后静置30min，取上清液30ml放入100ml经过灭菌的第1三角瓶9 中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接种到第2驯化预制管A4中继续培养；
[0111]步骤4、将步骤3的第2驯化预制管A4的管盖拧紧，平放入摇床25°C、lOOrpm震 荡培养48小时；培养完成后静置30min，取上清液30ml放入100ml经过灭菌的第2三角瓶 10中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接种到第3驯化预制管A5中继续培养；
[0112] 步骤5、将步骤4的第3驯化预制管A5的管盖拧紧，平放入摇床25°C、lOOrpm震荡 培养48小时；培养完成后静置30min，取上清液30ml放入100ml经过灭菌的第3三角瓶11 中，然后放入4°C留存；当样品经过第3驯化预制管A5培养后，取沉淀5ml，接种到第1驯化 预制管B6中；
[0113]步骤6、将步骤5的第1驯化预制管B6的管盖拧紧，平放入摇床25°C、lOOrpm震荡 培养72h;培养完成后静置30min，取上清液30ml放入100ml经过灭菌的第4三角瓶12中， 然后放入4°C留存；取沉淀5ml接种到第2驯化预制管B7中继续培养；
[0114] 步骤7、将步骤6的第2驯化预制管B7的管盖拧紧，平放入摇床25°C、lOOrpm震荡 培养72h;培养完成后静置30min，取上清液30ml放入100ml经过灭菌的第5三角瓶13中， 然后放入4°C留存；取沉淀5ml接种到第3驯化预制管B8中继续培养；
[0115]步骤8、将步骤7的第3驯化预制管B8的管盖拧紧，平放入摇床25°C、lOOrpm震荡 培养72h;培养完成后静置30min，取上清液30ml放入100ml经过灭菌的第6三角瓶14中， 然后放入4°C留存；当样品经过第3驯化预制管B8培养后，取沉淀lml，接种到第2富集管 15中，将第2富集管15的管盖拧紧，平放入摇床28°C、150rpm震荡培养48小时；培养后将 第2富集管15放入4°C保存，此驯化后菌种为缺氧驯化菌种；
[0116] 二、好氧阶段驯化：
[0117] 步骤9、当样品经过步骤5的第3驯化预制管A5培养完成后，将冷藏的第1富集管 2取出并恢复室温；待恢复室温1Oh后，取5ml接种到上清液A3中；
[0118]步骤10、将步骤9接种后的上清液A3入摇床25°C、150rpm震荡培养48小时；培 养完成后静置30min，弃掉30ml上清液，取沉淀5ml接种到上清液A2中继续培养；
[0119]步骤11、将步骤10接种后的上清液A2入摇床25°C、150rpm震荡培养48小时；培 养完成后静置30min，弃掉30ml上清液，取沉淀5ml接种到上清液A1中继续培养；
[0120]步骤12、将步骤11接种后的上清液A1入摇床25°C、150rpm震荡培养48小时；培 养完成后静置30min，弃掉30ml上清液，当样品经过上清液A1驯化培养后，取沉淀5ml，接 种到上清液B3中；
[0121] 步骤13、将步骤12接种后的上清液B3放入摇床25°C、150rpm震荡培养72小时； 培养完成后静置30min，弃掉30ml上清液，取沉淀5ml接种到上清液B2中继续培养；
[0122] 步骤14、将步骤13接种后的上清液B2放入摇床25°C、150rpm震荡培养72小时； 培养完成后静置30min，弃掉30ml上清液，取沉淀5ml接种到上清液B1中继续培养；
[0123]步骤15、将步骤14接种后的上清液B1放入摇床25°C、150rpm震荡培养72小时； 培养完成后静置30min，弃掉30ml上清液，当样品经过上清液B1驯化培养后，取沉淀lml， 接种到第3富集管16中，将第3富集管16的管盖拧紧，平放入摇床28°C、150rpm震荡培养 48小时；培养后将第3富集管16放入4°C保存，此驯化后菌种为好氧驯化菌种。
[0124] 经过驯化的菌种通过以下实验进行驯化效果对比：
[0125] 污水来源为内蒙古一煤制油企业调节池出水，C0D为3782mg/L。各取污水40ml分 装入2个50ml无菌螺口管中待用。待