基于超滤方法快速分离薤白活性多糖的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物多糖的提取方法，尤其涉及一种新的基于超滤方法快速分离薤白中活性多糖的提取方法。
【背景技术】
[0002]薤白(Χ?..macrostemon Bunge)为卫生部2002年公布的87种药食两用植物之一，别名野白头、小根蒜、山蒜、苦蒜、小么蒜、小根菜、野葱、薤白头等，为百合科葱属多年生草本植物，广泛分布于中国、日本和韩国等国的平原地区，多食用，其干燥鳞茎也可入药，药用薤白为植物小根蒜A macrostemon Bge.或薤AZfew的干燥鳞莖。薤白味辛、苦，性温，无毒，具有理气、宽胸、通阳、散结之功效，中医长期用于治疗胸闷刺痛、泻痢后重、肺气喘急等疾病。与现代医学中的心绞痛、动脉粥样硬化、心肌梗塞等心血管疾病的治疗有一定的关系。作为天然生物活性成分，研究已发现多糖具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎及免疫调节等多种功能，且多糖中糖醛酸含量的高低与其活性的强弱之间有着较为明显的对应关系。
[0003]近几年来，已对薤白多糖从提取工艺优化、纯品制备、结构分析鉴定、活性筛选评价及结构和功能的构效关系等方面进行较为系统深入的研究，发现了一种糖醛酸含量较高，具有较强生物活性的酸性多糖。但是迄今为止，薤白多糖的提取方法仅限于减压浓缩的传统方式，耗能高，同时活性多糖提取率较低。
[0004]在《安徽农业科学》，2006，34 (17)中，由夏新奎、杨海霞、李纯、尹健发表的《薤白粗多糖提取工艺研究》文章中，公开了一种薤白多糖的提取方法，具体采用的方案是:称取粉碎的薤白干品粉末200g，甲醇回流脱去表面脂肪，抽滤，药渣风干，再用80%乙醇回流除去小分子糖、苷类、生物碱等，药渣风干，然后分别取药渣5 g，以水作为溶剂，采用不同的提取温度，不同的料液比，不同的提取时间对药渣进行多糖提取实验，水提液离心除去杂质，减压浓缩至小体积，加无水乙醇至浓度为75%沉淀；静置24h后过滤，用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤数次，真空干燥，得薤白粗多糖。文中进一步也指出了提取工艺条件，包括提取温度，液料比，提取时间，提取次数等。
[0005]但是，该提取方法还是存在诸多不足，提取率较低，提取过程中损失率较尚，在最佳提取工艺条件下薤白多糖的平均提取率为13.93%，提取出来的薤白多糖多为分子量较小的中性多糖，较大分子量的酸性多糖占比较小，因而生物活性较低。
【发明内容】
[0006]本发明目的旨在提供一种高效、环保的基于超滤方法快速分离薤白活性多糖的提取方法。
[0007]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是:该基于超滤方法快速分离薤白活性多糖的提取方法，包括以下步骤:
(I)取鲜薤白，洗净干燥后，粉碎过60目筛，得薤白粉碎物； (2)将步骤(I)中的制得的薤白粉碎物，采用石油醚或乙醚回流脱脂，离心去除上清液，所得残渣50°C烘干，石油醚或乙醚与薤白粉碎物的液料比为5:1;
(3)将步骤(2)所得残渣，加水进行热水浸提，水料比为4-25mL/g，提取温度60-100°C，提取时间0.5_3h，提取若干次，合并得提取液；
(4)将步骤(3)所得提取液，离心，得上清液；
(5)将步骤(4)所得的上清液，采用超滤设备，应用规格50kD超滤膜，在温度为20?45°C，操作压力为0.10-0.40MPa条件下进行超滤，得透过液和截留液；
(6)将步骤(5)所得截留液，加乙醇至终浓度70%，室温放置后离心，得固体沉淀物；
(7)将步骤(6)所得固体沉淀物，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，真空干燥，得薤白活性多糖。
[0008]进一步的改进在于，所述步骤(5)中的离心率为5000r/m，时间为lOmin。
[0009]进一步的改进在于，所述步骤(7)中的离心率为5000rpm，时间为lOmin。
[0010]进一步的改进在于，在所述步骤(I)中，干燥采用烘干温度为50°C ;在所述步骤
(2)中，采用石油醚回流脱脂I次，时间3h，将步骤⑵所得残渣，用80%乙醇，回流去除小分子，离心去除上清液，所得残渣烘干，80%乙醇与残渣的液料比为8:1 ;在所述步骤(3)中，回流去除小分子I次，时间3h ;在所述步骤(4)中，提取次数1-5次；在所述步骤(7)中，放置时间为24h ;在所述步骤(8)中，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗涤I次，50°C下真空干燥。
[0011]进一步的改进在于，在所述步骤(I)中，鲜薤白洗净后除去须根，蒸透或置沸水中烫透，采用晒干方式干燥；在所述步骤(2)中，采用乙醚回流脱脂2次，每次时间2h ;在所述步骤(3 )中，提取次数1-5次；在所述步骤(6 )中，放置时间为24h ;在所述步骤(7 )中，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗涤I次，50°C下真空干燥。
[0012]采用本发明上述方案，采用硫酸-间羟联苯法进行糖醛酸含量测定，制备所得薤白活性多糖为灰白色絮状粉末，其糖醛酸含量24.73%，远高于透过液中及其它未采用超滤方法制得的薤白多糖；所得薤白活性多糖红外分析测试结果表明，在3500-3250 cm 1范围内出现了宽而强的多糖羟基O-H伸缩振动峰，2900-2800 cm 1范围内出现多糖的C-H强伸缩振动峰，这两个峰均为多糖类物质的特征吸收峰，其中在1750 cm1处，出现的强吸收峰是羧基的C=O非对称伸缩振动，说明此多糖含有羧基基团，具有较高活性。
【附图说明】
[0013]图1是采用本发明方法从薤白中分离到的活性多糖以及其他方法分离到的薤白多糖对肿瘤细胞BGC-823作用24h后的抑制率对比；
图2是实施例1薤白提取液经超滤所得截留液中薤白活性多糖红外谱图。
【具体实施方式】
[0014]实施例1:取鲜薤白，洗净，50 0C烘干后，粉碎过60目筛，得薤白粉碎物；将制得的粉碎物，石油醚Ot料比5:1)回流脱脂I次，时间3 h，离心去除上清液，所得残渣50°C烘干；将烘干后残渣，用80%乙醇(液料比8:1)回流去除小