煤制油废水cod降解用菌种驯化试剂盒及驯化方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于一种菌种驯化试剂盒及驯化方法，特别涉及一种用于降解煤制油废水 C0D用菌种的驯化试剂盒及驯化方法。
【背景技术】：
[0002] 煤制油是以煤炭为原料，通过化学加工过程生产油品和石油化工产品的一项技 术，包含煤直接液化和煤间接液化两种技术路线。我国煤贮量占世界总贮量的36%，占我国 能源总量的70%以上，因此在我国，煤制油是燃料化工的主导。
[0003] 煤制油生产过程中产生的含油废水的特点是：多环芳烃和苯系物及其衍生物、酚、 硫等有毒物质浓度高，可生化性差，是一种比较难处理的废水。综合废水中C0D根据污水处 理工艺不同一般在1000-5000mg/L左右。含油废水的危害主要表现在：油类物质形成的薄 膜漂浮在水面上，空气中的氧就不能溶解于水中，水中的溶解氧就会减少，致使水体中浮游 生物等因缺氧而死亡，水生植物的光合作用也受到限制，从而水体的自净作用将会受到影 响，水质也会变臭，水资源的利用价值也会遭到破坏，而且油中一些低沸点芳香烃化合物的 存在会导致人类癌症的发生，从而影响人体健康。
[0004] 目前国内处理煤制油废水的主要工艺路线基本遵行"预处理+生化处理+深度处 理"，其中生化处理是污水处理工艺的重要阶段。通过对国内多个煤制油企业的实地走访， 目前对于预处理后的煤制油废水，一般采用缺氧、好氧生物法处理（A/0工艺）。微生物是废 水生物处理过程的核心，制约着污水处理的效果。在污水厂启动初期或运行受到冲击需要 重新恢复运行时，国内普遍采用的方法是向污水处理设施中投加污泥和营养物质，或者投 加市场上现有的专用微生物菌剂，达到污水处理设施正常运行的目的。对于煤制油废水的 处理，投加污泥和菌剂的效果受到以下几方面问题的制约：一、煤制油废水中含有多种对微 生物有毒害作用的物质，投加到污水中的污泥或菌种中的部分微生物容易被废水中的毒性 物质所抑制，为解决此问题往往需要对污泥或菌种在投加前进行长时间的驯化；二、煤制油 废水中有大量油类等难降解有机物，这些物质很难被微生物利用并降解，解决这个问题通 常需要工艺的合理设计与污泥或菌剂的驯化共同解决；三、与普通污水相比，煤制油废水处 理设施的启动时间更长，需要更长时间的驯化。
【发明内容】
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[0005] 本发明的目的在于解决以上问题，提供一种菌种驯化试剂盒及驯化方法，经本试 剂盒驯化后的菌种投放到煤制油废水中，可以大大缩短污水处理启动时间，提高C0D降解 效率。该驯化培养基具有较广的适用性，通过其驯化后的菌种投入到多个煤制油污水样品 后，其C0D降解能力均有所提高。该试剂盒可以模拟缺氧、好氧生物法工艺，可以应用于煤 制油污水处理菌剂的产品优化，以及污水厂在运行前对污泥进行快速驯化。
[0006] 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种煤制油废水C0D降解用菌种驯化 试剂盒，其特征在于：它是由富集管、驯化预制管A、驯化预制管B组成；其中：
[0007]( -）、富集管：
[0008] 富集管的制备：
[0009] (1)、取牛肉膏0? 7-1. 0g，蛋白胨0? 7-1. 0g，磷酸二氢钾1. 2-2. 0g，磷酸氢二钠 1. 5-2. 5g，用1L水溶解，以上培养基用浓度5%的碳酸钠和5 %HC1调pH至7. 00-7. 50， 分装到50ml螺口管中，每支管加入培养基20ml;分装完毕后，将螺口管盖拧松，115°C灭菌 25-30min，待灭菌结束并冷却至室温后，从灭菌锅中取出并拧紧管盖，至此基础富集管制备 完成；
[0010](2)、取苯酚 10-13mg，萘酚 2-4mg，喹啉l-2mg，甲醇 0? 08-0. 12ml，丁醇 0. 08-0. 12ml，用100ml无菌水溶解，溶解后在无菌条件下用0. 22ym无菌滤膜过滤除菌；过 滤除菌完成后，取2ml经过过滤除菌的溶液，0. 2-0. 3y1煤制柴油，在无菌条件下加入到步 骤（1)中的基础富集管中，在高速漩涡震荡器上震荡5-10min，至此富集管制备完成；
[0011] (二）、驯化预制管A:
[0012] 驯化预制管A的制备：
[0013](1)、取牛肉膏0. 4-0. 7g，蛋白胨0. 4-0. 7g，丙三醇0. 4-0.6ml，磷酸二氢钾 1. 2-2. 0g，磷酸氢二钠1. 5-2. 5g，用1L水溶解，以上培养基用浓度5 %的碳酸钠和5 %HC1 调pH至7. 50-8. 00，分装到50ml螺口管中，每支管加入培养基30ml;分装完毕后，将螺口管 盖拧松，115°C灭菌25-30min，待灭菌结束并冷却至室温后，从灭菌锅中取出并拧紧管盖，至 此基础驯化预制管A制备完成；
[0014](2)、取苯酸 18_22mg，萘酸 8_12mg，喹啉 4_6mg，苯胺 4_6mg，P比啶 0? 4-0. 6mg，辛基 十二烧醇0.卜〇. 2mg，用100ml无菌水溶解，溶解后在无菌条件下用0. 22ym无菌滤膜过滤 除菌，过滤除菌后的溶液为水添加物A;
[0015] (3)、取萘130_170mg，甲苯3_7mg，邻苯二甲酸二丁酯2_3mg，苯并咪唑2_3mg，甲醇 0. 08-0. 12ml，丁醇0. 08-0. 12ml，用100ml75 %乙醇溶解，此溶液为醇添加物A;
[0016] (4)、分别取水添加物A3ml，醇添加物A0.012ml，煤制柴油1.0-1.2yl，在无菌 条件下装到步骤（1)中的基础驯化预制管A中，在高速漩涡震荡器上震荡5-10min，至此驯 化预制管A制备完成；
[0017](三）、驯化预制管B:
[0018] 驯化预制管B的制备：
[0019](1)、取牛肉膏0. 2-0. 4g，蛋白胨0. 2-0. 4g，丙三醇0. 6-0. 8ml，磷酸二氢钾 1. 2-2. 0g，磷酸氢二钠1. 5-2. 5g，用1L水溶解，以上培养基用浓度5 %的碳酸钠和5 %HC1 调pH至7. 50-8. 00，分装到50ml螺口管中，每支管加入培养基30ml;分装完毕后，将螺口管 盖拧松，115°C灭菌25-30min，待灭菌结束并冷却至室温后，从灭菌锅中取出并拧紧管盖，至 此基础驯化预制管B制备完成；
[0020](2)、取苯酚 150-170mg，萘酚 18-22mg，喹啉 9-12mg，苯胺 10-12mg，吡啶 0. 9-1. 2mg，辛基十二烧醇0. 4-0. 6mg，用100ml无菌水溶解，溶解后在无菌条件下用 0. 22ym无菌滤膜过滤除菌，过滤除菌后的溶液为水添加物B;
[0021] (3)、取萘 540_560mg，甲苯 18_22mg，邻苯二甲酸二丁酯 8_12mg，苯并咪唑 8_12mg， 甲醇1. 8-2. 2ml，丁醇1. 8-2. 2ml，用100ml75%乙醇溶解，此溶液为醇添加物B;
[0022] (4)、分别取水添加物B3ml，醇添加物B0.012ml，煤制柴油3. 0-4.0yl，在无菌 条件下装到步骤（1)中的基础驯化预制管B中，在高速漩涡震荡器上震荡5-10min，至此驯 化预制管B制备完成。
[0023] -种采用煤制油废水C0D降解用菌种驯化试剂盒驯化方法，其特征在于：包括以 下步骤：
[0024](一）、缺氧阶段驯化：
[0025] 步骤1、将待驯化样品取l_3ml接种到第1富集管中，将第1富集管的管盖拧紧，平 放入摇床28-35°C、150-200rpm震荡培养24-48小时；
[0026] 步骤2、取经第1富集管培养的样品5ml，接种到第1驯化预制管A中，将第1富集 管连同管内剩余样品放入4°C冷藏；
[0027] 步骤3、将第1驯化预制管A的管盖拧紧，平放入摇床25_30°C、100_150rpm震荡 培养24-48小时；培养完成后静置30-60min，取上清液A1 30ml放入100ml经过灭菌的第1 三角瓶中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接种到第2驯化预制管A中继续培养；
[0028] 步骤4、将第2驯化预制管A的管盖拧紧，平放入摇床25_30°C、100_150rpm震荡 培养24-48小时；培养完成后静置30-60min，取上清液A2 30ml放入100ml经过灭菌的第2 三角瓶中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接种到第3驯化预制管A中继续培养；
[0029] 步骤5、将第3驯化预制管A的管盖拧紧，平放入摇床25_30°C、100_150rpm震荡 培养24-48小时；培养完成后静置30-60min，取上清液A3 30ml放入100ml经过灭菌的第3 三角瓶中，然后放入4°C留存；当样品经过步骤4的第3驯化预制管A培养后，取沉淀5ml， 接种到第1驯化预制管B中；
[0030] 步骤6、将步骤5的第1驯化预制管B的管盖拧紧，平放入摇床25-28 °C、 100-150rpm震荡培养48-72h;培养完成后静置30-60min，取上清液B1 30ml放入100ml经 过灭菌的第4三角瓶中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接种到第2驯化预制管B中继续培 养；
[0031] 步骤7、将步骤6的第2驯化预制管B的管盖拧紧，平放入摇床25-28 °C、 100-150rpm震荡培养48-72h;培养完成后静置30-60min，取上清液B2 30ml放入100ml经 过灭菌的第5三角瓶中，然后放入4°C留存；取沉淀5ml接种到第3驯化预制管B中继续培 养；
[0032]步骤8、将步骤7的第3驯化预制管B的管盖拧紧，平放入摇床25-28°C、 100-150rpm震荡培养48-72h;培养完成后静置30-60min，取上清液B3 30ml放入100ml 经过灭菌的第6三角瓶中，然后放入4°C留存；当样品经过步骤7的第3驯化预制管B培 养后，取沉淀lml，接种到第2富集管中，将第2富集管的管盖拧紧，平放入摇床28-35°C、 150-200rpm震荡培养24-48小时；培养后将第2富集管冷藏或冷冻保存，此驯化后菌种为 缺氧驯化菌种；
[0033](二）、好氧阶段驯化：
[0034] 步骤9、当样品经过步骤5的第3驯化预制管A培养完成后，将冷藏的第1富集管 取出并恢复室温；待恢复室温6-1Oh后，取5ml接种到上清液A3中；
[0035] 步骤10、将步骤9接种后的上清液A3放入摇床25-28°C、150-200rpm震荡培养 24-48小时；培养