一种新的二萜化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从香椿的干燥叶中分离得到的一种具有治疗 急性T淋巴细胞白血病作用的二萜类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 香棒Tbona (A.Juss.)Roemor又名春芽树、棒、棒树，在《植物名实图 考》中称为红椿，为楝科(Meliaceae)香椿属（Toona)落叶乔木，是我国特有的珍贵速生药 材书中，素有"中国桃花心木"之称，主要分布于我国的山东、安徽、河南、河北等省份，其中 又以安徽太和、河南焦作和山东西牟出产的香椿产品最为出名。
[0003] 香椿全株具有特殊气味，并因富含多种生物活性物质而具有很高的药用价值，其 叶、树皮和果实均可入药，应用历史十分悠久，始载于《唐本草》。香椿叶味苦、性温，具有清 热收敛、消炎解毒、去燥湿等功效，主治肠炎、痢疾等疾病；此外，香椿叶富含维生素C、氨基 酸、优质蛋白质和磷、铁等微量元素，是我国著名的传统时令蔬菜，已有两千多年的食用历 史，曾与荔枝一同作为贡品进献宫廷御用，是蔬菜中不可多得的珍品，深受广大消费者的青 睐，在国外被称为"绿色保健菜"，现多出口至日本及东南亚国家。香椿皮味苦湿、性凉，具有 除热、燥湿、润肠止血、杀虫的功效，临床常用于治疗痢疾、肠炎、泌尿道感染、便血、白带、风 湿腰腿痛等。香椿子味辛苦、性温，具祛风、散寒、止痛之功效，临床用于治疗风寒外感、心胃 气痛、风湿关节痛、疝气及冷骨风等。
[0004]目前，香椿中分离鉴定出的化合物主要可分为黄酮类、酚类及其衍生物、萜类(三 萜、倍半萜、二萜)、苯丙素类、含硫化合物等。现代研究表明，香椿中的化学成分有抗肿瘤、 抗氧化、降血脂等多种生物活性；国内外学者对香椿中的化学成分开展了一些较为深入的 研究，发现其所含化合物的种类丰富，是值得进一步研究、开发前景良好的一种药食同源植 物资源。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从干燥的香椿叶中分离得到的一种具有治疗急性T淋 巴细胞白血病作用的二萜类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的： 具有下述结构式的化合物（I)，
[0007] 所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)干燥的香椿叶粉碎，用 80~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的 正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤（a)中乙 酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱12个柱 体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b)中75%乙醇洗 脱物浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、50:1、30:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2用十八 烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10 个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0008] 所述步骤（a)中，用85%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0009] 所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0010] -种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（I) 和药学上可接受的载体。
[0011] 所述的化合物（I)在制备治疗急性T淋巴细胞白血病的药物中的应用。
[0012] 所述的药物组合物在制备治疗急性T淋巴细胞白血病的药物中的应用。
[0013] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0014] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0015] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0016] 说明书附图 图1为化合物（I)结构式； 图2为化合物（I)理论E⑶值与实验E⑶值比较。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0018] 实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试 剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0019] 制备方法：（a)香椿的干燥叶（8kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取（25LX3次)， 合并提取液，浓缩至无醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次)、乙酸乙酯（6LX3次）和水饱和 的正丁醇（6LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（355g)和正丁醇萃取 物；（b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体 积，再用75%乙醇洗脱12个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏 (136g); (c)步骤（b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (8个柱 体积)、50:1 (8个柱体积)、30:1 (6个柱体积)、10:1 (8个柱体积）和1:1 (5个柱体积）的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4 (31g)用正相硅胶进一步 分离，依次用体积比为20:1 (8个柱体积)、10:1 (10个柱体积）和5:1 (6个柱体积）的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (llg)用十八烷基硅烷键合 的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I) (35mg)。
[0020] 结构确证：HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z435. 1806,结合核磁特征可得分子式为 C24H2S06，不饱和度为 11。核磁共振氢谱数据SH (ppm，DMSO-成，600MHz) :H-1 (5.56,t， 方 1.8)，H-2 (1.79，m)，H-2 (2.04，m)，H-3 (1.08，m)，H-3 (1.83，m)，H-6 (5.77，d，方6.0)， H-7 (4.93，d，方6.0)，H-11 (6.90，s)，H-15 (6.76，d，方2.4)，H-16 (7.56，d，方2.4)，H-17 (2.47，s)，H-18 (1.14,s)，H-19 (1.14,s)，H-20 (1.52,s)，1-0C0CH3 (1.76,s)，6-0C0CH3 (2.11，8);核磁共振碳谱数据8￡(口口!11，0130-成，150抱）:77.3(〇1，1-〇,22.6(〇1 2,2-〇， 33.7 (CH2,3-C)，39.6 (C，4-C)，80.9 (C，5-C)，81.2 (CH，6-C)，74.6 (CH，7-C)，128.2 (C， 8-C)，140. 8 (C，9-C)，50. 4 (C，10-C)，104. 8 (CH，11-C)，155. 8 (C，12-C)，131. 5 (C，13-C)， 132.5 (C，14-C)，106.2 (CH，15-C)，146.4 (CH，16-C)，17.0 (CH3，17-C)，29.9 (CH3，18-C)， 25.2 (CH3，19-C)，29.7 (CH3,20-C)，171.3 (C，1-0C0CH3)，21.1 (CH3，1-0C0CH3)，173.0 (C， 6-0C0CH3)，22. 2 (CH3,6-0C0CH3);碳原子标记参见图1。红外光谱表明该化合物含有芳香 碳（3010nm，1610nm)。虫NMR谱显示4个甲基信号SHI. 14，1. 14，1.52,2. 47。两个相互 耦合的烯烃质子SH6. 76 (H-15,d，J= 2. 4)和7. 56 (H-16,d，J=2. 4Hz)表明该化合物 含有一个稠合呋喃环。13CNMR显示24个碳信号，其中包括6个芳香碳（SC104. 8，128. 2， 131. 5,132. 5,140. 8和155. 8)。这些数据表明，该化合物为与呋喃环稠合的二萜类化合物。 HMBC谱中，H-ll(SH6.90，s)与C-12 (SC155.8)和C-13 (SC131.5);H3-17 (SH2.47， s)与C-8 (SC128. 2)，C-13 (SC131. 5)，C-14 (SC132. 5)和C-15 (SC106. 5)的相关性 验证了苯环与呋喃环共辄这一推论。此外，C-1和C-6与相应的乙酰氧基的相关性表明两 个乙酰氧基分别位于C-1和C-6位上。从H-1 (5. 56,t，方1. 8)到H3-19 (SH1. 14,s)和 H3-20(SH1.52，s)N0E信号增强，表明C-1位的乙酰氧基为a构型。在1H」HCOSY谱，H-6 (5.77，山方6.0)和11-7(4.93，(1，方6.0)的相关性表明，(：-6(8〇81.2)和（：-7(8〇74.6) 均与氧相连。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基 本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致 (图 2)。
[0021] 实施例2 :化合物（I)药理作用试验 一、材料和仪器 急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞由暨南大学血液病研究所惠赠；慢性粒细胞白血 病细胞K562细胞由暨南大学由生物化学与分子生物学教研室惠赠。化合物（I)为自制， HPLC归一化纯度大于98%，用DMS0分析纯溶解配制成5. 5yg/mL溶液备用。DMEM/F12培 养基粉、羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)、四苯基氮哇蓝试剂（MTT)购于美国Gibeo公司。新生 牛血清（NewbornCalfSerum)购于中国杭州四季青公司。青霉素（Penicillin)、链霉素 (Streptomycin)购于华北制药公司中国。碘化丙睫（PT)购于美国Sigma公司。PI-Ann