一种杏鲍菇多糖组分的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种多糖组分的制备方法，尤其涉及一种杏鲍菇多糖组分的制备方法及其应用。
【背景技术】
[0002]杏鲍燕(Pleuro tus eryngii Quel.)隶属真菌门、担子菌纲、伞菌目、侧耳科、侧耳属真菌，被誉为“菇中之王”，主要分布于典型的亚热带草原-干旱沙漠地区。现代研究表明杏鲍菇中富含多糖，多糖具有抗病毒、抗肿瘤以及提高免疫力的药理学功效。
[0003]迟桂荣报道采用氯仿-甲醇混合溶剂提取、95%乙醇醇沉、活性炭脱色、Sevage法脱蛋白、Sephadex G-50、Sephadex G-100柱层析分离杏鲍燕中纯多糖，过程较繁琐且损失量大，而目前从杏鲍菇中快速获取抗结肠癌细胞增殖的多糖组分的制备研究未见文献报道。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、易规模化的杏鲍菇多糖组分的制备方法。
[0005]本发明所要解决的另一个技术问题是提供该杏鲍菇多糖组分的应用。
[0006]为解决上述问题，本发明所述的一种杏鲍菇多糖组分的制备方法，包括以下步骤:
⑴提取:将干燥的杏鲍菇粉碎至50~120目后加水进行水提，经过滤得到滤液；该滤液经减压干燥至膏状，即得杏鲍菇水提取物；
⑵醇沉:所述杏鲍菇水提取物用其质量5~10倍的水进行溶解，然后加入所述杏鲍菇水提取物质量10~20倍的体积分数为85%~95%的乙醇溶液醇沉，离心收集沉淀，重复1~3次，合并沉淀物，该沉淀物经干燥得杏鲍菇多糖粗提物；
⑶纤维素柱色谱分离:所述杏鲍菇多糖粗提物加入其质量10~20倍的水进行溶解，然后采用纤维素柱分别以水、0.1 mol/L氯化钠水溶液、0.4 mol/L氯化钠水溶液按5~10倍的柱体积进行梯度洗脱，收集0.4 mol/L氯化钠水溶液洗脱液；该洗脱液经减压干燥至0.5L~1.0 L后，用透析膜透析除盐15 h~24 h，最后对膜内截留液减压干燥即得淡黄色粉末状的杏鲍菇多糖组分。
[0007]所述步骤⑴中水提条件是指料液比为lg: 10~30 mL、温度为80°C~95°C、提取次数为1~3次、每次提取时间为1~5 ho
[0008]所述步骤⑴、所述步骤⑶中的减压干燥条件均是指真空度为0.07-0.09 MPa，温度% 65-80 0C0
[0009]所述步骤⑵中干燥条件是温度为65~80°C。
[0010]所述步骤⑶中纤维素柱为DEAE-52。
[0011]所述步骤⑶中透析膜的截留分子量为3000 D~10000D。
[0012]如上所述的一种杏鲍菇多糖组分的制备方法制得的杏鲍菇多糖组分在制备抗结肠癌药物或保健食品中的应用，其特征在于:该杏鲍菇多糖组分作为有效组分按常规方法与药学上可接受的任何载体制成各类抗结肠癌制剂，或作为有效组分按常规方法与食品科学上可接受的任何载体制成各类保健类食品。
[0013]本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明采用水提取，可以将杏鲍菇中脂溶性小分子或生物大分子与水溶性多糖分开，不但成本廉价，而且易规模化实施。
[0014]2、本发明采用醇沉处理，可有效去除样品中小分子化合物。
[0015]3、本发明纤维素柱可以再生循环使用，同时纤维素柱不使用有机试剂，对环境不造成污染，同时制备方法简单，平均成本低廉。
[0016]4、本发明所获得的杏鲍菇多糖组分经测试，具有很好的抗结肠癌的作用。
[0017]⑴实验方法采用国际通用的MTT测定方法进行:首先，在96孔细胞板上接种2X 14个对数生长期的结肠癌细胞HCT116，3个复孔，细胞贴壁后；再加入不同浓度待测样品，共设置7个药物浓度梯度，分别为:1.0 yg/mL、5.0 yg/mL、10.0 yg/mL、20 yg/mL、30 yg/mL、40 yg/mL和50 μ g/mL的该多糖组分样品组；72小时后，于96孔板对应孔中加入5 mg/mL的MTT溶液20 μ L，继续培养3 h ;弃去96孔板中上清液，加入100 μ L DMSO溶解，使用酶标仪检测570 nm波长下的吸光值并计算待测样品对结肠癌细胞生长的半数抑制浓度IC500
[0018]⑵实验结果表明，实施例1~3组多糖组分对结肠癌细胞株均有明显的抑制作用，依次为 35.4 μ g/mL,34.2 μ g/mL,36.1 μ g/mL，平均值为 35.2 μ g/mL。
【具体实施方式】
[0019]实施例1 一种杏鲍菇多糖组分的制备方法，包括以下步骤:
⑴提取:将1.0 Kg干燥的杏鲍菇粉碎至120目后加水进行水提，经过滤得到滤液；该滤液在真空度为0.07 MPa、温度为80°C的条件下经减压干燥至膏状，即得杏鲍菇水提取物402.4 go
[0020]其中:水提条件是指料液比为Ig:10 mL、温度为95°C、提取次数为3次、每次提取时间为I h。
[0021]⑵醇沉:杏鲍菇水提取物用其质量5倍的水进行溶解，然后加入杏鲍菇水提取物质量20倍的体积分数为85%的乙醇溶液醇沉，离心收集沉淀，重复I次，合并沉淀物，该沉淀物在温度为65°C的条件下干燥得杏鲍菇多糖粗提物184.5 go
[0022]⑶纤维素柱色谱分离:杏鲍菇多糖粗提物加入其质量10倍的水进行溶解，然后采用DEAE-52纤维素柱分别以水、0.1 mol/L氯化钠水溶液、0.4 mol/L氯化钠水溶液按5~10倍的柱体积进行梯度洗脱，收集0.4 mol/L氯化钠水溶液洗脱液；该洗脱液经减压干燥至
0.5 L后，用透析膜透析除盐24 h，最后对膜内截留液在真空度为0.07 MPa、温度为80°C的条件下减压干燥即得淡黄色粉末状的杏鲍菇多糖组分54.8 go
[0023]其中:透析膜的截留分子量为3000 D。
[0024]实施例2 —种杏鲍菇多糖组分的制备方法，包括以下步骤:
⑴提取:将5.0 Kg干燥的杏鲍菇粉碎至50目后加水进行水提，经过滤得到滤液；该滤液在真空度为0.09 MPa、温度为65°C的条件下经减压干燥至膏状，即得杏鲍菇水提取物1845.0 go
[0025]其中:水提条件是指料液比为Ig:30 mL、温度为80°C、提取次数为I次、每次提取时间为5 ho
[0026]⑵醇沉:杏鲍菇水提取物用其质量10倍的水进行溶解，然后加入杏鲍菇水提取物质量10倍的体积分数为95%的乙醇溶液醇沉，离心收集沉淀，重复3次，合并沉淀物，该沉淀物在温度为80°C的条件下干燥得杏鲍菇多糖粗提物864.3 go
[0027]⑶纤维素柱色谱分离:杏鲍菇多糖粗提物加入其质量20倍的水进行溶解，然后采用DEAE-52纤维素柱分别以水、0.1 mol/L氯化钠水溶液、0.4 mol/L氯化钠水溶液按10倍的柱体积进行梯度洗脱，收集0.4 mol/L氯化钠水溶液洗脱液；该洗脱液经减压干燥至1.0L后，用透析膜透析除盐15 h，最后对膜内截留液在真空度为0.09 MPa、温度为65°C的条件下减压干燥即得淡黄色粉末状的杏鲍菇多糖组分262.6 go
[0028]其中:透析膜的截留分子量为10000D。
[0029]实施例3 —种杏鲍菇多糖组分的制备方法，包括以下步骤:
⑴提取:将2.0 Kg干燥的杏鲍菇粉碎至80目后加水进行水提，经过滤得到滤液；该滤液在真空度为0.08 MPa、温度为75°C的条件下经减压干燥至膏状，即得杏鲍菇水提取物796.6 go
[0030]其中:水提条件是指料液比为Ig:20 mL、温度为90°C、提取次数为2次、每次提取时间为3 ho
[0031]⑵醇沉:杏鲍菇水提取物用其质量8倍的水进行溶解，然后加入杏鲍菇水提取物质量15倍的体积分数为90%的乙醇溶液醇沉，离心收集沉淀，重复2次，合并沉淀物，该沉淀物在温度为75°C的条件下干燥得杏鲍菇多糖粗提物356.9 go
[0032]⑶纤维素柱色谱分离:杏鲍菇多糖粗提物加入其质量15倍的水进行溶解，然后采用DEAE-52纤维素柱分别以水、0.1 mol/L氯化钠水溶液、0.4 mol/L氯化钠水溶液按8倍的柱体积进行梯度洗脱，收集0.4 mol/L氯化钠水溶液洗脱液；该洗脱液经减压干燥至0.8L后，用透析膜透析除盐20 h，最后对膜内截留液在真空度为0.08 MPa、温度为75°C的条件下减压干燥即得淡黄色粉末状的杏鲍菇多糖组分105.2 go
[0033]其中:透析膜的截留分子量为8000D。
[0034]上述实施例1~3制得的杏鲍菇多糖组分在制备抗结肠癌药物或保健食品中的应用是指:该杏鲍菇多糖组分作为有效组分按常规方法与药学上可接受的任何载体制成各类抗结肠癌制剂，或作为有效组分按常规方法与食品科学上可接受的任何载体制成各类保健类食品。
【主权项】
1.一种杏鲍菇多糖组分的制备方法，包括以下步骤: ⑴提取:将干燥的杏鲍菇粉碎至50~120目后加水进行水提，经过滤得到滤液；该滤液经减压干燥至膏状，即得杏鲍菇水提取物； ⑵醇沉:所述杏鲍菇水提取物用其质量5~10倍的水进行溶解，然后加入所述杏鲍菇水提取物质量10~20倍的体积分数为85%~95%的乙醇溶液醇沉，离心收集沉淀，重复1~3次，合并沉淀物，该沉淀物经干燥得杏鲍菇多糖粗提物； ⑶纤维素柱色谱分离:所述杏鲍菇多糖粗提物加入其质量10~20倍的水进行溶解，然后采用纤维素柱分别以水、0.1 mol/L氯化钠水溶液、0.4 mol/L氯化钠水溶液按5~10倍的柱体积进行梯度洗脱，收集0.4 mol/L氯化钠水溶液洗脱液；该洗脱液经减压干燥至0.5L~1.0 L后，用透析膜透析除盐15 h~24 h，最后对膜内截留液减压干燥即得淡黄色粉末状的杏鲍菇多糖组分。2.如权利要求1所述的一种杏鲍菇多糖组分的制备方法，其特征在于:所述步骤⑴中水提条件是指料液比为Ig:10-30 mL、温度为80°C ~95°C、提取次数为1~3次、每次提取时间为1~5 ho3.如权利要求1所述的一种杏鲍菇多糖组分的制备方法，其特征在于:所述步骤⑴、所述步骤⑶中的减压干燥条件均是指真空度为0.07~0.09 MPa，温度为65~80 °C。4.如权利要求1所述的一种杏鲍菇多糖组分的制备方法，其特征在于:所述步骤⑵中干燥条件是温度为65~80°C。5.如权利要求1所述的一种杏鲍菇多糖组分的制备方法，其特征在于:所述步骤⑶中纤维素柱为DEAE-52。6.如权利要求1所述的一种杏鲍菇多糖组分的制备方法，其特征在于:所述步骤⑶中透析膜的截留分子量为3000 D~10000D。7.如权利要求1所述的一种杏鲍菇多糖组分的制备方法制得的杏鲍菇多糖组分在制备抗结肠癌药物或保健食品中的应用，其特征在于:该杏鲍菇多糖组分作为有效组分按常规方法与药学上可接受的任何载体制成各类抗结肠癌制剂，或作为有效组分按常规方法与食品科学上可接受的任何载体制成各类保健类食品。
【专利摘要】本发明涉及一种杏鲍菇多糖组分的制备方法，该方法包括以下步骤：⑴提取：将干燥的杏鲍菇粉碎后加水进行水提，经过滤得到滤液；该滤液经减压干燥至膏状，即得杏鲍菇水提取物；⑵醇沉：所述杏鲍菇水提取物用水溶解后加入乙醇溶液醇沉，经离心、干燥得杏鲍菇多糖粗提物；⑶纤维素柱色谱分离：所述杏鲍菇多糖粗提物加水溶解后采用纤维素柱进行梯度洗脱，收集0.4？mol/L氯化钠水溶液洗脱液；该洗脱液经减压干燥、透析膜透析除盐，最后对膜内截留液减压干燥即得淡黄色粉末状的杏鲍菇多糖组分。本发明工艺简单、易规模化，且所获得的杏鲍菇多糖组分具有很好的抗结肠癌的作用，可应用于制备抗结肠癌药物或保健食品。
【IPC分类】C08B37/00
【公开号】CN105111326
【申请号】CN201510586754
【发明人】梅丽娟, 党军, 张莉, 王启兰, 陶燕铎, 邵赟, 于瑞涛
【申请人】中国科学院西北高原生物研究所
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月15日