[0047] 本发明的主题还是根据本发明的冻干物或粉末、或包含其的溶液、或来自环节动 物的冻干或粉末状血红蛋白在改进生物生产中的用途。术语"生物生产"旨在是指以工业规 模生产生物产品，优选在生物反应器中。术语"生物产品"旨在尤其是指蛋白质（即包含至 少50个氨基酸的氨基酸序列。优选地，所述蛋白质是抗体、血红蛋白或酶）、肽（即包含2 到49个氨基酸的氨基酸序列）、核酸序列或质粒。事实上，根据本发明的冻干物或粉末、或 包含其的溶液以及血红蛋白可用于生物反应器中以增加生物生产的产量。此外，可以将根 据本发明的冻干物或粉末、或包含其的溶液以及血红蛋白添加至动物或植物细胞例如CHO 细胞的培养基。它们尤其可以促进所述细胞的生长。
[0048] 本发明的主题还是根据本发明的冻干物或粉末、或包含其的溶液、或来自环节动 物的冻干或粉末状血红蛋白在提高乳酸发酵的产量中的用途。乳酸发酵通常在生物反应器 中通过乳酸菌进行。它不需要氧（厌氧的），由将葡萄糖转化成乳酸组成。如实施例所示， 一旦重组，根据本发明的冻干物具有良好的稳定性和良好的功能性；它尤其包含胞外血红 蛋白。
[0049] 本发明的主题还是根据本发明的冻干物或粉末、或包含其的溶液、或来自环节动 物的冻干或粉末状血红蛋白作为动物饲料、尤其用于水生动物和宠物的动物饲料的用途。 该饲料可以是诱饵、颗粒、糊状物、小球或粉末形式。
[0050] 它尤其适合作为鱼或无脊椎动物例如软体动物、甲壳动物、头足类动物、珊瑚或宠 物的整体饲料或作为饲料添加剂。
[0051] 现在通过以下非限制性实施例说明本发明。
【具体实施方式】
[0052] 实施例1 :根据本发明的冻干物的制备和分析
[0053] 材料和方法
[0054] 蠕虫粉末
[0055] 所测试的产品是海沙螞或沙蚕的粉末。
[0056] 这些粉末通过冻干和研磨获得。
[0057] 测试以下培养基：
[0058] -MEDIUM I:miIliQ H2O
[0059] -MEDIUM 2 :提取缓冲液（400mM NaCl、2· 95mM KCl、32mM MgSO4. 7H20、I ImM CaCl2、 50mM Tris喊、IOmM抗坏血酸）
[0060] -MEDIUM 3 :IN NaOH(用于再分散牛来源的氯化血红素、血红蛋白）。
[0061] 方法
[0062] 称出Ig粉末置于15ml离心管中。添加3ml溶液然后首先人工然后用涡流均质化。 为该混合物拍照。然后将混合物以5000g离心10分钟。然后为沉淀和上清液拍照。将上 清液回收并冷冻于_80°C。考虑到回收体积小，重复该实验，但在50ml离心管中的3g粉末 和9ml溶液上进行。将等分试样冷冻于-80°C。
[0063] 为分析测试，以较大量制备新鲜材料。称出3g蠕虫粉末，然后重悬于15ml再分散 溶液中。然后离心材料并回收上清液，然后通过〇. 8 μ m和0. 22 μ m过滤器过滤。测定功能 性和纯度并在样品上进行分析。
[0064] 结果
[0065] 1.冻干
[0066] 对于5kg沙螞，产生670g粉末，即因子为7. 5。
[0067] 对于6kg沙蚕，产生921g粉末，即因子为6. 5。
[0068] 2.分析结果
[0069] a)分析
[0070] 血红蛋白浓度为3_8g/kg新鲜懦虫。
[0071]
[0072] b)传导率
[0073] 固体传导率很高（~130mS/cm)。
[0074] 实施例2 :测试根据本发明的冻干物
[0075] 材料和方法
[0076] 蠕虫粉末
[0077] HEMARINA A :来自海沙螞
[0078] HEMARINA B :来自沙蚕
[0079] 如实施例1获得粉末。
[0080] 样品制备
[0081] i)烧瓶培养：以200g/l溶解粉末，然后过滤上清液并添加至烧瓶。
[0082] ii)生物反应器培养：在高压灭菌之前以lg/Ι粉末的比例直接添加至反应器。
[0083] 培养条件
[0084] i)烧瓶（100ml、0· 5 和 11)培养：
[0085] 所使用的菌株是乳酸乳球菌（Lactococcus lactis) SB50菌株。
[0086] 测试在30°C下以180rpm振摇过夜（16-18h)。
[0087] 菌株的培养基组成如下：葡萄糖（1% )、麦芽糖（0. 1% )、酵母提取物（2% )和矿 物质。
[0088] 培养条件如下：装填至10%有效体积；使用添加有IOppm终浓度的氯化血红素 (牛来源的血红蛋白）的阳性对照。
[0089] 离心后添加灭菌后的HEMARINA样品（溶液中的粉末）。
[0090] ii)生物反应器（11有效体积）培养：
[0091] 测试在30°C下进行过夜（15-16h)。
[0092] 菌株的培养基组成与烧瓶相同，其中添加 0. 01 %消泡剂。
[0093] 培养条件如下：装填至60%有效体积，将p02调节至20%或80%和将pH调节至6。
[0094] 在高压灭菌之前将lg/Ι粉末直接添加至培养基。
[0095] 测量各培养物在600nm的光密度（OD)。
[0096] 结果
[0097] i)烧瓶培养：
[0098] OD 如下：
[0100] 各产品（HEMARINA A和HEMARINA B)的活性浓度等于氯化血红素，即约0· 25ppm。
[0101] ii)生物反应器培养：
[0102] 结果如下：
[0104] HEMARINA A和HEMARINA B产品存在下的菌株活力提高了三到四倍。
[0105] 乳酸的生产（相当于所生成的NH4OH的体积）小于对照但大于阳性对照（氯化血 红素）。
[0106] HEMARINA A和HEMARINA B产品的酸化能力等于阳性对照。
[0107] 总之，HEMARINA A和HEMARINA B产品似乎可以提高乳酸菌株的活力，并具有非常 优异的酸化能力。
[0108] 这些产品可以代替牛和猪氯化血红素，所述牛和猪氯化血红素广泛用于食物加工 领域，但对人具有病毒或朊病毒污染的潜在危险，且不适于生产犹太和/或清真产品。
【主权项】
1. 一种冻干物或粉末，包含i)至少一种来自环节动物的胞外血红蛋白、球蛋白或球蛋 白原体，和ii)至少一种来自环节动物的不同于所述球蛋白、所述原体和所述血红蛋白的 生物材料。2. 如权利要求1所述的冻干物或粉末，其中所述环节动物选自多毛纲环节动物，优选 选自沙螞科和沙蚕科，更优选选自海沙螞和沙蚕。3. 制备权利要求1或2所述的冻干物或粉末的方法，包括： i) 在-20°C至-100°C温度下冷冻整个环节动物或环节动物副产物至少24h; ii) 在真空下升华i)中获得的冷冻产品至少2h; iii) 最后干燥ii)中获得的升华产物，直到获得干燥产物；和 iv) 研磨iii)中获得的干燥产物。4. 如权利要求3所述的方法，其中步骤i)的冷冻在-20°C至_90°C的温度下进行至少 Mh05. 如权利要求3或4所述的方法，其中步骤ii)的升华进行至少4h。6. -种溶液，包含权利要求1或2所述的冻干物或粉末。7. 权利要求1或2所述的冻干物或粉末、或权利要求6所述的溶液、或来自环节动物的 冻干或粉末状血红蛋白在提高乳酸发酵产量中的用途。8. 权利要求1或2所述的冻干物或粉末、或权利要求6所述的溶液、或来自环节动物的 冻干或粉末状血红蛋白在提高生物生产的产量中的用途。9. 权利要求1或2所述的冻干物或粉末、或权利要求6所述的溶液、或来自环节动物的 冻干或粉末状血红蛋白作为动物饲料，尤其用于水生动物和宠物的动物饲料的用途。
【专利摘要】本发明涉及一种冻干物或粉末，包含i)至少一种来自环节动物的胞外血红蛋白、球蛋白或球蛋白原体，和ii)至少一种来自环节动物的不同于所述球蛋白、所述原体和所述血红蛋白的生物材料。
【IPC分类】C12N1/38, A23J1/04
【公开号】CN105209602
【申请号】CN201480026956
【发明人】F·察尔
【申请人】埃玛里纳
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2014年5月14日
【公告号】CA2911340A1, EP3008166A1, US20160152944, WO2014184492A1