专利名称：箬叶多糖的提取方法
技术领域：
本发明涉及天然产物化学，特别是涉及从箬叶中提取箬叶多糖或箬叶硒多糖的方法。
背景技术：
箬叶是禾本科植物箬竹(Indocalamus tesselatus)的叶。箬叶具有清热止血、解毒消肿、利尿抗癌等功效。《本草纲目》记载箬叶“甘，寒，无毒”，“治男女吐血、呕血、咯血、下血.又通小便，利肺气，喉痹，消痈肿”。日本民间亦用竹(Sasa albomarginata)叶作汉方药，药理实验表明，竹叶多糖提取液具有良好的抗肿瘤、抗炎症、抗溃疡等作用[Kuboyama N，Fuji A，TamuraT.Antitumor activities of bamboo leaf extracts(BLE)and its lignin(BLL).FoliaPharmacol Japan，1981，77(3)579-596；Shibata M，Yamatake Y，Sakamoto M，et al.Pharmacological studies on bamboo grass(1)acute toxicities，anti-inflammatory and antiulcerogenic activities of water-soluble fraction(Folin)extracted from Sasa albomarginat Makino et Shibata.Folia Pharmacol Japan，1975，71(3)481-490]。
近年来，我国学者对鄂西恩施地区野生叶箬叶进行了一定的研究。主要在箬叶多糖的组成、结构和性质方面[陈春英，丁玉强.碱液提取箬叶多糖的纯化及其结构性质的研究.生物化学与生物物理进展，1999，26(1)51-55；陈春英，丁玉强.箬叶多糖的分离纯化及其理化性质的研究.中国生物化学与分子生物学报，1998，14(4)422-426；丁玉强，陈春英.箬叶水溶性多糖的色谱研究.色谱，1996，14(6)470-472]，从鄂西恩施地区野生箬叶中提取了多种多糖成分。在药理研究方面，证明箬叶多糖及其衍生物具有抗艾滋病毒的作用[蒋岩，陈春英.硫酸酯化箬叶多糖抗HIV-1机制的初步研究.中华实验和临床病毒学杂志，2000，14(1)56-59；陈春英，蒋岩.箬叶多糖及其衍生物对小鼠艾滋病作用的研究.中国药理学通报，1999，15(4)336-340；陈春英，蒋岩.硫酸酯化箬叶多糖的结构修饰及其抗艾滋病病毒活性.药学学报，1998，33(4)264-268]；箬叶多糖对四氯化碳致小鼠肝损伤也有抑制作用[陈春英，丁玉强，等.箬叶多糖对小鼠实验性四氯化碳致肝损伤的作用.中国药理学与毒理学杂志，1996，10(3)；237-238]。另外对箬叶多糖及其衍生物的热化学也进行了研究[颜承农，陈春英.硒和箬叶多糖对细菌生长代谢作用热化学特征研究.化学学报，1998，56(9)833-839；颜承农，陈春英.硒的热化学研究.武汉大学学报自科版，1997，43(4)471-474；颜承农，刘义等.箬叶多糖和硫多糖对细菌生长代谢作用的热化学探讨.荆州师范学院学报，1997，20(5)58-61]。由于箬叶多糖及其衍生物具有抗肿瘤、抗炎症、抗溃疡、抗病毒尤其具有抗艾滋病毒的作用，因此对箬叶多糖的制备和应用具有重要意义。
硒是人和动物体内必需的微量元素，体内不能自行合成，必须由外界供给才能满足正常代谢需要，我国绝大部分地区缺硒。箬叶多糖具有上述多种生理活性，将硒和箬叶多糖有机的结合在一起的箬叶硒多糖，不仅具有箬叶多糖的生理活性，而且具有硒的生理活性。实验证明，在含硒地区生长的箬叶中提取的箬叶多糖含有硒元素。因此对箬叶硒多糖的制备和应用更具有重要意义。
现有从箬叶中提取的箬叶多糖通常有下面一些方法(1)将箬叶加入水或醇水混合液提取、澄清、或浓缩、或干燥、或加入辅料等工艺制成口服液、片剂、颗粒剂或胶囊剂(CN 1324652)。但这种方法提取不完全，提取效率低，为粗提物，且通常提取温度较高、提取时间长，容易导致具有活性的多糖成分因长时间受热破坏损失；(2)将箬叶依次通过0.9％NaCl水溶液，85％乙醇，95℃热水，1％草酸铵水溶液，5％NaOH水溶液(含0.05％NaBH4，N2保护)及20％NaOH水溶液(含0.05％NaBH4，N2保护)逐级提取，得到6种多糖粗提取液，其中由5％和20％NaOH处理的提取液经醋酸中和沉淀得两种多糖和两种上清液多糖，经冷冻干燥得粗多糖。8种粗多糖经过H2O2法脱色，然后用稀HCl中和至pH＝7.用Savag法除蛋白质5次以后，浓缩至小体积，用乙醇沉淀多糖，将多糖溶于适量蒸馏水，置于透析袋中，用自来水透析3d，蒸馏水透析1d，浓缩，冷冻干燥得多糖各组分(陈春英，丁玉强.箬叶多糖的分离纯化及其理化性质的研究。中国生物化学与分子生物学报，1998，14(4)422-426)。这种方法适合实验室研究，不适合工业化生产。
发明内容
鉴于现有技术中存在的上述问题，本发明的目的是提供种在较低温度下，提取率较高，适合工业化生产的提取较纯箬叶多糖或箬叶硒多糖的方法。
本发明的技术方案是取箬叶(或含硒箬叶)，破碎，脱脂或不脱脂处理后，加多倍量的水，调PH值2-11，加入纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)，在0℃-80℃下酶促反应5h，调PH值至中性，煮沸10分钟，滤出提取液。再在滤渣中加多倍量的水，调PH值2-11，加入纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)，在0℃-80℃下酶促反应5h，调PH值至中性，煮沸10分钟，滤出提取液，如此提取滤渣共2次。合并三次提取液，浓缩至加水总量的1/5-1/6体积，离心分离除去沉淀，得到澄清液。澄清液加入相当于总体积分数为70％的酒精，沉淀24h以上，离心分出多糖沉淀，丙酮脱水，真空干燥即得箬叶多糖(或箬叶硒多糖)。
在本发明中采用加入蛋白酶酶促反应除蛋白，具体方法是蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取时与纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)一同加入、或在提取液中加入、或在三次提取液合并后的浓缩液中加入，无论在哪一工序加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，均需在PH值为2-11，温度为0℃-80℃下酶促反应。
权利要求
1.一种从箬叶中提取箬叶多糖或箬叶硒多糖的方法，其技术特征在于箬叶(或含硒箬叶)在PH值为2-11水中，温度为0℃-80℃下用纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)酶促反应提取，每次提取后调PH值至中性，煮沸。
2.如权利要求1所述的制备方法，采用加入蛋白酶酶促反应除蛋白，具体方法是蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取时与纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)一同加入、或在提取液中加入、或在合并提取液的浓缩液中加入，无论在哪一工序加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，均需在PH值为2-11，温度为0℃-80℃下酶促反应。
全文摘要
本发明涉及天然产物化学，特别是涉及从箬叶中提取箬叶多糖或箬叶硒多糖的方法。箬叶(或含硒箬叶)在pH值为2－11水中，温度为0℃－80℃下用纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)酶促反应提取数次，合并提取液浓缩、去沉淀，澄清液加入酒精沉淀24h以上，分出多糖沉淀、脱水、真空干燥即得箬叶多糖(或箬叶硒多糖)。在本发明中采用蛋白酶法除蛋白，蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取时与纤维素酶一同加入、或在提取液中加入、或在三次提取液的浓缩液中加入，无论在哪一工序加入蛋白酶，均需在pH值为2－11，温度为0℃－80℃下酶促反应。本发明提供了一种在较低温度下，提取率较高，适合工业化生产的提取箬叶多糖或箬叶硒多糖的方法。
文档编号C12P19/00GK1468868SQ0314288
公开日2004年1月21日 申请日期2003年6月16日 优先权日2003年6月16日
发明者余爱农 申请人:湖北民族学院