一种重组人表皮生长因子发酵用培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种重组人表皮生长因子发酵用培养基。
【背景技术】
[0002] 表皮生长因子是由Cohen等人在上世纪60年代从小鼠颂下腺发现的一种生长 调节蛋白，由53个氨基酸组成，研究证实它具有广泛的刺激细胞增殖的作用。1975年， Starkey、Cohen等人从人尿中提取了人表皮生长因子（humanEpidermalGrowthFactor， hEGF)，与鼠表皮生长因子具有高度一致的结构，并具有一致的生物学活性。表皮生长因子 广泛存在于人体各种组织中，可刺激多种细胞增殖，主要是上皮细胞和内皮细胞的增殖，这 是通过结合细胞膜上的表皮生长因子受体（EGFR)而起作用的。EGF通过与细胞受体的膜外 部分结合，激活其酪氨酸激酶活性，诱导蛋白磷酸化，启动DNA合成，激活RNA、蛋白质合成， 促进细胞增生、移行。
[0003] 表皮生长因子广泛存在于人体内各种组织，含量极微，对于维持人体各种组织器 官（如角结膜、皮肤、各种黏膜、腺体等）的正常生理功能具有重要作用。随着年龄的增长， 体内表皮生长因子水平逐渐下降，表现为相关组织器官的衰老和退化，特别是上皮组织的 衰老，因此，及时向人体补充表皮生长因子，可维护人体正常功能并延缓衰老，这是表皮生 长因子在美容保健行业的应用基础。另外，在肌体受损等的情况下，内源性表皮生长因子不 能满足组织修复的大量需要，及时向受损部位补充表皮生长因子，可促进受损肌体组织的 修复，在临床上应用非常广泛，如用于创伤、炎症、手术、化学烧伤及干眼症等各种原因引起 的角膜上皮缺损修复，烧伤、创伤、外科手术、炎症、溃疡等各种皮肤和黏膜缺损的修复。
[0004] 目前，对表皮生长因子和重组表皮生长因子已有研究，例如中国专利97115284. 5， 公开了表皮生长因子工程菌及使用该菌制备表皮生长因子的方法，研究人员通过表皮生长 因子可以得到重组人表皮生长因子（或者称为重组人表皮生长因子原液）。科技在不断进 步，对于表皮生长因子和重组表皮生长因子的研究也在不断的进行当中。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，该培养基由以下重 量比例成分制成：
[0006] 甘袖? 5.0-7.0%、
[0007] 酵母碱基（ΥΝΒ) 3.0-3. 5%、 微量金属离子：1.8-2. 2%、 仆:物素 0. 5-1,0%、 促进剂 0. 5-1. 0%、 水 余里；
[0008] 所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中 的一种；
[0009] 用磷酸盐缓冲液调pH为5. 5-6. 5 ;
[0010] 所述促进剂采用以下方法制备：
[0011] 1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
[0012] 2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破压力3. 0-3. 5Mpa， 保压时间维持在150-200s;
[0013] 3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入 蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分 离器，收集精油；
[0014] 4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度 30-40m/s，时间3-5min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
[0015] 进一步优选的，该培养基由以下重量比例成分制成：
[0016] 甘油： 6.0%、 酵母碱基（YNB) 3. 44%, 微量金属离子； 2.0%、 十.物素 1.0%、 促进剂 0.8%、 水 余量；
[0017] 所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中 的一种；
[0018] 用磷酸盐缓冲液调pH为6. 0 ;
[0019] 所述促进剂采用以下方法制备：
[0020] 1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
[0021] 2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破压力3. 0-3. 5Mpa， 保压时间维持在150-200s;
[0022] 3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入 蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分 离器，收集精油；
[0023] 4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度 30-40m/s，时间3-5min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
[0024] 本发明所述用水符合制药行业标准。
[0025] 本发明所述培养基按照现有技术制备。
[0026] 本发明所述穿心莲的使用量，优选粉碎后的体积相当于蒸汽爆破罐体积的 1/4-1/3〇
[0027] 与现有技术相比，本发明具有如下优点：
[0028] 1、本发明使用的植物原料成分经过了蒸汽爆破、蒸馏、高剪切均质机处理，得到纳 米乳状的植物油性成分，和培养基中其他配方的相容性好。
[0029] 2、本发明通过在培养基中添加植物原料成分作为促进剂，和现有技术相比，表达 产量会提高20-30%。
【具体实施方式】
[0030] 下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
[0031] 实施例1 :
[0032] -种重组人表皮生长因子发酵用培养基，该培养基由以下重量比例成分制成：
[0033] 甘油5.0%、 酵母碱基（ΥΝΒ) 3.5%、 微量金属离子.· 1.8%、 ζ|:物素 0.5%、 促进剂 1.0%、 水 余量；
[0034] 所述微量金属离子为三氯化铁；
[0035] 用磷酸盐缓冲液调pH为5. 5 ;
[0036] 所述促进剂采用以下方法制备：
[0037] 1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
[0038] 2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，体积相当于蒸汽爆破罐 体积的1/3,爆破压力3. 5Mpa，保压时间维持在150s;
[0039] 3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入 蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分 离器，收集精油；
[0040] 4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度40m/ s，时间3min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
[0041] 实施例2:
[0042] -种重组人表皮生长因子发酵用培养基，该培养基由以下重量比例成分制成：
[0043] 甘油7. 0%、 酵母碱基（YNB) 3.0%、 微量金属离子： 2.2%、
[0044] /:l·:物素 1.0%、 促进剂 0.5%、 水 余量；
[0045] 所述微量金属离子为氯化钙；
[0046] 用磷酸盐缓冲液调pH为6. 5 ;
[0047] 所述促进剂采用以下方法制备：
[0048] 1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
[0049] 2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，体积相当于蒸汽爆破罐 体积的1/4,爆破压力3.OMpa，保压时间维持在200s;
[0050] 3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入 蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分 离器，收集精油；
[0051] 4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度30m/ s，时间5min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
[0052] 实施例3 :
[0053] -种重组人表皮生长因子发酵用培养基，该培养基由以下重量比例成分制成：
[0054] 甘_; 6.0%、 酵母碱基（YNB) 3.44%、 微星金)禹尚子： 2.0%、 物素 1.0%、 促进剂〇· 8%、 水余量；
[0055] 所述微量金属离子为钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中；
[0056] 用磷酸盐缓冲液调pH为6. 0 ;
[0057] 所述促进剂采用以下方法制备：
[0058] 1)原料处理：将穿心莲洗净、干制、粉碎；
[0059] 2)蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，体积相当于蒸汽爆破罐 体积的1/3,爆破压力3.OMpa，保压时间维持在180s;
[0060] 3)蒸馏处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馏器，在蒸馏器底部，加热燃烧或通入 蒸汽，当炙热的蒸气充满在蒸馏器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分 离器，收集精油；
[0061] 4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度35m/ s，时间4min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。
【主权项】
1. 一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，其特征在于，该培养基由W下重量比例成 分制成： 甘油； 5.Q-7.0%、 酵母碱基 3. 0-3. 5%、 微量金属离子；1.8-2. 2%、 '心闯崇 0. 5-1.0%、 促进剂 0.5-1.0%、 水. 余重； 所述微量金属离子为Ξ氯化铁、氯化巧、钢酸钢、氯化锋、硫酸铜、棚酸、硫酸侣中的一 种； 用憐酸盐缓冲液调抑为5. 5-6. 5 ; 所述促进剂采用W下方法制备： 1) 原料处理：将穿屯、莲洗净、干制、粉碎； 2) 蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破压力3.0-3.5Mpa，保压 时间维持在150-200S ; 3) 蒸馈处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馈器，在蒸馈器底部，加热燃烧或通入蒸汽， 当炙热的蒸气充满在蒸馈器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分离器， 收集精油； 4) 高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度30-40m/ S，时间3-5min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。2. 根据权利要求1所述的一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，其特征在于，该培 养基由W下重量比例成分制成： 甘油： 6.0%、 酵母碱基 3. 44%、 微重金属窝子： 2. 0%、 化物袁 1.0%、 促进剂 0.8%、 水 余富； 所述微量金属离子为Ξ氯化铁、氯化巧、钢酸钢、氯化锋、硫酸铜、棚酸、硫酸侣中的一 种； 用憐酸盐缓冲液调抑为6. 0 ; 所述促进剂采用W下方法制备： 1) 原料处理：将穿屯、莲洗净、干制、粉碎； 2) 蒸汽爆破处理：将步骤1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破压力3.0-3.5Mpa，保压 时间维持在150-200S ; 3) 蒸馈处理：将步骤2)得到的物料放入蒸馈器，在蒸馈器底部，加热燃烧或通入蒸汽， 当炙热的蒸气充满在蒸馈器里，水蒸气通过冷凝管，被引入冷凝器内，再通过油水分离器， 收集精油； 4)高剪切均质机处理：将步骤3)得到的精油通过高剪切均质机处理，线速度30-40m/S，时间3-5min，制成纳米乳，并用微孔滤膜过滤除菌得到。3.根据权利要求1或2所述的一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，其特征在于： 所述穿屯、莲的使用量，粉碎后的体积相当于蒸汽爆破罐体积的1/4-1/3。
【专利摘要】本发明公开了一种重组人表皮生长因子发酵用培养基，该培养基由以下重量比例成分制成：甘油5.0-7.0％、酵母碱基(YNB)3.0-3.5％、微量金属离子1.8-2.2％、生物素0.5-1.0％、促进剂0.5-1.0％、水余量；所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中的一种；用磷酸盐缓冲液调pH为5.5-6.5。本发明使用的植物原料成分经过了蒸汽爆破、蒸馏、高剪切均质机处理，得到纳米乳状的植物油性成分，和培养基中其他配方的相容性好。本发明通过在培养基中添加植物原料成分作为促进剂，和现有技术相比，发酵液的产量会提高20-30％。
【IPC分类】C12P21/02
【公开号】CN105238832
【申请号】CN201510845161
【发明人】韦忠明, 黄启斌, 莫冬海, 马冲, 宫猛, 包能创
【申请人】桂林华诺威基因药业有限公司
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年11月26日