一种抗氧化竹叶多糖的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物活性物提取技术领域，具体涉及一种抗氧化竹叶多糖的提取方法。
【背景技术】
[0002]植物多糖是由一种或多种单糖以α -或β -糖苷键连接而成的化合物，包括纤维素、半纤维素、低聚糖以及果胶等。其中，低聚糖具有很高的生物活性以及药用价值，可被广泛应用于医药和食品行业。以低聚糖代替传统合成抗氧化药物，既可高效清除人体自由基，又很好的避免了合成的抗氧化药物对人体产生危害。此外，提取的植物多糖中还含有许多多酚、黄酮成分，这些成分使多糖具有更广泛的生物活性，如抗癌、抗菌、抗病毒、抗凝血以及提高人体免疫力等。
[0003]随着人们健康意识的提高，植物多糖的提取受到广泛关注。目前主要的提取方法有:水热法、碱抽提法、超临界流体萃取法等，以及这些方法与微波、超声波等结合构成的新抽提法。其中水热提取被认为是最经济、绿色的提取方法，且得到的多糖不会被其它化学药物污染。但水热抽提往往多糖得率低，且需要较高的提取温度和较长的提取时间，易造成多糖失活。而微波加热以升温速度快，分子运动剧烈著称。因此微波/水热法提取植物多糖，可大大降低提取温度，缩短提取时间，增加多糖得率，是一种很有前景的方法。
[0004]目前，植物多糖的提取大多以蘑菇、茶叶、中草药为原料，成本较高。而竹叶作为农林废弃物之一，成本低廉，且高效的利用竹叶还可以解决竹叶废弃物燃烧处理带来的环境问题。此外，竹叶在我国有很悠久的药用历史，具有清热除烦，生津利尿的功效。因此，高效开发利用竹叶资源具有很高的经济价值以及环境效益，并可以推动我国农林废弃物高值化利用的进程。
【发明内容】
[0005]为了解决以上现有技术的缺点和不足之处，本发明的目的在于提供一种抗氧化竹叶多糖的提取方法。
[0006]本发明目的通过以下技术方案实现:
[0007]—种抗氧化竹叶多糖的提取方法，包括以下操作步骤:
[0008]将竹叶粉置于容器中，加水分散，在60?90°C温度下微波反应20?60min，趁热过滤，滤液浓缩，向浓缩后的滤液中加入无水乙醇，静置沉淀，沉淀物分离后冷冻干燥，得到抗氧化竹叶多糖。
[0009]优选地，所述的竹叶粉是指毛竹竹叶粉。
[0010]优选地，所述的加水分散是指用15?20倍竹叶粉质量的水进行分散。
[0011]优选地，所述微波反应的功率为800?1000W。
[0012]优选地，所述的滤液浓缩是指浓缩至滤液体积的1/3?1/2。
[0013]优选地，所述无水乙醇的加入量为浓缩后的滤液体积的3?4倍。
[0014]优选地，所述静置沉淀的温度为4?5°C。
[0015]优选地，所述冷冻干燥的温度为-80?-100°C，时间为36?48h。
[0016]优选地，所述沉淀物分离的方式包括离心或过滤。
[0017]本发明方法具有如下优点及有益效果:
[0018](I)本发明所用的原料为农林废弃物，实现了废物的高效利用；
[0019](2)本发明使用的提取溶剂为水，成本低廉、无污染；
[0020](3)本发明利用微波加热方式，较之于传统加热方式，提取效率高，提取温度低，提取时间短，多糖活性高；
[0021](4)本发明的提取工艺简单，成本低廉，无污染，产物附加值高，工业化前景好。
【附图说明】
[0022]图1为实施例5得到的抗氧化竹叶多糖的细胞抑制率结果图；
[0023]图2为实施例1?12在不同微波反应温度和时间下，多糖得率的对比图。
【具体实施方式】
[0024]下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0025]实施例1
[0026](I)将20g(绝干)毛竹竹叶粉末置于500mL三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入300mL水，于微波反应器中60°C处理20min，微波功率800w ；
[0027](2)将步骤(I)中所得液体趁热过滤，滤液旋转蒸发至约10mL ;
[0028](3)向步骤⑵所得浓缩液中加入300mL乙醇，于4°C下静置过夜；
[0029](4)离心处理步骤(3)所得悬浮液，固体物质于-80°C下冷冻干燥48h，得到抗氧化竹叶多糖。
[0030]本实施例得到的抗氧化竹叶多糖用酸水解结合离子色谱进行单糖含量测定、利用福林酚法进行多酚含量测定、利用DPPH以及FRAP法进行抗氧化性检测。
[0031]经测定，本实施例的多糖得率为2.18% ;主要化学组成及含量为:甘露糖(1.50 % )、岩藻糖(1.06 % )、木糖(6.50 % )、葡萄糖(21.50 % )、半乳糖(33.25 % ) JnJ拉伯糖(34.50% )、多酚(1.43% ) ;DPPH抗氧化性结果为:IC5。为2.73mg/mL、多糖浓度为10mg/mL时自由基清除率为85.37%；FRAP抗氧化性结果为:多糖浓度为5mg/mL时FRAP值为 0.99mmol/L0
[0032]实施例2
[0033](I)将20g(绝干)毛竹竹叶粉末置于500mL三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入300mL水，于微波反应器中60°C处理40min，微波功率800w ；
[0034](2)将步骤(I)中所得液体趁热过滤，滤液旋转蒸发至约10mL ;
[0035](3)向步骤⑵所得浓缩液中加入300mL乙醇，于4°C下静置过夜；
[0036](4)离心处理步骤(3)所得悬浮液，固体物质于-80°C下冷冻干燥48h，得到抗氧化竹叶多糖。
[0037]本实施例得到的抗氧化竹叶多糖用酸水解结合离子色谱进行单糖含量测定、利用福林酚法进行多酚含量测定、利用DPPH以及FRAP法进行抗氧化性检测。
[0038]经测定，本实施例的多糖得率为2.27% ;主要化学组成及含量为:甘露糖(1.14% )、岩藻糖(1.15% )、木糖(5.00% )、葡萄糖(21.50% )、半乳糖(20.59 % ) JnJ拉伯糖(48.58% )、多酚(1.51% ) ;DPPH抗氧化性结果为:IC5。为2.10mg/mL、多糖浓度为10mg/mL时自由基清除率为88.51 % ；FRAP抗氧化性结果为:多糖浓度为5mg/mL时FRAP值为 1.1 5mmoI /L
[0039]实施例3
[0040](I)将20g(绝干)毛竹竹叶粉末置于500mL三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入300mL水，于微波反应器中60°C处理60min，微波功率800w ；
[0041](2)将步骤⑴中所得液体趁热过滤，滤液旋转蒸发至约10mL ;
[0042](3)向步骤(2)所得浓缩液中加入300mL乙醇，于4°C下静置过夜；
[0043](4)离心处理步骤(3)所得悬浮液，固体物质于-80°C下冷冻干燥48h，得到抗氧化竹叶多糖。
[0044]本实施例得到的抗氧化竹叶多糖用酸水解结合离子色谱进行单糖含量测定、利用福林酚法进行多酚含量测定、利用DPPH以及FRAP法进行抗氧化性检测。
[0045]经测定，本实施例的多糖得率为2.38% ;主要化学组成及含量为:甘露糖(1.45 % )、岩藻糖(0.94 % )、木糖(8.21 % )、葡萄糖(23.51% )、半乳糖(32.21 % )、阿拉伯糖(34.62% )、多酚(1.50% ) ;DPPH抗氧化性结果为:IC5。为1.95mg/mL、多糖浓度为10mg/mL时自由基清除率为88.51 % ；FRAP抗氧化性结果为:多糖浓度为5mg/mL时FRAP值为 1.63mmol/L。
[0046]实施例4
[0047](I)将20g(绝干)毛竹竹叶粉末置于500mL三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入300mL水，于微波反应器中70°C处理20min，微波功率800w ；
[0048](2)将步骤(I)中所得液体趁热过滤，滤液旋转蒸发至约10mL ;
[0049](3)向步骤(2)所得浓缩液中加入300mL乙醇，于4°C下静置过夜；
[0050](4)离心处理步骤(3)所得悬浮液，固体物质于-80°C下冷冻干燥48h，得到抗氧化竹叶多糖。
[0051]本实施例得到的抗氧化竹叶多糖用酸水解结合离子色谱进行单糖含量测定、利用福林酚法进行多酚含量测定、利用DPPH以及FRAP法进行抗氧化性检测。
[0052]经测定，本实施例的多糖得率为2.24% ;主要化学组成及含量为:甘露糖(1.20 % )、岩藻糖(1.18 % )、木糖(6.87 % )、葡萄糖(20.45 % )、半乳糖(34.02 % ) JnJ拉伯糖(37.46% )、多酚(1.28% ) ;DPPH抗氧化性结果为:IC5。为2.41mg/mL、多糖浓度为10mg/mL时自由基清除率为84.66%；FRAP抗氧化性结果为:多糖浓度为5mg/mL时FRAP值为 0.76mmol/L0
[0053]实施例5
[0054](I)将20g(绝干)毛竹竹叶粉末置于500mL三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入300mL水，于微波反应器中70°C处理40min，微波功率800w ；
[0055](2)将步骤(I)中所得液体趁热过滤，滤液旋转蒸发至约10mL ;
[0056](3)向步骤(2)所得浓缩液中加入300mL乙醇，于4°C下静置过夜；
[0057](4)离心处理步骤(3)所得悬浮液，固体物质于-80°C下冷冻干燥48h，得到抗氧化竹叶多糖。
[0058]本实施例得到的抗氧化竹叶多糖用酸水解结合离子色谱进行单糖含量测定、利用福林酚法进行多酚含量测定、利用DPPH以及FRAP法进行抗氧化性检测、利用MTS法进行细胞毒性试验。
[0059]经测定，本实施例的多糖得率为2.98% ;主要化学组成及含量为:甘露糖(1.17% )、岩藻糖(1.20% )、木糖(5.11% )、葡萄糖(21.41% )、半乳糖(20.77 % ) JnJ拉伯糖(49.78% )、多酚(2.48% ) ;DPPH抗氧化性结果为:IC5。为1.09mg/mL、多糖浓度为10mg/mL时自由基清除率为87.47%；FRAP抗氧化性结果为:多糖浓度为5mg/mL时FRAP值为 1.81mmoI /L 以多糖浓度分别为 0.01mg/mL、0.05mg/mL、0.lmg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL以及1.0mg/mL处理H印G2细胞，其在12h和24h的细胞抑制率结果如图1所示。由图1可以看出:当多糖浓度在0.0l?0.5mg/mL时，HepG2细胞增长率随多糖浓度增加而增加；具体来讲，多糖浓度为0.0lmg/mL时，细胞增长率约为5?10% ;多糖浓度为0.5mg/mL时，细胞增长率高达25?27% ;然而，当细胞浓度在1.0mg/mL时，细胞增长率降为4?5%。
[0060]实施例6
[0061](I)将20g(绝干)毛竹竹叶粉末置于500mL三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入300mL水，于微波反应器中70°C处理60min，微波功率800w ；
[0062](2)将步骤(I)中所得液体趁热过滤，滤液旋转蒸发至约10mL ;
[0063](3)向步骤⑵所得浓缩液中加入300mL乙醇，于4°C下静置过夜；
[0064](4)离心处理步骤(3)所得悬浮液，固体物质于-80°C下冷冻干燥48h，得